發(fā)布時間：2021-03-02 22:05

　　病毒性腦炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中最為常見的疾病之一，其進展迅速，致死致殘率高，且由于缺乏明確的診斷方法，給治療上帶來不少難題。不少患者雖然進行抗病毒治療，卻因不能確診病毒性腦炎或具體由哪一種病毒引起，因此不能有效、及時、準(zhǔn)確的進行針對性治療。為降低該類疾病的死亡率并提高生存率，這就要求臨床上對導(dǎo)致疾病的病原體進行快速、準(zhǔn)確的檢測鑒定。目前的檢測方法（如病原體培養(yǎng)、ELISA檢測、生化檢測等）費時費力或價格昂貴，且每次測試只能檢測一種病原體，不能達到同時檢測幾種病原體的要求。目的：本研究的目的是通過Luminex200懸浮陣列系統(tǒng)，建立一種新的多重PCR快速準(zhǔn)確的診斷平臺，可高靈敏度、高特異性的同時檢測幾種病原體。這個平臺相較于傳統(tǒng)的分離鑒定病原學(xué)方法，將會為我們提供更經(jīng)濟的檢測，更及時以及更全面的病原學(xué)信息。方法：本研究以病毒性腦膜炎和腦炎最為常見的5種病原體（EV71病毒,CA16病毒，ECHO病毒，乙腦病毒以及EB病毒）為研究對象。通過查找GenBank獲得5種病原體的特異性基因，用oligo6對其保守序列進行特異性引物設(shè)計及探針設(shè)計，后BLAST比對篩選，確保所選用的引物及探針特異... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LuminexxMAP系統(tǒng)和組件[47]

23雜交法示意圖[63]。目標(biāo) DNA 的 PCR 擴增。一條引物由生雜交等位基因特異性探針與微球耦聯(lián)，與鏈霉親和 R-藻紅速測序方法的興起，大量的信息可被用于幫助確定致病菌種；而同時，臨床上，致病微生物導(dǎo)致的疾因此實驗室檢測病原體的方法也在不斷進步當(dāng)中，，成本少，效益高等方面，一次檢測一個目標(biāo)將逐會是將來實驗方法發(fā)展的方向。而液相芯片檢測系

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文制中心饋贈；EB 病毒購買自武漢微生物保藏中心；乙腦病毒Ⅰ型由中國疾病預(yù)防控制中心饋贈。2 方法2.1 技術(shù)路線簡介如圖 3 所示，特異性寡核苷酸探針通過 5’端修飾的 NH2與不同光譜地址的微球相結(jié)合，作為捕獲目的分子部分，生物素標(biāo)記的目標(biāo) DNA 分子PCR 擴增后的產(chǎn)物做為被捕獲的分子通過堿基互補原則與探針微球雜交結(jié)合，并通過生物素連接一個報告熒光分子，即 streptavidin-RPE。然后通過檢測平均熒光值進行定量定性檢測。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3060036