第一部分IGFBP-3對膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87MG增殖的作用及調(diào)控ERK信號通路的研究目的：探討IGFBP-3對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響及可能的分子調(diào)控機(jī)制。方法：選用低表達(dá)IGFBP-3的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87MG，分成三組即未處理組（Control）、轉(zhuǎn)染pCMV-myc質(zhì)粒組（NC）、轉(zhuǎn)染pCMV-IGFBP-3質(zhì)粒組（I），瞬時轉(zhuǎn)染U87MG細(xì)胞株，并于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育48h后，提取細(xì)胞總RNA和細(xì)胞總蛋白，采用RT-qPCR技術(shù)和Western blot方法檢測胞內(nèi)ERK1/2的mRNA和蛋白表達(dá)水平、ERK1/2的磷酸化水平和抗凋亡蛋白Bcl-XL的表達(dá)情況。同時應(yīng)用MTT法檢測經(jīng)IGFBP-3胞外刺激U87MG細(xì)胞株后細(xì)胞增殖情況及AnnexinV-FITC/PI雙染色法于流式細(xì)胞儀上檢測轉(zhuǎn)染pCMV-IGFBP-3質(zhì)粒后細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果：在U87MG細(xì)胞中過表達(dá)IGFBP-3后，胞內(nèi)ERK1/2的mRNA和蛋白水平無明顯變化，但磷酸化明顯增強(qiáng)，下游抗凋亡Bcl-XL的表達(dá)上調(diào)。MTT顯示當(dāng)IGFBP-3的濃度為50ng/ml和500ng/ml時，細(xì)胞增殖顯著增加（分別為p<... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-GalNAc-T14構(gòu)建示意

圖１ IGFBP-3 結(jié)構(gòu)示意圖于上述結(jié)構(gòu)域的一些氨基酸片段可以和其它凋亡進(jìn)細(xì)胞的凋亡，如中央可變區(qū) 105-119 位點(diǎn)之間增強(qiáng)紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡；C 端金屬結(jié)合域 21信號序列在血清饑餓療法和紫杉醇治療的細(xì)胞中97 位點(diǎn)的 IGFBP-3 片段能以非依賴 IGF-Ⅰ的方式凋亡。雖然 IGFBP-3 蛋白的結(jié)構(gòu)及相應(yīng)的細(xì)胞功全確定，但已明確的結(jié)構(gòu)所發(fā)揮的 IGF-Ⅰ依賴和在的，并且調(diào)控細(xì)胞的生長、發(fā)育和凋亡。物學(xué)作用包括生長激素（GH）、Ⅰ /Ⅱ型胰島素樣生長因子（樣生子因子受體、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（解酶。以內(nèi)分泌的形式對機(jī)體生長發(fā)育中起關(guān)鍵

s 到目的組織和細(xì)胞，在細(xì)胞外環(huán)境中隔離 IGF抑制 IGF-Ⅰ的生物活性。當(dāng) IGFBP-3 被 IGFBPs 與 IGF-Ⅰ低親和的片段，增加 IGF-Ⅰ與 IGF-Ⅰ增強(qiáng) IGF-Ⅰ的活性。與 IGF-ⅠR 結(jié)合后，通過S1-IRS4）、Src 同源物以及膠原質(zhì)引發(fā)細(xì)胞內(nèi)分調(diào)控下游的分子信號通路如絲裂原活化蛋白激酶 3 激酶（PI3K）/AKT 通路（RAS/Raf/Erk 和 PI、增殖和凋亡。因此 IGFBP-3 對 IGF-Ⅰ的活性（圖 2）


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