目的:研究MicroRNA-576-3p與低氧條件下膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展的關(guān)系,通過體外觀察Transwell小室下層的細(xì)胞數(shù)目、劃痕實(shí)驗(yàn)中相對的遷移細(xì)胞數(shù)量以及血管形成實(shí)驗(yàn)中成管的狀態(tài),來分析miR-576-3p對低氧條件下膠質(zhì)瘤遷移能力和促血管生成能力的影響。進(jìn)一步通過雙熒光素酶報(bào)告了解miR-576-3p與HIF-1α的靶向作用關(guān)系,以期分析相關(guān)作用機(jī)制,為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的臨床相關(guān)治療提供新的見解。方法:使用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）在臨床神經(jīng)膠質(zhì)瘤樣品和低氧處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中檢測miR?576-3p的表達(dá),并分析其與膠質(zhì)瘤級別和低氧條件下的表達(dá)差異。通過構(gòu)建慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株,敲低miR-576-3p的表達(dá)并探究其對低氧處理的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和促血管生成能力的影響。此外,使用miRWalk,miRanda和TargetScan網(wǎng)站在線工具預(yù)測miR?576?3p的候選靶標(biāo)。通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測、蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）以及RT-PCR驗(yàn)證miR-576-3p與HIF-1α的作用關(guān)系。通過構(gòu)建慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株,敲低HIF-1α的表達(dá),... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 引言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 腫瘤數(shù)據(jù)庫、腦膠質(zhì)瘤與非腫瘤樣本的獲取
        2.1.2 細(xì)胞株的獲取
        2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑材料
        2.1.4 免疫組化相關(guān)試劑材料
        2.1.5 RT-qPCR相關(guān)試劑材料
        2.1.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定細(xì)胞系建立的相關(guān)試劑材料
        2.1.7 ELISA實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑材料
        2.1.8 Western Blot相關(guān)試劑材料
        2.1.9 細(xì)胞遷移能力檢測相關(guān)試劑材料
        2.1.10 血管生成檢測相關(guān)試劑材料
        2.1.11 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑材料
        2.1.12 實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存及復(fù)蘇
        2.2.2 RT-qPCR檢測樣本中各指標(biāo)的RNA表達(dá)水平
        2.2.3 臨床組織免疫組化檢測
        2.2.4 Western Blot檢測各指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平
        2.2.5 細(xì)胞質(zhì)粒與慢病毒轉(zhuǎn)染以及穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 ELISA實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 血管形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 microRNA-576-3p在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況
    3.2 microRNA-576-3p對低氧條件下神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展的影響
    3.3 microRNA-576-3p靶向HIF-1α
    3.4 在低氧條件下敲低HIF-1α的表達(dá)能抑制膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展
    3.5 低氧下回復(fù)HIF-1α的表達(dá)緩解了miR-576-3p對膠質(zhì)瘤的作用
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA-506 is up-regulated in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma and is associated with attenuated disease progression[J]. Run-Fen Cheng,Jian Wang,Jing-Yi Zhang,Lin Sun,Yan-Rui Zhao,Zhi-Qiang Qiu,Bao-Cun Sun,Yan Sun.  Chinese Journal of Cancer. 2016(12)



本文編號：3158347