背景:髓母細胞瘤（medulloblastoma,MB）是兒童腦內(nèi)最常見的惡性腫瘤。MB發(fā)生率占所有兒童腦腫瘤的近10%。MB具有高侵襲、易擴散、難根治等特點。目前髓母細胞瘤的治療包括手術的完全切除及術后全腦和脊髓的放療、化療。隨著治療手段的日益進步,5年生存率提高到50-80%,但術后放療、化療造成兒童認知功能障礙,出現(xiàn)嚴重的不良預后。現(xiàn)急需進一步探索MB的發(fā)病機制,并開發(fā)新的、有效且副作用較小的治療方法。隨著miRNA在疾病中的作用及機制的發(fā)現(xiàn),miRNA在MB中的功能和作用被逐漸揭秘。已證明miRNA-128-3p在多種疾病及腫瘤中表達下調(diào),并與疾病的發(fā)生、發(fā)展及預后相關。但miRNA-128-3p對MB發(fā)生、發(fā)展中的影響及其機制仍需進一步研究。目的:1.通過生物信息學查找MB組織中差異表達miRNA,分析miRNA-128-3p在MB組織中的表達。2.選擇DAOY細胞為研究對象研究miRNA-128-3p對MB細胞增殖、遷移、侵襲及凋亡的影響。3.預測并驗證miRNA-128-3p的靶基因,研究miRNA-128-3p抑制MB生長的分子機制。方法:1.利用生物信息學網(wǎng)站篩選出m... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

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髓母細胞瘤數(shù)據(jù)庫中miRNA差異表達聚類熱圖

miRNA-128-3p靶向調(diào)控Musashi-1抑制蘭州大學碩士學位論文髓母細胞瘤生長的機制研究202.5實驗結(jié)果2.5.1轉(zhuǎn)染效率驗證我們將miRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染DAOY細胞，設定轉(zhuǎn)染時間為24h、48h、72h、96h，選擇U6為內(nèi)參，用qRT-PCR對細胞內(nèi)的miRNA-128-3p進行定量分析。結(jié)果顯示DAOY細胞在50nMmiRNA-128-3pmimic濃度轉(zhuǎn)染下，轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分別上升了238倍、569倍、297倍、165倍。DAOY細胞在100nMmiRNA-128-3pmimic濃度轉(zhuǎn)染下，轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分別上升了83倍、259倍、255倍、93倍。miRNA-128-3p在50nM和100nM濃度轉(zhuǎn)染后，可以穩(wěn)定存在72h，甚至達到96h。見圖2-1。miRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染組和陰性對照組（NC組）有明顯的統(tǒng)計學差異。我們選擇50nMmiRNA-128-3pmimic濃度作為細胞功能實驗的轉(zhuǎn)染濃度。圖2-150nM和100nMmiRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染DAOY細胞24h、48h、72h、96h后，qRT-PCR實驗檢測表達量。（*）=p＜0.05。2.5.2細胞劃痕實驗轉(zhuǎn)染后48h，細胞劃痕后24h和48h拍照并分析，miRNA-128-3p轉(zhuǎn)染組的24h細胞遷移率為（30.4±5.35）%，48h細胞遷移率為（37.58±10.12）%，陰性對照（NC）組24h細胞遷移率為（48.01±5.87）%，48h細胞遷移率為（75.36±3.41）%，經(jīng)過SPSS23.0和Graphpad8.0軟件分析統(tǒng)計，24h有統(tǒng)計學差異P＜0.05，48h有明顯統(tǒng)計學差異P＜0.01。見圖2-2。miRNA-128-3p可抑制MBDAOY細胞遷移。

miRNA-128-3p靶向調(diào)控Musashi-1抑制蘭州大學碩士學位論文髓母細胞瘤生長的機制研究23圖2-4A：50nMmiRNA-128-3p轉(zhuǎn)染DAOY細胞遷移和侵襲情況（400倍）；B：細胞遷移定量結(jié)果；C：細胞侵襲定量結(jié)果。（**）=p＜0.01。2.5.5流式細胞實驗DAOY細胞轉(zhuǎn)染50nMmiRNA-128-3pmimic和陰性對照（NC），轉(zhuǎn)染后48h，流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染組凋亡率為（18.89±9.62）%，NC組凋亡率為（5.64±1.03）%，轉(zhuǎn)染組和NC組具有顯著統(tǒng)計學差異，p＜0.01。見圖2-5。細胞早期凋亡和晚期凋亡都存在差異，結(jié)果表明，miRNA-128-3p能都誘導MBDAOY細胞發(fā)生凋亡。


本文編號：3090595