發(fā)布時間：2021-04-18 15:48

　　第一部分IGFBP-3對膠質(zhì)瘤細胞株U87MG增殖的作用及調(diào)控ERK信號通路的研究目的：探討IGFBP-3對膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響及可能的分子調(diào)控機制。方法：選用低表達IGFBP-3的膠質(zhì)瘤細胞株U87MG，分成三組即未處理組（Control）、轉(zhuǎn)染pCMV-myc質(zhì)粒組（NC）、轉(zhuǎn)染pCMV-IGFBP-3質(zhì)粒組（I），瞬時轉(zhuǎn)染U87MG細胞株，并于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育48h后，提取細胞總RNA和細胞總蛋白，采用RT-qPCR技術和Western blot方法檢測胞內(nèi)ERK1/2的mRNA和蛋白表達水平、ERK1/2的磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl-XL的表達情況。同時應用MTT法檢測經(jīng)IGFBP-3胞外刺激U87MG細胞株后細胞增殖情況及AnnexinV-FITC/PI雙染色法于流式細胞儀上檢測轉(zhuǎn)染pCMV-IGFBP-3質(zhì)粒后細胞的凋亡情況。結(jié)果：在U87MG細胞中過表達IGFBP-3后，胞內(nèi)ERK1/2的mRNA和蛋白水平無明顯變化，但磷酸化明顯增強，下游抗凋亡Bcl-XL的表達上調(diào)。MTT顯示當IGFBP-3的濃度為50ng/ml和500ng/ml時，細胞增殖顯著增加（分別為p<... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學河北省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-GalNAc-T14構(gòu)建示意

圖１ IGFBP-3 結(jié)構(gòu)示意圖于上述結(jié)構(gòu)域的一些氨基酸片段可以和其它凋亡進細胞的凋亡，如中央可變區(qū) 105-119 位點之間增強紫外線誘導的細胞死亡；C 端金屬結(jié)合域 21信號序列在血清饑餓療法和紫杉醇治療的細胞中97 位點的 IGFBP-3 片段能以非依賴 IGF-Ⅰ的方式凋亡。雖然 IGFBP-3 蛋白的結(jié)構(gòu)及相應的細胞功全確定，但已明確的結(jié)構(gòu)所發(fā)揮的 IGF-Ⅰ依賴和在的，并且調(diào)控細胞的生長、發(fā)育和凋亡。物學作用包括生長激素（GH）、Ⅰ /Ⅱ型胰島素樣生長因子（樣生子因子受體、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（解酶。以內(nèi)分泌的形式對機體生長發(fā)育中起關鍵

s 到目的組織和細胞，在細胞外環(huán)境中隔離 IGF抑制 IGF-Ⅰ的生物活性。當 IGFBP-3 被 IGFBPs 與 IGF-Ⅰ低親和的片段，增加 IGF-Ⅰ與 IGF-Ⅰ增強 IGF-Ⅰ的活性。與 IGF-ⅠR 結(jié)合后，通過S1-IRS4）、Src 同源物以及膠原質(zhì)引發(fā)細胞內(nèi)分調(diào)控下游的分子信號通路如絲裂原活化蛋白激酶 3 激酶（PI3K）/AKT 通路（RAS/Raf/Erk 和 PI、增殖和凋亡。因此 IGFBP-3 對 IGF-Ⅰ的活性（圖 2）


本文編號：3145743