目的:在缺血性卒中的發(fā)病機制中,缺血腦組織內(nèi)的局部炎癥以及全身免疫抑制作用起著關鍵的作用,但是對于缺血后處理（Ischemia postconditioning,IPostC）是如何影響缺血腦組織的局部炎癥及中樞和外周免疫細胞的研究較少,相關機制還不十分明確。在本研究中,我們利用C57/BL6小鼠建立了IPostC模型,探索IPostC的神經(jīng)保護作用。通過使用質(zhì)譜流式細胞技術(shù)（CyTOF）,量化了缺血再灌注損傷后的免疫細胞表型,研究細胞表面標記物的表達水平的變化,明確外周血和腦組織中免疫細胞相關的信號通路與缺血性卒中引起的神經(jīng)炎癥之間的關系。進一步闡述缺血后處理是如何影響缺血腦組織免疫細胞的浸潤,以及與卒中誘導的免疫抑制相關的淋巴細胞減少癥。在腦缺血再灌注損傷中,氧化應激起著重要的作用。富馬酸二甲酯及其代謝產(chǎn)物富馬酸單甲酯是抗氧化劑,可以通過激活核因子紅細胞-2相關因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶-1（HO-1）途徑從而誘導下游抗氧化蛋白的表達。在本研究中,我們進一步闡述了DMF在缺血性卒中急性和亞急性期對再灌注損傷的作用,以及這種作用是否與Nrf2途徑的激活相關。鑒于DMF與MMF有... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

IPostC減小梗死體積和改善神經(jīng)功能缺損評分

外側(cè)紋狀體（區(qū)域 2）。側(cè)支循環(huán)供應示意圖。（C）在缺血 15 分鐘時，只有輕微的皮質(zhì)下?lián)p傷，見于背外側(cè)紋狀體。缺血 30 分鐘時，梗死迅速增加并且明顯在腹內(nèi)側(cè)紋狀體。缺血 45 分鐘時觀察到嚴重的皮質(zhì)損傷。1.2.3 缺血后處理抑制了腦內(nèi)病灶側(cè)皮層區(qū)域的炎癥水平為了進一步明確缺血后處理是否能有效減輕腦內(nèi)不同區(qū)域的炎癥水平，我們將小鼠腦組織分為病灶側(cè)皮層和病灶側(cè)基底節(jié)區(qū)兩部分。結(jié)果表明，在梗死側(cè)半球，皮層的炎癥因子升高的水平要高于基底節(jié)區(qū)，IPostC明顯抑制了同側(cè)皮層TNF-α，IL-1β，IL-6的表達水平。只有CCL2在同側(cè)皮層和基底節(jié)都被抑制（圖4）。我們的結(jié)果提示，在腦缺后，梗死側(cè)皮層的炎癥反應最活躍，這可能跟這一區(qū)域側(cè)枝循環(huán)豐富，再灌注損傷更加嚴重有關，而IPostC可以明顯抑制這一區(qū)域的炎癥水平。

質(zhì)譜流式細胞儀的核心是兩個實驗平臺的融合：流式細胞術(shù)和元素質(zhì)譜分析法（圖 1）。常規(guī)流式細胞術(shù)利用熒光團作為標記，通過量化發(fā)射光來定量分析分子的表達。但是，熒光團發(fā)射光譜較寬，相互間有重疊，當單一實驗中有多個參數(shù)時就更難以區(qū)分，因此需要復雜的補償計算來解決光譜重疊問題。相反，元素質(zhì)譜是能夠精準的區(qū)分不同原子量的同位素。質(zhì)譜流式細胞術(shù)利用了耦合探針與穩(wěn)定的重金屬同位素相連。從而將特定質(zhì)譜通道中檢測到的離子信號轉(zhuǎn)變成分子信號表達，幾乎沒有參數(shù)間的信號重疊，省去了復雜的補償計算。當進行質(zhì)譜流式細胞實驗時，感興趣的細胞首先與具有親和力的抗體混合物進行孵育。這些抗體先前已被結(jié)合到純化的穩(wěn)定的重金屬同位素上[91, 92]。這些探針與目的細胞表面和/或細胞內(nèi)結(jié)合。然后將單細胞懸液通過噴霧器進入質(zhì)譜流式細胞儀中。進入儀器后，細胞穿過氬氣等離子體，其中共價鍵被打破，產(chǎn)生自由離子。離子云通過一個四極桿以去除共同的生物元素，富集成重金屬信號離子，在質(zhì)譜儀中通過它們的質(zhì)荷比分開。離子計數(shù)轉(zhuǎn)換為電信號，這些信號被整合轉(zhuǎn)化為單細胞事件供分析（圖 5）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder.  World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)



本文編號：3075348