本文關鍵詞：5-HT6受體拮抗劑SB271046對癲癇大鼠海馬神經元的保護作用及可能機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】本實驗通過建立氯化鋰-匹羅卡品癲癇大鼠模型,在癲癇發(fā)作后24小時內的不同時間點,觀察自噬水平的變化。予5-羥色胺6受體(Serotonin 6 receptor,5-HT6R)拮抗劑SB271046干預,觀察致癇大鼠海馬神經元的自噬、凋亡和神經元變性的變化,利用分子生物學技術檢測JNK信號通路,探討5-HT6受體拮抗劑改善癲癇的可能機制。【方法】1、動物分組:分組一:體重220-250g成年雄性SD大鼠(N1=30只),隨機分為空白組和癲癇組,觀察癲癇發(fā)作后2h、6h、12h、24h相對于空白組的自噬變化。分組二:體重220-250g成年雄性SD大鼠(N2=40),先隨機分為空白組、癲癇組,每組10只。然后造模成功后的癲癇組隨機分為安慰劑組(癲癇+側腦室注射二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO))、5-HT6受體拮抗劑組(癲癇+側腦室注射SB271046),每組10只。2、癲癇模型:首選腹腔注射氯化鋰,16-20個小時后在腹腔注射匹羅卡品,根據Racine分級認為發(fā)作級數達到IV級以上并且能持續(xù)30min,認定為造模成功。3、給藥方式:癲癇造模前24小時側腦室注射5-HT6受體拮抗劑SB27104630ug預處理,癲癇造模成功的大鼠在地西泮解痙后再次側腦室注射5-HT6受體拮抗劑SB271046 30ug,給藥2小時后斷頭取腦,檢測大鼠海馬組織各項指標變化。4、通過western blot檢測海馬JNK信號通路的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)、細胞癌基因jun(Cellular oncogene jun,c-Jun),自噬指標微管相關蛋白輕鏈3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3II/LC3I)、beclin1及凋亡相關的Bcl-2相關X蛋白(Bcl-assosiated x protein,bax)、B細胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)的變化。逆轉錄多聚酶鏈反應(Reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測beclin1、bax、bcl-2在各組的變化情況。5、根據上述側腦室注射5-HT6受體拮抗劑SB271046給藥24小時后斷頭取腦,通過綠色熒光變性神經元染劑(Fluoro-Jade C,FLC)染色熒光顯微鏡下觀察神經元變性情況�！窘Y果】1、癲癇發(fā)作后2h、6h、12h、24h,western blot檢測LC3II/I的值逐漸升高。2、JNK信號通路:western blot檢測的p-JNK/JNK、c-Jun,與空白組比較,造模后p-JNK/JNK、c-Jun水平升高(P0.05),5-HT6受體拮抗劑組與癲癇組比較p-JNK/JNK、c-Jun水平降低(P0.05)。3、自噬指標:western blot檢測的LC3II/LC3I、beclin1,與空白組比較,造模后LC3II/LC3I、beclin1水平升高(P0.05),5-HT6受體拮抗劑組與癲癇組比較p-JNK/JNK、c-Jun水平降低(P0.05)。檢測的Beclin1的RT-PCR結果與western blot的變化趨勢相同。4、凋亡指標:western blot檢測的Bax,與空白組比較,造模后Bax水平升高(P0.05),5-HT6受體拮抗劑組與癲癇組比較Bax水平降低(P0.05)。與空白組比較,造模后Bcl-2水平降低(P0.05),5-HT6受體拮抗劑組較癲癇組無明顯變化(P0.05)。Bax的RT-PCR與western blot的變化趨勢相同。Bcl-2的RTPCR結果顯示:癲癇組較空白組降低(P0.05),5-HT6受體拮抗劑組較癲癇組升高(P0.05)。5、神經元變性:通過FLC染色發(fā)現在海馬CA1區(qū)癲癇組變性的神經元較空白組明顯升高(P0.05)。5-HT6受體拮抗劑組較癲癇組無明顯變化(P0.05)�！窘Y論】1、癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)生24小時內海馬的自噬水平逐漸升高,神經元變性增加。2、5-HT6R拮抗劑SB-271046可能通過抑制JNK/c-jun信號通路,抑制癲癇大鼠海馬的自噬和凋亡,從而對癲癇大鼠海馬的神經元產生保護作用,從而改善癲癇發(fā)作。3、5-HT6R拮抗劑SB-271046可能對癲癇大鼠海馬變性的神經元影響不明顯。
【關鍵詞】：癲癇 5-HT6受體 SB271046 自噬 凋亡 神經元變性
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-26
• 結果26-33
• 討論33-37
• 結論37-38
• 參考文獻38-43
• 綜述43-53
• 參考文獻49-53
• 致謝53

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本文編號：306221