本文關(guān)鍵詞：富馬酸二甲酯對實驗性自身免疫性神經(jīng)炎治療作用及機制的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的:吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)是感染后發(fā)病的、免疫介導(dǎo)的外周神經(jīng)和神經(jīng)根的急性脫髓鞘疾病。是目前急性弛緩性癱瘓最常見病因,也是神經(jīng)內(nèi)科急癥的主要病癥。目前證實有效的治療方法分別是血漿置換和靜脈輸注免疫球蛋白。但無論患者是否接受免疫治療,仍有20%的病人遺留嚴重后遺癥,5%的病人死亡。實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(experimental autoimmune neuritis,EAN)是研究吉蘭-巴雷綜合征的經(jīng)典的動物模型,有效模擬了吉蘭-巴雷綜合征的臨床、組織病理和電生理特點,廣泛用于探索吉蘭-巴雷綜合征的治療方法。富馬酸二甲酯(dimethyl fumarate,DMF)是富馬酸酯類的碳水化合物,具有多種生物活性,包括各種免疫調(diào)節(jié)和神經(jīng)保護作用,已被美國食品藥品管理局批準用于治療復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化。但目前關(guān)于富馬酸二甲酯在自身免疫性神經(jīng)炎中的作用機制卻尚不清楚。本項研究以EAN大鼠為研究對象,研究富馬酸二甲酯對EAN的預(yù)防和治療作用并探討其作用機制。方法:乳化P0180-199肽段后,誘導(dǎo)Lewis大鼠成模。將造模后的大鼠隨機分組,分為對照組,預(yù)防用藥組和治療用藥組。采用雙盲法觀察并評分大鼠每天的臨床癥狀。在疾病高峰期,即免疫后第16天,進行坐骨神經(jīng)肌電圖檢測評估坐骨神經(jīng)電生理受損情況,指標包括復(fù)合肌肉動作電位(compound muscle action potential,CMAP)波幅、潛伏期和運動神經(jīng)傳導(dǎo)速度(motor nerve conduction velocity,MNCV)。在疾病高峰期,對大鼠坐骨神經(jīng)進行取材,準備進行組織病理學(xué)檢測評估炎癥細胞浸潤和脫髓鞘情況,并進行免疫熒光檢測分析巨噬細胞分型情況;同時提取坐骨神經(jīng)總蛋白,進行蛋白印跡分析,探討富馬酸二甲酯的作用通路。在疾病高峰期,對大鼠脾臟取材,提取單個核細胞,分析淋巴細胞增殖情況,應(yīng)用聚合酶鏈式反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測炎性細胞因子表達情況及應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞分型情況。體外培養(yǎng)哺乳動物永生化巨噬細胞株RAW264.7,誘導(dǎo)其分化為M1型巨噬細胞,并采用細胞免疫熒光法和聚合酶鏈式反應(yīng)法探討富馬酸二甲酯對巨噬細胞分化的直接作用。采用曼-惠特尼u檢驗進行數(shù)據(jù)分析,比較對照組和用藥組的差別。結(jié)果:富馬酸二甲酯干預(yù)組可明顯改善EAN的臨床癥狀,并減輕外周神經(jīng)受損程度。坐骨神經(jīng)的組織病理學(xué)結(jié)果顯示,富馬酸二甲酯明顯減輕了坐骨神經(jīng)中炎癥細胞的浸潤及神經(jīng)的脫髓鞘程度。進一步免疫熒光檢測證實,富馬酸二甲酯可以減少坐骨神經(jīng)中浸潤的促炎性M1型巨噬細胞的數(shù)目,同時卻可以增加抗炎性M2型巨噬細胞的數(shù)目。這種現(xiàn)象在脾臟單個核細胞中也可以通過流式細胞術(shù)觀察到,即在富馬酸二甲酯干預(yù)組中單個核細胞中的M1型巨噬細胞比例較對照組是下降的,而M2巨噬細胞的比例則是升高的。將富馬酸二甲酯直接作用于巨噬細胞系RAW264.7的體外實驗也可以觀察到巨噬細胞更少向M1分化而更多向M2型巨噬細胞分化的情況,說明巨噬細胞更多的向M2型分化的現(xiàn)象是與富馬酸二甲酯的作用直接相關(guān)的。坐骨神經(jīng)總蛋白的蛋白印跡分析及免疫熒光結(jié)果均表明抗氧化轉(zhuǎn)錄因子核因子紅系衍生的相關(guān)因子2(Nrf2)和其下游產(chǎn)物血紅素加氧酶1(HO-1)水平升高,表明富馬酸二甲酯的對EAN的治療作用及對巨噬細胞分化的影響與Nrf2-HO-1通路的激活有關(guān)。此外,脾臟單個核細胞的培養(yǎng)上清的酶聯(lián)免疫吸附試驗和單個核細胞的聚合酶鏈式反應(yīng)結(jié)果顯示富馬酸二甲酯可以改善自身免疫性神經(jīng)炎的外周炎癥環(huán)境。結(jié)論:實驗證明富馬酸二甲酯可以有效改善EAN的臨床癥狀及外周神經(jīng)損傷程度。作用機制包括富馬酸二甲酯促進外周巨噬細胞向M2型分化,這可能和抗氧化通路Nrf2-HO-1活性增強有關(guān)。此外,外周炎癥環(huán)境的改善也和富馬酸二甲酯的治療作用有關(guān)。這些結(jié)果提示富馬酸二甲酯是治療多發(fā)性外周神經(jīng)炎的重要候選藥物。
【關(guān)鍵詞】：實驗性自身免疫性神經(jīng)炎 巨噬細胞 富馬酸二甲酯 吉蘭-巴雷綜合征 細胞因子
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 對象和方法16-33
• 1 材料16-20
• 1.1 實驗動物16
• 1.2 實驗試劑16-18
• 1.3 主要儀器設(shè)備及耗材18-19
• 1.4 主要試劑的配制19-20
• 2 實驗方法20-33
• 2.1 EAN模型的制備、臨床評分及給藥20-21
• 2.2 神經(jīng)電生理檢測21
• 2.3 組織病理學(xué)檢測21-23
• 2.4 免疫熒光檢測23-24
• 2.5 流式細胞術(shù)24-25
• 2.6 蛋白質(zhì)印跡分析25-28
• 2.7 實時聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)28-30
• 2.8 體外細胞實驗30-31
• 2.9 淋巴增殖實驗——MTS31
• 2.10 ELISA測細胞培養(yǎng)上清中細胞因子的水平31-32
• 2.11 統(tǒng)計學(xué)分析32-33
• 結(jié)果33-42
• 1. 富馬酸二甲酯改善了EAN大鼠的癥狀33-34
• 2. 富馬酸二甲酯減輕了外周神經(jīng)中炎癥細胞浸潤和脫髓鞘的程度34
• 3. 富馬酸二甲酯改善了EAN大鼠的外周神經(jīng)損傷34-35
• 4. 富馬酸二甲酯促進了EAN大鼠坐骨神經(jīng)中巨噬細胞向M2型轉(zhuǎn)變35-36
• 5. 富馬酸二甲酯促進了EAN大鼠脾臟中巨噬細胞向M2型轉(zhuǎn)變36-37
• 6. 富馬酸二甲酯促進了體外試驗中巨噬細胞RAW264. 7 向M2型分化37-38
• 7. 富馬酸二甲酯促進了EAN大鼠坐骨神經(jīng)中Nrf2和HO-1 的表達38-39
• 8. 富馬酸二甲酯抑制淋巴細胞增殖39
• 9. 富馬酸二甲酯改變了外周炎性細胞因子表達譜39-42
• 討論42-47
• 1. 實驗藥物的選擇42-43
• 2. 動物模型的特點43
• 3. 富馬酸二甲酯對EAN的療效評價43-44
• 4. 富馬酸二甲酯對EAN中M1/M2巨噬細胞分化的影響和機制44-45
• 5. 富馬酸二甲酯對EAN中的炎性環(huán)境變化的影響45-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述 吉蘭-巴雷綜合征治療進展54-65
• 綜述參考文獻61-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

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本文編號：307285