發(fā)布時間：2021-03-20 07:14

　　背景:髓母細(xì)胞瘤（medulloblastoma,MB）是兒童腦內(nèi)最常見的惡性腫瘤。MB發(fā)生率占所有兒童腦腫瘤的近10%。MB具有高侵襲、易擴散、難根治等特點。目前髓母細(xì)胞瘤的治療包括手術(shù)的完全切除及術(shù)后全腦和脊髓的放療、化療。隨著治療手段的日益進(jìn)步,5年生存率提高到50-80%,但術(shù)后放療、化療造成兒童認(rèn)知功能障礙,出現(xiàn)嚴(yán)重的不良預(yù)后。現(xiàn)急需進(jìn)一步探索MB的發(fā)病機制,并開發(fā)新的、有效且副作用較小的治療方法。隨著miRNA在疾病中的作用及機制的發(fā)現(xiàn),miRNA在MB中的功能和作用被逐漸揭秘。已證明miRNA-128-3p在多種疾病及腫瘤中表達(dá)下調(diào),并與疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)。但miRNA-128-3p對MB發(fā)生、發(fā)展中的影響及其機制仍需進(jìn)一步研究。目的:1.通過生物信息學(xué)查找MB組織中差異表達(dá)miRNA,分析miRNA-128-3p在MB組織中的表達(dá)。2.選擇DAOY細(xì)胞為研究對象研究miRNA-128-3p對MB細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡的影響。3.預(yù)測并驗證miRNA-128-3p的靶基因,研究miRNA-128-3p抑制MB生長的分子機制。方法:1.利用生物信息學(xué)網(wǎng)站篩選出m... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

髓母細(xì)胞瘤數(shù)據(jù)庫中miRNA差異表達(dá)聚類熱圖

miRNA-128-3p靶向調(diào)控Musashi-1抑制蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文髓母細(xì)胞瘤生長的機制研究202.5實驗結(jié)果2.5.1轉(zhuǎn)染效率驗證我們將miRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染DAOY細(xì)胞，設(shè)定轉(zhuǎn)染時間為24h、48h、72h、96h，選擇U6為內(nèi)參，用qRT-PCR對細(xì)胞內(nèi)的miRNA-128-3p進(jìn)行定量分析。結(jié)果顯示DAOY細(xì)胞在50nMmiRNA-128-3pmimic濃度轉(zhuǎn)染下，轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分別上升了238倍、569倍、297倍、165倍。DAOY細(xì)胞在100nMmiRNA-128-3pmimic濃度轉(zhuǎn)染下，轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分別上升了83倍、259倍、255倍、93倍。miRNA-128-3p在50nM和100nM濃度轉(zhuǎn)染后，可以穩(wěn)定存在72h，甚至達(dá)到96h。見圖2-1。miRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染組和陰性對照組（NC組）有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。我們選擇50nMmiRNA-128-3pmimic濃度作為細(xì)胞功能實驗的轉(zhuǎn)染濃度。圖2-150nM和100nMmiRNA-128-3pmimic轉(zhuǎn)染DAOY細(xì)胞24h、48h、72h、96h后，qRT-PCR實驗檢測表達(dá)量。（*）=p＜0.05。2.5.2細(xì)胞劃痕實驗轉(zhuǎn)染后48h，細(xì)胞劃痕后24h和48h拍照并分析，miRNA-128-3p轉(zhuǎn)染組的24h細(xì)胞遷移率為（30.4±5.35）%，48h細(xì)胞遷移率為（37.58±10.12）%，陰性對照（NC）組24h細(xì)胞遷移率為（48.01±5.87）%，48h細(xì)胞遷移率為（75.36±3.41）%，經(jīng)過SPSS23.0和Graphpad8.0軟件分析統(tǒng)計，24h有統(tǒng)計學(xué)差異P＜0.05，48h有明顯統(tǒng)計學(xué)差異P＜0.01。見圖2-2。miRNA-128-3p可抑制MBDAOY細(xì)胞遷移。

miRNA-128-3p靶向調(diào)控Musashi-1抑制蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文髓母細(xì)胞瘤生長的機制研究23圖2-4A：50nMmiRNA-128-3p轉(zhuǎn)染DAOY細(xì)胞遷移和侵襲情況（400倍）；B：細(xì)胞遷移定量結(jié)果；C：細(xì)胞侵襲定量結(jié)果。（**）=p＜0.01。2.5.5流式細(xì)胞實驗DAOY細(xì)胞轉(zhuǎn)染50nMmiRNA-128-3pmimic和陰性對照（NC），轉(zhuǎn)染后48h，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染組凋亡率為（18.89±9.62）%，NC組凋亡率為（5.64±1.03）%，轉(zhuǎn)染組和NC組具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，p＜0.01。見圖2-5。細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡都存在差異，結(jié)果表明，miRNA-128-3p能都誘導(dǎo)MBDAOY細(xì)胞發(fā)生凋亡。


本文編號：3090595