目的：檢測(cè)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞分泌單核細(xì)胞趨化蛋白-1以及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1受體CCR2的表達(dá)情況，并探討單核細(xì)胞趨化蛋白-1/CCR2途徑是否參與趨化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移。方法：1.購買SD雄性大鼠，取股骨與脛骨，分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記；2.購買C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，進(jìn)行傳代培養(yǎng)；3.收集C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液，-20℃保存?zhèn)溆茫?.通過PCR對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1的DNA進(jìn)行定性檢測(cè)；ELISA檢測(cè)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞分泌單核細(xì)胞趨化蛋白-1的情況；5.通過PCR對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1受體CCR2的DNA進(jìn)行定性檢測(cè)，免疫細(xì)胞化學(xué)從蛋白質(zhì)水平檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白-1受體CCR2的表達(dá)；6.應(yīng)用Transwell體外遷移體系檢測(cè)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移效果，實(shí)驗(yàn)分三組：A組（C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液組），B組（C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)液組+單核細(xì)胞趨化蛋白-1抗體），C組（無血清LG-DMEM培養(yǎng)液組），計(jì)數(shù)各組遷移至Transwell趨化板下室中的骨髓間充質(zhì)... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

所有照片均放大400倍

11MCP-1 β-actin Marker圖2 在658bp處有一條亮帶出現(xiàn)，符合單核細(xì)胞趨化蛋白-1基因長度。（2） ELISA應(yīng)用 SPSS 軟件分析不同組別單核細(xì)胞趨化蛋白-1 濃度的差異，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表 1。表 1 不同組別 MCP-1 濃度的差異實(shí)驗(yàn)組 陰性對(duì)照組單核細(xì)胞趨化蛋白-1 濃度(pg/ml)11214.133113020.931612349.840612370.125611795.094912573.874529.268277126.306993625.323527525.323527526.306993627.2922739平均單核細(xì)胞趨化蛋白-1 濃度(pg/ml)12220.6667 26.6369標(biāo)準(zhǔn)差 632.2064 1.48467Sig. 0.000CCR2 表達(dá)（1） PCR骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 DNA 經(jīng)擴(kuò)增后，2%瓊脂糖凝膠電泳，在 409bp 處有一條亮帶出現(xiàn)，符合 CCR2 基因長度

12CCR2 β-actin Marker圖3 在409bp處有一條亮帶出現(xiàn)，符合CCR2基因長度。（2） 免疫細(xì)胞化學(xué)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè) CCR2 表達(dá)，結(jié)果顯示陰性對(duì)照組細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜未著色；CCR2A 與 CCR2B（CCR2 兩個(gè)亞型）呈陽性表達(dá)，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜呈棕黃色，見圖 4。A B C圖 4 所有照片均放大 400 倍。A：陰性對(duì)照組，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜未著色；B：CCR2A 表達(dá)陽性，細(xì)胞核藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜呈棕黃色；C:CCR2B表達(dá)陽性，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜呈棕黃色。Transwell 趨化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 SPSS 軟件分析不同組別下室中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)的差異：A 組與 B組比較


本文編號(hào)：3142441