本文關(guān)鍵詞：周細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血后微血管痙攣及微循環(huán)障礙中作用機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是通常由顱內(nèi)動(dòng)脈瘤破裂引起的臨床常見腦血管意外。由于其發(fā)病青睞青壯年人群,加之引起的致死致殘率居高不下、臨床治療效果欠佳,給社會(huì)經(jīng)濟(jì)和家庭生活帶來了極為沉重的負(fù)擔(dān)。近十年來的研究表明,蛛網(wǎng)膜下腔出血高死殘率的主要?dú)w因于SAH后繼發(fā)的早期腦損傷(Early brain injury,EBI)。故而,針對(duì)SAH后EBI病理致?lián)p機(jī)制展開研究,預(yù)期篩選新的有效的治療靶標(biāo),以期提高臨床患者的神經(jīng)功能預(yù)后,具有極為現(xiàn)實(shí)的社會(huì)意義。早期腦損傷是蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期(72小時(shí)內(nèi))發(fā)生的一系列復(fù)雜的病理生理機(jī)制,包括顱內(nèi)壓(Intracranial pressure,ICP)升高、灌注壓(Cerebral perfusion pressure,CPP)下降、腦血流(Cerebral blood flow,CBF)下降、腦積水、離子穩(wěn)態(tài)失衡、細(xì)胞死亡、血腦屏障破壞、腦水腫等,最終導(dǎo)致腦微循環(huán)灌注不足,引起微循環(huán)障礙。微循環(huán)障礙導(dǎo)致的腦缺血缺氧損傷是蛛網(wǎng)膜下腔出血后最嚴(yán)重的并發(fā)癥。微血栓形成、微血管痙攣、腦血流自調(diào)節(jié)下降等促成微循環(huán)障礙,其中,微血管痙攣表現(xiàn)為管壁增厚、管腔狹窄、紅細(xì)胞流動(dòng)受阻,直接阻礙腦組織血供,導(dǎo)致腦缺血缺氧損傷。因此,緩解蛛網(wǎng)膜下腔出血后微血管痙攣是減輕微循環(huán)障礙,降低早期腦損傷,降低死殘率的一條有效途徑。周細(xì)胞是一類多能性細(xì)胞,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),其主要定植于微血管基膜周邊,通過對(duì)微循環(huán)血管進(jìn)行調(diào)控,進(jìn)而參與完整血腦屏障的維持或參與生理病理?xiàng)l件下腦組織微血管的再生作用。近年來,周細(xì)胞在病理?xiàng)l件下調(diào)控微循環(huán)的作用得到重視。研究表明,周細(xì)胞在缺氧或者電刺激下誘發(fā)微血管收縮,阻斷紅細(xì)胞流動(dòng),導(dǎo)致微循環(huán)障礙。周細(xì)胞在高血壓、腦缺血、心肌梗塞等疾病的微循環(huán)調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用,這可能與周細(xì)胞表達(dá)一些肌動(dòng)蛋白(如α-SMA)具有收縮功能有關(guān),但是周細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血中的作用仍然缺乏研究。此外,在SAH后腦血管痙攣及微循環(huán)調(diào)節(jié)過程中,內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)在眾多調(diào)控因子中發(fā)揮重要的作用。e NOS源性的一氧化氮(NO)信號(hào)系統(tǒng)是調(diào)節(jié)腦血流動(dòng)力學(xué)的重要機(jī)制。已有研究表明,一氧化氮含量可激活周細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),且能被蛛網(wǎng)膜下腔出血后釋放的血紅蛋白清除,提示周細(xì)胞可能通過響應(yīng)一氧化氮信號(hào),發(fā)生表型轉(zhuǎn)換,調(diào)節(jié)血管功能。因此我們推測(cè),蛛網(wǎng)膜下腔出血后一氧化氮信號(hào)被抑制,激活周細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)換,周細(xì)胞介導(dǎo)微血管痙攣,進(jìn)而導(dǎo)致微循環(huán)障礙,最終引起蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷。為了驗(yàn)證上述假說,本研究分二部分進(jìn)行。第一部分采用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓刺破法建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,分別給予enos抑制劑l-nna以及其激動(dòng)劑scutellarin,活體觀察微血管痙攣,免疫熒光檢測(cè)周細(xì)胞表達(dá),在體觀測(cè)干預(yù)后對(duì)大鼠死亡率、體重、神經(jīng)功能缺損、腦組織含水量、血腦屏障通透性損害的影響,并通過he及免疫組化染色檢測(cè)蛛網(wǎng)膜下腔出血后血紅蛋白的分布。通過第一部分的在體實(shí)驗(yàn)明確周細(xì)胞是否介導(dǎo)了蛛網(wǎng)膜下腔出血后微血管痙攣,進(jìn)而惡化了微循環(huán),明確scutellarin干預(yù)enos源性的no后是否緩解微血管痙攣,減輕蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷。第二部分通過建立大鼠腦周細(xì)胞培養(yǎng)體系和腦片微循環(huán)研究模型,用血紅蛋白處理腦片和細(xì)胞,再用一氧化氮清除劑ptio以及其緩釋劑deta/no進(jìn)行干預(yù),腦片模型觀測(cè)干預(yù)后微血管在周細(xì)胞處收縮的情況;在各時(shí)相點(diǎn),采用rt-pcr檢測(cè)周細(xì)胞α-sma核酸轉(zhuǎn)錄水平、wb檢測(cè)其蛋白表達(dá)變化。通過第二部分的離體實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確血紅蛋白誘導(dǎo)的一氧化氮信號(hào)抑制在周細(xì)胞表性轉(zhuǎn)換以及微血管痙攣中的作用。方法:第一部分(在體):采用血管內(nèi)穿刺法,建立了sd大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型;將動(dòng)物隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(sham)、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(sah+vehicle)、l-nna干預(yù)組(sah+l-nna)以及scutellarin干預(yù)組(sah+scutellarin)。1、活體熒光成像檢測(cè)大鼠腦表層微血管痙攣及微循環(huán)障礙情況;2、分別測(cè)定大鼠體重變化、死亡率、出血量、腦組織含水量、神經(jīng)功能缺損、血腦屏障通透性變化;3、生化檢測(cè)腦組織enos活性及no含量,wb檢測(cè)一氧化氮合酶各亞型蛋白表達(dá);4、組織學(xué)檢測(cè):免疫熒光檢測(cè)sah后周細(xì)胞pdgfrβ及α-sma表達(dá);免疫組化及he染色檢測(cè)sah后血紅蛋白的分布;第二部分(離體):為了直接觀測(cè)血紅蛋白對(duì)微血管痙攣的作用,建立大鼠腦片模型,并分別用人工腦脊液、血紅蛋白、ptio、l-nna以及deta/no灌流腦片;為了觀察血紅蛋白和no信號(hào)對(duì)周細(xì)胞α-sma表達(dá)的影響,建立大鼠腦周細(xì)胞離體培養(yǎng)模型,并將細(xì)胞分為4組:空白對(duì)照組(control)、血紅蛋白處理組(hb)、ptio干預(yù)組(hb+ptio)、deta/no干預(yù)組(hb+deta/no)。1、用不同藥物處理腦片后,正置紅外顯微鏡下觀測(cè)微血管收縮,及局部微循環(huán)變化;2、采用wb及rt-pcr檢測(cè)各組周細(xì)胞α-sma蛋白及mrna表達(dá);3、生化檢測(cè)各組培養(yǎng)液一氧化氮含量;4、分別用hb及ptio孵育細(xì)胞0h、3h、6h、12h,采用wb及rt-pcr檢測(cè)各組周細(xì)胞α-sma蛋白及mrna表達(dá);5、ptio預(yù)處理細(xì)胞6小時(shí)后,再用不同濃度(0mm、0.1mm、1mm、10mm)deta/no及8-br-cgmp孵育細(xì)胞3小時(shí),wb檢測(cè)周細(xì)胞α-sma表達(dá);結(jié)果:第一部分(在體):1、蛛網(wǎng)膜下腔出血后3小時(shí),觀察到腦皮層微血管痙攣,微循環(huán)障礙。給予scutellarin干預(yù)后微血管痙攣的數(shù)量及程度都得以緩解,給予l-nna處理后,微血管痙攣加重;2、蛛網(wǎng)膜下腔出血后各組體重、出血量變化無明顯差異;scutellarin可以減輕大鼠sah后的神經(jīng)功能缺損,緩解腦水腫程度,降低血腦屏障通透性損害。l-nna加重sah大鼠神經(jīng)功能障礙,對(duì)腦組織水腫程度,血腦屏障通透性無顯著影響。3、蛛網(wǎng)膜下腔出血后enos蛋白的表達(dá)及活性下降,一氧化氮含量減少。scutellarin能特異性的上調(diào)enos表達(dá),升高其活性,緩解sah后一氧化氮的急劇下降。給予l-nna處理后進(jìn)一步降低sah大鼠腦組織enos表達(dá)及活性,加劇sah后一氧化氮的下降;4、大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后血紅蛋白釋放,在早期(6小時(shí))就可侵入腦實(shí)質(zhì)。同時(shí),周細(xì)胞pdgfrβ和α-sma在蛛網(wǎng)膜下腔出血后表達(dá)也增強(qiáng);第二部分(離體):1、血紅蛋白誘導(dǎo)腦片微血管痙攣,收縮發(fā)生在周細(xì)胞樣細(xì)胞處。deta/no和腦脊液灌洗均能緩解血紅蛋白導(dǎo)致的微血管痙攣。單獨(dú)用ptio和l-nna灌流腦片也能在微血管周細(xì)胞樣細(xì)胞處誘發(fā)收縮。2、血紅蛋白誘導(dǎo)周細(xì)胞α-sma表達(dá)增強(qiáng)。一氧化氮緩釋劑deta/no干預(yù)可阻斷血紅蛋白的作用。給予一氧化氮清除劑ptio后進(jìn)一步增強(qiáng)α-sma表達(dá)。3、血紅蛋白及PTIO均能使培養(yǎng)液中的一氧化氮含量顯著下降,DETA/NO能逆轉(zhuǎn)血紅蛋白誘導(dǎo)的一氧化氮濃度降低。4、血紅蛋白及PTIO使周細(xì)胞α-SMA蛋白及m RNA表達(dá)在12小時(shí)內(nèi)上調(diào)。5、誘導(dǎo)PTIO清除培養(yǎng)液中的一氧化氮后,給予一氧化氮緩釋劑DETA/NO或者c GMP類似物8-Br-cGMP均能下調(diào)周細(xì)胞α-SMA表達(dá)。結(jié)論:1.蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期e NOS表達(dá)及活性降低,NO濃度下降,周細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換,微血管痙攣以及微循環(huán)障礙。2.Scutellarin通過上調(diào)e NOS表達(dá)及活性,升高NO濃度,緩解SAH后微血管痙攣及早期腦損傷。3.血紅蛋白在SAH后早期侵入腦實(shí)質(zhì),通過清除NO,抑制NO/cGMP信號(hào),上調(diào)周細(xì)胞α-SMA的表達(dá),誘導(dǎo)微血管痙攣。4.NO緩釋劑DETA/NO能升高NO含量,阻斷血紅蛋白誘導(dǎo)的周細(xì)胞α-SMA表達(dá)上調(diào),緩解微血管痙攣。
【關(guān)鍵詞】：蛛網(wǎng)膜下腔出血 早期腦損傷 微循環(huán) 微血管痙攣 周細(xì)胞 一氧化氮
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.35
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-11
• 中文摘要11-15
• 第一章 前言15-17
• 第二章 周細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血后微血管痙攣及微循環(huán)障礙中的作用17-52
• 2.1 材料和方法17-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-46
• 2.3 討論46-51
• 2.4 小結(jié)51-52
• 第三章 血紅蛋白在微血管痙攣以及周細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換中的作用及機(jī)制研究52-79
• 3.1 材料與方法53-61
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果61-75
• 3.3 討論75-77
• 3.4 小結(jié)77-79
• 全文總結(jié)79-80
• References80-85
• 文獻(xiàn)綜述 周細(xì)胞在出血性卒中中的作用85-97
• 參考文獻(xiàn)92-97
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文97-98
• 致謝98

【參考文獻(xiàn)】

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1 李維業(yè),劉熙樸,葉曉丹;Retinal　capilary　pericyte　apoptosis　in　early　human　diabetic　retinopathy[J];Chinese Medical Journal;1997年09期

  本文關(guān)鍵詞：周細(xì)胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血后微血管痙攣及微循環(huán)障礙中作用機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：306683