目的：本課題將化學(xué)合成的特異性HER-2/neu小分子干擾RNA（HER-2siRNA）瞬時轉(zhuǎn)染至HER-2（人表皮生長因子受體-2）陽性的原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細胞中，觀察其對離體腦膜瘤細胞增殖活性的影響。方法：本課題收集外科手術(shù)切除的新鮮人腦膜瘤組織進行原代培養(yǎng)，用免疫細胞化學(xué)法篩選出HER-2抗體陽性的病例作為實驗對象，然后將化學(xué)合成的特異性HER-2siRNA瞬時轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HER-2陽性的人腦膜瘤細胞，實驗分為四組：特異性HER-2siRNA組；陰性對照siRNA組；脂質(zhì)體組；細胞對照組。用MTT法直接測定轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞增殖活性的改變；用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞中HER-2mRNA的水平；采用免疫細胞化學(xué)法（ICC）檢測轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞中HER-2蛋白的水平，以及反映細胞增殖活性的Ki-67蛋白水平；WesternBlot法檢測轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后腦膜瘤細胞中HER-2蛋白的變化。探討靶向阻斷HER-2基因后腦膜瘤在細胞水平、RNA水平和蛋白水平表達的改變，從而觀察HER-2基因與腦膜瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。結(jié)果：特異性HER-2si... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

陰性對照（20×）

3-4 熒光標記陰性對照 siRNA 轉(zhuǎn)染效率（10×cently labeled negative control siRNA transfection A 轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細胞的形態(tài)學(xué)觀察早期階段（原代至第四代），腦膜瘤細胞在，從圓形，雙極性逐漸過渡至多極性，細兩個，細胞伸出較多長的偽足，相互連接制及密度抑制消失，細胞相互堆積形成漩見形成一個個高密度的亮白小點（如圖3-5間增加，腦膜瘤細胞開始出現(xiàn)衰老及凋亡偽足減少，包膜變平整光滑，雙核細胞數(shù)漸增多（如圖3-6）。

細胞核一個至兩個，細胞伸出較多長的偽足，相互連接成網(wǎng)狀，部分區(qū)域增殖旺盛，接觸抑制及密度抑制消失，細胞相互堆積形成漩渦狀，在倒置顯微鏡下觀察，常常可見形成一個個高密度的亮白小點（如圖3-5）。HER-2 siRNA轉(zhuǎn)染后，隨著培養(yǎng)時間增加，腦膜瘤細胞開始出現(xiàn)衰老及凋亡的征象，如細胞體積逐漸變大，細胞偽足減少，包膜變平整光滑，雙核細胞數(shù)目減少，胞質(zhì)內(nèi)的顆粒物質(zhì)及空泡逐漸增多（如圖3-6）。3-4

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3105982