目的:腦膠質(zhì)瘤是成人最常見(jiàn)的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤之一。分子靶向的研究成為目前腦膠質(zhì)瘤治療學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。本研究旨在研究微小RNA miR-150和RNA結(jié)合蛋白DAZAP1能否調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為,進(jìn)一步深入的分析其可能的分子機(jī)制,即mi R-150通過(guò)下調(diào)FOXB1抑制MMP-9和XIAP的表達(dá),抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為;DAZAP1通過(guò)穩(wěn)定長(zhǎng)鏈非編碼RNA00598（Linc00598）的表達(dá)下調(diào)FOXE1的表達(dá),抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡行生物學(xué)行為。本研究旨在為膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展提供新的依據(jù),同時(shí)為膠質(zhì)瘤的分子靶向治療提供新靶標(biāo)。研究方法:首先培養(yǎng)人的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87、U251,人正常星型膠質(zhì)細(xì)胞。應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)miR-150、FOXB1、DAZAP1、Linc00598、FOXE1,應(yīng)用Western blot檢測(cè)FOXB1、DAZAP1、FOXE1在正常腦組織、膠質(zhì)瘤組織、人正常星型膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)水平。應(yīng)用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的改變。采用Transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變。應(yīng)用流式細(xì)胞儀和PI-FITC雙染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡能力。應(yīng)用... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分 ：MiR-150負(fù)性調(diào)控FOXB1影響腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)用腦組織及細(xì)胞株
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
            2.2.4 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力
            2.2.5 細(xì)胞Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
            2.2.7 Real-timePCR
            2.2.8 WesternBlot方法檢測(cè)FOXB1、XIAP、MMP-9蛋白的表達(dá)變化
            2.2.9 裸鼠移植瘤模型
        2.3 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 MiR-150的內(nèi)源性表達(dá)以及對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響
        3.2 FOXB1是miR-150的靶基因
        3.3 miR-150通過(guò)負(fù)性調(diào)控FOXB1影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為
        3.4 過(guò)表達(dá)miR-150和FOXB1調(diào)控MMP9和XIAP的表達(dá)
        3.5 FOXB1與XIAP和MMP-9的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合
        3.6 過(guò)表達(dá)miR-150和沉默F(xiàn)OXB1抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 ：DAZAP1/Linc00598/FOXE1通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為的分子機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.2 細(xì)胞株
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            2.2.3 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
            2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.5 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
            2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)
            2.2.7 Westernblot
            2.2.8 Real-timePCR
            2.2.9 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀法（RIP）實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 半衰期實(shí)驗(yàn)
            2.2.11 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 DAZAP1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中發(fā)揮抑癌基因作用
        3.2 Linc00598在膠質(zhì)瘤組織中低表達(dá),起抑癌基因作用
        3.3 過(guò)表達(dá)DAZAP1增加Linc00598的穩(wěn)定性,抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為
        3.4 Linc00598通過(guò)負(fù)性調(diào)控FOXE1,進(jìn)而影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為
        3.5 FOXE1促進(jìn)MARK4的表達(dá),促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為
        3.6 Linc00598靶向結(jié)合FOXE1,進(jìn)而影響膠質(zhì)瘤惡性生物學(xué)行為
        3.7 過(guò)表達(dá)DAZAP1和Linc00598以及聯(lián)合應(yīng)用沉默F(xiàn)OXE1顯著抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)其生存期
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3146748