目的：檢測C6膠質瘤細胞分泌單核細胞趨化蛋白-1以及骨髓間充質干細胞中單核細胞趨化蛋白-1受體CCR2的表達情況，并探討單核細胞趨化蛋白-1/CCR2途徑是否參與趨化骨髓間充質干細胞向膠質瘤細胞的遷移。方法：1.購買SD雄性大鼠，取股骨與脛骨，分離骨髓間充質干細胞，通過免疫細胞化學檢測骨髓間充質干細胞表面標記；2.購買C6膠質瘤細胞，進行傳代培養(yǎng)；3.收集C6膠質瘤細胞條件培養(yǎng)液，-20℃保存?zhèn)溆茫?.通過PCR對C6膠質瘤細胞中單核細胞趨化蛋白-1的DNA進行定性檢測；ELISA檢測C6膠質瘤細胞分泌單核細胞趨化蛋白-1的情況；5.通過PCR對骨髓間充質干細胞中單核細胞趨化蛋白-1受體CCR2的DNA進行定性檢測，免疫細胞化學從蛋白質水平檢測骨髓間充質干細胞中單核細胞趨化蛋白-1受體CCR2的表達；6.應用Transwell體外遷移體系檢測骨髓間充質干細胞向C6膠質瘤細胞的遷移效果，實驗分三組：A組（C6膠質瘤細胞條件培養(yǎng)液組），B組（C6膠質瘤細胞條件培養(yǎng)液組+單核細胞趨化蛋白-1抗體），C組（無血清LG-DMEM培養(yǎng)液組），計數各組遷移至Transwell趨化板下室中的骨髓間充質... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數】：35 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

所有照片均放大400倍

11MCP-1 β-actin Marker圖2 在658bp處有一條亮帶出現，符合單核細胞趨化蛋白-1基因長度。（2） ELISA應用 SPSS 軟件分析不同組別單核細胞趨化蛋白-1 濃度的差異，P<0.05，有統計學意義，見表 1。表 1 不同組別 MCP-1 濃度的差異實驗組 陰性對照組單核細胞趨化蛋白-1 濃度(pg/ml)11214.133113020.931612349.840612370.125611795.094912573.874529.268277126.306993625.323527525.323527526.306993627.2922739平均單核細胞趨化蛋白-1 濃度(pg/ml)12220.6667 26.6369標準差 632.2064 1.48467Sig. 0.000CCR2 表達（1） PCR骨髓間充質干細胞 DNA 經擴增后，2%瓊脂糖凝膠電泳，在 409bp 處有一條亮帶出現，符合 CCR2 基因長度

12CCR2 β-actin Marker圖3 在409bp處有一條亮帶出現，符合CCR2基因長度。（2） 免疫細胞化學免疫細胞化學檢測 CCR2 表達，結果顯示陰性對照組細胞核呈藍色，細胞質與細胞膜未著色；CCR2A 與 CCR2B（CCR2 兩個亞型）呈陽性表達，細胞核呈藍色，細胞質與細胞膜呈棕黃色，見圖 4。A B C圖 4 所有照片均放大 400 倍。A：陰性對照組，細胞核呈藍色，細胞質與細胞膜未著色；B：CCR2A 表達陽性，細胞核藍色，細胞質與細胞膜呈棕黃色；C:CCR2B表達陽性，細胞核呈藍色，細胞質與細胞膜呈棕黃色。Transwell 趨化實驗應用 SPSS 軟件分析不同組別下室中骨髓間充質干細胞數的差異：A 組與 B組比較


本文編號：3142441