目的：本課題將化學(xué)合成的特異性HER-2/neu小分子干擾RNA（HER-2siRNA）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至HER-2（人表皮生長(zhǎng)因子受體-2）陽(yáng)性的原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細(xì)胞中，觀察其對(duì)離體腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的影響。方法：本課題收集外科手術(shù)切除的新鮮人腦膜瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，用免疫細(xì)胞化學(xué)法篩選出HER-2抗體陽(yáng)性的病例作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，然后將化學(xué)合成的特異性HER-2siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HER-2陽(yáng)性的人腦膜瘤細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為四組：特異性HER-2siRNA組；陰性對(duì)照siRNA組；脂質(zhì)體組；細(xì)胞對(duì)照組。用MTT法直接測(cè)定轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的改變；用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2mRNA的水平；采用免疫細(xì)胞化學(xué)法（ICC）檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋白的水平，以及反映細(xì)胞增殖活性的Ki-67蛋白水平；WesternBlot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋白的變化。探討靶向阻斷HER-2基因后腦膜瘤在細(xì)胞水平、RNA水平和蛋白水平表達(dá)的改變，從而觀察HER-2基因與腦膜瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。結(jié)果：特異性HER-2si... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

陰性對(duì)照（20×）

3-4 熒光標(biāo)記陰性對(duì)照 siRNA 轉(zhuǎn)染效率（10×cently labeled negative control siRNA transfection A 轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察早期階段（原代至第四代），腦膜瘤細(xì)胞在，從圓形，雙極性逐漸過(guò)渡至多極性，細(xì)兩個(gè)，細(xì)胞伸出較多長(zhǎng)的偽足，相互連接制及密度抑制消失，細(xì)胞相互堆積形成漩見(jiàn)形成一個(gè)個(gè)高密度的亮白小點(diǎn)（如圖3-5間增加，腦膜瘤細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)衰老及凋亡偽足減少，包膜變平整光滑，雙核細(xì)胞數(shù)漸增多（如圖3-6）。

細(xì)胞核一個(gè)至兩個(gè)，細(xì)胞伸出較多長(zhǎng)的偽足，相互連接成網(wǎng)狀，部分區(qū)域增殖旺盛，接觸抑制及密度抑制消失，細(xì)胞相互堆積形成漩渦狀，在倒置顯微鏡下觀察，常常可見(jiàn)形成一個(gè)個(gè)高密度的亮白小點(diǎn)（如圖3-5）。HER-2 siRNA轉(zhuǎn)染后，隨著培養(yǎng)時(shí)間增加，腦膜瘤細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)衰老及凋亡的征象，如細(xì)胞體積逐漸變大，細(xì)胞偽足減少，包膜變平整光滑，雙核細(xì)胞數(shù)目減少，胞質(zhì)內(nèi)的顆粒物質(zhì)及空泡逐漸增多（如圖3-6）。3-4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]影響腦膜瘤復(fù)發(fā)及惡變的相關(guān)因素的研究進(jìn)展[J]. 馬金邦,張慶華,夏鶴春.  寧夏醫(yī)學(xué)雜志. 2010(04)
[2]HER2狀態(tài)與腦膜瘤分級(jí)及復(fù)發(fā)的相關(guān)性[J]. 王淳良,梅金紅,王珊珊,徐姍,徐林林,熊一峰.  中華病理學(xué)雜志. 2010 (03)
[3]熒光原位雜交檢測(cè)腦膜瘤中HER2基因狀態(tài)[J]. 楊玄勇,王淳良,梅金紅,徐姍,王珊珊.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2009 (11)
[4]HER2、Ki-67、TK1蛋白在腦膜瘤中的表達(dá)[J]. 王珊珊,梅金紅,王淳良,徐姍,徐林林,熊一峰,張寶紅.  江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2009(04)
[5]HER2與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移[J]. 王珊珊,梅金紅.  生命的化學(xué). 2008(05)
[6]人腦膜瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)[J]. 李軍濤,楊衛(wèi)忠,石松生,王春華,陳春美,方俊杰,楊永凱,蔡冬生.  福建醫(yī)藥雜志. 2008(04)
[7]腦膜瘤復(fù)發(fā)與微血管密度、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的關(guān)系[J]. 王淳良,梅金紅,王珊珊,徐林林,秦興義.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2008 (06)
[8]RNA interference-mediated gene silencing of vascular endothelial growth factor in colon cancer cells[J]. Tie-Jun Li Kai Kang Bing-Qiang Zhang Cai-Quan Zhang,The First Affiliated Hospital,Chongqing University of Medical Sciences,Chongqing 400016,China Jian-Ning Song Shu-sheng Tong Zan-Lan Hu,The Ninth Hospital of Chongqing,Chongqing 400700,China Tong-Chuan He,Molecular Oncology Laboratory,University of Chicago Medical Center,IL 60637,United States.  World Journal of Gastroenterology. 2007(40)
[9]RNAi technology: A Revolutionary tool for the colorectal cancer therapeutics[J]. Wei Lv, Chao Zhang, Jia Hao, Department of General Surgery, Southwest Hospital, The Third Military Medical University, Chongqing 400038, China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(29)



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