病毒性腦炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中最為常見的疾病之一，其進(jìn)展迅速，致死致殘率高，且由于缺乏明確的診斷方法，給治療上帶來不少難題。不少患者雖然進(jìn)行抗病毒治療，卻因不能確診病毒性腦炎或具體由哪一種病毒引起，因此不能有效、及時(shí)、準(zhǔn)確的進(jìn)行針對(duì)性治療。為降低該類疾病的死亡率并提高生存率，這就要求臨床上對(duì)導(dǎo)致疾病的病原體進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)鑒定。目前的檢測(cè)方法（如病原體培養(yǎng)、ELISA檢測(cè)、生化檢測(cè)等）費(fèi)時(shí)費(fèi)力或價(jià)格昂貴，且每次測(cè)試只能檢測(cè)一種病原體，不能達(dá)到同時(shí)檢測(cè)幾種病原體的要求。目的：本研究的目的是通過Luminex200懸浮陣列系統(tǒng)，建立一種新的多重PCR快速準(zhǔn)確的診斷平臺(tái)，可高靈敏度、高特異性的同時(shí)檢測(cè)幾種病原體。這個(gè)平臺(tái)相較于傳統(tǒng)的分離鑒定病原學(xué)方法，將會(huì)為我們提供更經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)，更及時(shí)以及更全面的病原學(xué)信息。方法：本研究以病毒性腦膜炎和腦炎最為常見的5種病原體（EV71病毒,CA16病毒，ECHO病毒，乙腦病毒以及EB病毒）為研究對(duì)象。通過查找GenBank獲得5種病原體的特異性基因，用oligo6對(duì)其保守序列進(jìn)行特異性引物設(shè)計(jì)及探針設(shè)計(jì)，后BLAST比對(duì)篩選，確保所選用的引物及探針特異... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LuminexxMAP系統(tǒng)和組件[47]

23雜交法示意圖[63]。目標(biāo) DNA 的 PCR 擴(kuò)增。一條引物由生雜交等位基因特異性探針與微球耦聯(lián)，與鏈霉親和 R-藻紅速測(cè)序方法的興起，大量的信息可被用于幫助確定致病菌種；而同時(shí)，臨床上，致病微生物導(dǎo)致的疾因此實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)病原體的方法也在不斷進(jìn)步當(dāng)中，，成本少，效益高等方面，一次檢測(cè)一個(gè)目標(biāo)將逐會(huì)是將來實(shí)驗(yàn)方法發(fā)展的方向。而液相芯片檢測(cè)系

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文制中心饋贈(zèng)；EB 病毒購(gòu)買自武漢微生物保藏中心；乙腦病毒Ⅰ型由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心饋贈(zèng)。2 方法2.1 技術(shù)路線簡(jiǎn)介如圖 3 所示，特異性寡核苷酸探針通過 5’端修飾的 NH2與不同光譜地址的微球相結(jié)合，作為捕獲目的分子部分，生物素標(biāo)記的目標(biāo) DNA 分子PCR 擴(kuò)增后的產(chǎn)物做為被捕獲的分子通過堿基互補(bǔ)原則與探針微球雜交結(jié)合，并通過生物素連接一個(gè)報(bào)告熒光分子，即 streptavidin-RPE。然后通過檢測(cè)平均熒光值進(jìn)行定量定性檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]液相芯片技術(shù)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷中的應(yīng)用[J]. 周林甫,史明,趙鋼.  醫(yī)學(xué)教育探索. 2010(09)
[2]液相芯片分析技術(shù)及其臨床應(yīng)用[J]. 林方,熊偉,祝慶余.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2009(04)
[3]液相芯片技術(shù)在公共衛(wèi)生領(lǐng)域應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 李忠.  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2009(03)
[4]病毒性腦炎研究進(jìn)展[J]. 謝藝紅,董柏青.  應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué). 2008(06)
[5]病毒性腦炎的臨床進(jìn)展[J]. 邵旦兵,孫海晨.  中國(guó)全科醫(yī)學(xué). 2008(20)
[6]多重快速鑒別病原微生物的新技術(shù):xMAP液態(tài)芯片[J]. 胡瑞,王景林.  衛(wèi)生研究. 2007(06)
[7]液相芯片——高通量檢測(cè)技術(shù)的新亮點(diǎn)[J]. 汪琳,賴平安,張鶴曉,周琦.  檢驗(yàn)檢疫科學(xué). 2005(06)
[8]液相芯片分析技術(shù)及其應(yīng)用簡(jiǎn)介[J]. 王蕾,吳英松,李明.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2005(04)
[9]液態(tài)芯片技術(shù)及其應(yīng)用[J]. 王靜,侯友松.  中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2008 (06)



本文編號(hào)：3060036