目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)體外抑制大鼠MuRF1基因表達的效果，以期篩選出針對MuRF1基因抑制效果最佳的siRNA重組質(zhì)粒。方法根據(jù)大鼠MuRF1基因的mRNA序列，設(shè)計四組干擾序列，即siRNAMuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，利用lipofactamine2000轉(zhuǎn)染試劑將siRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠成肌細胞系L6，于轉(zhuǎn)染后48h與72h，采用實時定量PCR和Westernblot或免疫印跡檢測其對MuRF1表達的抑制效果。結(jié)果1.實時定量PCR顯示四組干擾質(zhì)粒MuRF1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ對基因MuRF1的mRNA的抑制率在轉(zhuǎn)染后48h分別為67﹪、31﹪、11﹪，20﹪,不同干擾序列的抑制效果有差異（F=4.527，P=0.024）；72h分別為79﹪、59﹪、50﹪和61﹪，不同干擾序列的抑制效果有差異（F=19.088，P<0.001）,與48h相比，抑制效應(yīng)更為明顯，但以siRNAMuRF1-Ⅰ的抑制效果最為明顯（t=8.201,P<0.001）。2.使用Western印跡灰度分析顯示四組干擾序列對基因MuRF1的蛋白的抑制率在轉(zhuǎn)染后48h分別為61﹪、40﹪、9﹪，15﹪，... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：33 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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期刊論文
[1]失神經(jīng)骨骼肌萎縮中泛素蛋白連接酶Murf1和核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB表達與被動運動干預(yù)[J]. 韓利軍,梁炳生,王樂,張磊.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(24)
[2]失神經(jīng)骨骼肌萎縮與氯沙坦通過核因子κ B/MuRF1通路的延緩作用[J]. 王樂,梁炳生,李文斌,張磊,韓利軍,吳啟平.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(15)
[3]核轉(zhuǎn)錄因子-κB與肌環(huán)狀指蛋白1在失神經(jīng)肌萎縮中的表達及意義[J]. 李文斌,梁炳生,梁緒.  中華實驗外科雜志. 2010 (04)
[4]失神經(jīng)骨骼肌萎縮防治研究進展[J]. 李永平,梁炳生.  國際骨科學(xué)雜志. 2006(06)
[5]被動活動對失神經(jīng)支配骨骼肌萎縮的影響[J]. 徐建廣,顧玉東,屠永全,李繼峰.  中華顯微外科雜志. 2003(03)
[6]功能性電刺激對脊髓損傷后功能恢復(fù)的治療作用[J]. 李民,邵陽,伍亞民,廖維宏.  中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志. 2001(02)
[7]被動活動對小鼠失神經(jīng)支配肌肉萎縮的影響[J]. 陳德松,顧玉東,滿富強,劉國慶.  中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志. 1992(05)



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