研究背景脊髓是疼痛信息傳遞和整合的初級中樞,脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞監(jiān)測到周圍神經(jīng)損傷后迅速激活,釋放細(xì)胞因子等多種物質(zhì),在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。最近研究報(bào)道坐骨神經(jīng)部分損傷（Spared Nerve Injury,SNI）大鼠脊髓背角轉(zhuǎn)錄組測序提示ChREBP的表達(dá)增高。但ChREBP的表達(dá)增加是否與神經(jīng)病理性疼痛（Neuropathic Pain,NPP）有關(guān),目前尚未見報(bào)道。另有研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞中ChREBP蛋白具有顯著的抑制炎癥作用。那么,巨噬細(xì)胞樣的小膠質(zhì)細(xì)胞中ChREBP蛋白是否同樣具有顯著的抗炎作用,脊髓背角ChREBP是否通過調(diào)控炎癥反應(yīng)介導(dǎo)NPP的發(fā)生發(fā)展,目前尚不清楚。本研究以脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)為切入點(diǎn),通過基因工程技術(shù)和生物信息學(xué)方法,探究ChREBP在NPP發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機(jī)制,為NPP的治療提供新的作用靶點(diǎn)。方法第一章:構(gòu)建并驗(yàn)證SNI誘導(dǎo)機(jī)械痛敏的大鼠模型。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）、免疫印跡和免疫熒光檢測SNI術(shù)前、術(shù)后患側(cè)L4-L6脊髓背角ChREBP的表達(dá)變化,并應(yīng)用免疫熒光檢測脊髓背角ChREBP的... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：136 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１技術(shù)路線圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔｕｄｙ??

?第一章?ＳＮＩ術(shù)后大鼠脊髓背角ＣｈＲＥＢＰ蛋白的表達(dá)變化???（圖?１－２Ａ）?〇??（３）?ＳＮＩ組術(shù)后３天、７天、１４天、２１天同側(cè)的５０％?ＰＷＴ較假手術(shù)組同??側(cè)的５０％?ＰＷＴ均顯著降低（圖１－２Ａ）；而ＳＮＩ組對側(cè)的５０％ＰＷＴ和Ｓｈａｍ組??對側(cè)的５０％ＰＷＴ在術(shù)后３天、７天、１４天、２１天均無顯著性差異（圖１－２Ｂ）。??Ａ?Ｂ??２〇ｉ－－－左－－ＳＮＩ－Ｃｏｎｔｒａ?—ｅ—ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?２０－ｉ?Ｓｈａｍ－Ｃｏｎｔｒａ??Ｓｈａｍ－１?ｐｓｉ?＋ＳＮ?卜?Ｃｏｎｔｒａ??Ｓｉ〇．?＼?｜ｉ〇－??Ｑ＿?＼?Ｑ－??＾?．．．?＃＃＃?＃＃＃?＾??ｇ?５．?Ｓ?ｆｌｌ?ｓｉｓ?ＨＩ?ｇ?５－??°?巳Ｌ?３Ｄ?７Ｄ?１４Ｄ?２１Ｄ?°?ＢＬ?３Ｄ?７Ｄ?１４Ｄ?２１Ｄ??圖１－２：神經(jīng)病理性疼痛大鼠ＳＮＩ模型的建立及機(jī)械痛敏的觀察??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２：?Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ?ｏｆ?ｒａｔｓ?ｏｆ?ＳＮＩ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ?ｐａｉｎ?ａｎｄ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ??ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ??圖注：Ｖｏｎ?Ｆｒｅｙ實(shí)驗(yàn)檢測ＳＮＩ術(shù)前和術(shù)后３天、７天、１４天、２１天的機(jī)械痛敏。ＳＮＩ手術(shù)??誘發(fā)神經(jīng)損傷同側(cè)后足的機(jī)械痛敏（Ａ）；而ＳＮＩ手術(shù)對側(cè)或假手術(shù)雙側(cè)后足的機(jī)械痛敏未??發(fā)生明顯變化（Ｂ）。Ｎ＝５。＊＊＊Ｐ＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ術(shù)后各個(gè)檢測時(shí)間點(diǎn)對比術(shù)前基線；￥￥￥Ｐ??＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?對比對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)?ＳＮＩ－Ｃｏｎｔｒａ；?＃＃＃Ｐ＜０．００１，?ＳＮＩ－ｌｐｓｉ?對比對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)?

…????．…＼????！???￣￣ＳＮＩ造模前￣￣???Ｉ?｜行為學(xué)檢測??脊髓顯微注射后第２?８天??ＳＮＩ造模????＾?Ｗ?—％???〇廣〇?ｍ后／天體執(zhí)祐也?ＳＭ丨術(shù)后７天?ＳＮＩ術(shù)后３Ｄ、７Ｄ、??ｑ檢測ｃｆＳ敲Ｓ?ｑ瞞測炎涵子酸化⑷、■行為學(xué)檢測??１?７．．．．．．．?．．．．．．????ｉ?－?－．．．．．．．．一１??敲減脊髓背角ＣｈＲＥＢＰ的表達(dá)對脊髓背角??炎癥水平和機(jī)械痛敏的影晌??圖２－１技術(shù)路線圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｔｕｄｙ??２．２．２大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷模型??同第一章節(jié)大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷模型部分。??２．２．３脊髓背角立體定向顯微注射??（１）儀器和設(shè)備的準(zhǔn)備（圖２－１）：用移液管顯微拉制儀將玻璃拉制移液器??（玻璃電極）的尖端直徑拉制為約１００ｐｍ，隨后用移液管磨針器將玻璃電極的??尖端磨制為傾斜２５°。預(yù)先將顯微注射器（適配器）安裝連接到顯微注射泵控??制器。設(shè)置顯微注射栗程序，參數(shù)如下：注射速度２００ｎＬ／ｍｉｎ，注射時(shí)間５ｍｉｎ，??注射總量ｌ＾Ｌ。??３４??


本文編號：3093304