發(fā)布時間：2021-02-28 01:08

　　目的:膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤。高發(fā)病率、復(fù)發(fā)率、死亡率及較低的治愈率是其重要特征。近年來研究表明,Wnt通路的異常調(diào)節(jié)在膠質(zhì)瘤生長及惡性進(jìn)展過程中起到了至關(guān)重要的作用。與正常腦組織比較,膠質(zhì)瘤中β-catenin和TCF4表達(dá)均有上調(diào),從而抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。相關(guān)研究表明,TCF4在腎癌、結(jié)直腸癌、肝細(xì)胞癌及腦腫瘤中都存在高表達(dá)現(xiàn)象。異常增加的TCF4能夠刺激下游靶基因是常見的腫瘤發(fā)生的早期事件。人類TCF4基因包含17個外顯子。最近的研究表明,TCF mRNA通過可變剪接形成不同的剪接異構(gòu)體,這與調(diào)節(jié)Wnt信號通路的轉(zhuǎn)錄和腫瘤發(fā)生都有相關(guān)性。各種類型的癌癥包括腎癌、結(jié)直腸癌和腦部腫瘤中發(fā)現(xiàn)了不同的TCF4剪接異構(gòu)體。然而,TCF4剪接異構(gòu)體在神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程中的作用還有待闡明。本實(shí)驗(yàn)擬確認(rèn)三種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中TCF4剪接異構(gòu)體的種類,并研究三種興趣異構(gòu)體對U251細(xì)胞系的增殖、凋亡及遷移的影響。方法:我們在含有青霉素（100 U/ml）、鏈霉素（100 μg/ml）、胎牛血清（10%）的DMEM培養(yǎng)基中成功培養(yǎng)人U251、A172、U-87MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果（１００Ｘ光鏡下）??

ＸＩ??Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ＊－＊??圖１－２實(shí)驗(yàn)流程圖??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｒｏａｄｍａｐ??２．２．２引物序列??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ??Ｒｒ－ＰＣＲ??Ｈ２５ＩＴｃｆ－４（ｃｘｏｎＩ０）?ｆｏｒｗａｒｄ?５＊－ＡＧＴＧＣＡＣＧＴＴＧＡＡＡＧＡＡＡＧＣＧＣＧ－３，??Ｈ２５２?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?１７ＳＲ）?ｒｅｖｅｒｓｅ?Ｓ＇－ＣＴＧＣＣＴＴＣＡＣＣＴｒＧＴＡＴＧＴＡＧＣＧｖＶ??Ｈ５５７Ｔｃｆ－４（ｅｘｏｎ?！）?ｆｏｒｗａｒｄ?５，＊ＣＴｒＣＣＡＡＡＡｌＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧ－３，??Ｈ５５Ｓ?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?１�。�?ｒｅｖｅｒｓｅ?５ｔ－ＴＣＴＣＴＧＧＡＣＡＧＴＧＣＡＴＧＣＣ－３ｉ??Ｈ５５９?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?ｉ２）ｆｏｒｗａｕｌ?５ｒ－ＣＡＡＧＣＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＣ－３＇??Ｈ５６２ＴｃＭ?（ｅｘｏｎｌ５）ｆｏ＾ａｒｄ?５＾ＡＴＧＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＡＡＡＧＡＡＧ－３＇??Ｈ５６３?Ｔｃｆ－４?｛ｅｘｏｎ?Ｉ７ＬＲ）?ｒｅｖｅｒｓｅ?５，＊ＴＸ：ＡＧＣＧＡＣＣＡＧＧＡＧＧ０３，??Ｈ５Ｓ０?Ｔｃｆ－４?（ｅｘｏｎ?Ｉ５）ｒｃｖｅｎ；ｅ?５＾ＣＴＧＣＡＣＧＧＴｒＲ］ＣＡＣＣＡＴ－３，??圖１－３引物設(shè)計(jì)序列??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｐｒｉｍｅｒ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ??３５??

Ｆｉｇｕｒｅ?ｌ－６?Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｓｐｌｉｃｉｎｇ?ｉｓｏｆｏｒｍ?ｏｆ?ＴＣＦ４??ＴＣＦ４有１７個外顯子，而主要異構(gòu)體序列的變換在１２號外顯子到１７號外??顯子之間（圖１－６）。因此我們?nèi)鐖D１－５所示設(shè)計(jì)了三對引物（分別為引物Ｈ２５１??和?Ｈ５６３；?Ｈ５５９?和?Ｈ５８０；?Ｈ５６２?和?Ｈ２５２

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Liquid biopsy of gastric cancer patients:Circulating tumor cells and cell-free nucleic acids[J]. Masahiro Tsujiura,Daisuke Ichikawa,Hirotaka Konishi,Shuhei Komatsu,Atsushi Shiozaki,Eigo Otsuji.  World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J]. 鄭克彬,焦保華.  中國腫瘤生物治療雜志. 2012(01)
[3]膠質(zhì)瘤中Axin和β-catenin表達(dá)及臨床意義的研究[J]. 潘旭波,郝俊梅,郎志強(qiáng),于國華,徐振光.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2009(06)



本文編號：3055077