缺血性腦卒中是危害人類健康的嚴重疾病，其防治方法和發(fā)病機制一直是國內外研究的熱點。缺血性腦損傷可發(fā)生復雜的信號轉導通路的變化同時產生一定的生物學作用，因此，闡明與缺血性腦損傷有關的信號轉導通路的變化，尋找通路中的關鍵作用靶點和可應用于臨床的神經保護物質，進而在神經細胞缺血損傷后促進神經細胞功能的恢復，對缺血性腦卒中的治療具有重要意義。Smad7屬于I-Smad家族，在TGF-β信號通路中發(fā)揮抑制作用。Smad7是TGF-β作用的靶基因之一，可反饋調節(jié)TGF-β/Smad信號通路，維持該通路的平衡，Smad7能夠與R-Smad（Smad2、Smad3）競爭性地結合被激活的TGF-β受體，從而阻止Smad2、Smad3與TGF-β受體結合及其隨后的磷酸化過程。目前研究表明，Smad7蛋白的高表達與胰腺癌、肝癌密切相關，還有研究表明轉染Smad7基因可明顯抑制腎間質纖維化的進程，另有研究表明，TGF-β超家族成員激活素A（ActA）/Smads通路的激活具有神經保護作用。Smad7作為一種信號蛋白在中樞神經系統(tǒng)存在其表達，Smad7在缺血性腦損傷中的變化規(guī)律和作用尚不明確，國內外未見報道。本... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 SIRNA 技術研究進展
        1.1.1 siRNA 的設計
        1.1.2 siRNA 的合成
        1.1.3 siRNA 導入細胞內的方法
        1.1.4 siRNA 技術的應用
        1.1.5 問題與展望
    1.2 SMADS 蛋白的研究進展
        1.2.1 Smads 蛋白家族的結構與功能
        1.2.2 Smads 與細胞增殖
        1.2.3 Smads 與心血管疾病
        1.2.4 Smads 與凋亡
        1.2.5 Smads 與血管平滑肌細胞
        1.2.6 Smads 與神經系統(tǒng)
        1.2.7 展望
    1.3 參考文獻
第2章 PC12 細胞誘導的神經細胞 OGD 模型的制備和鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗細胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實驗方法
    2.2 結果
        2.2.1 形態(tài)學觀察
        2.2.2 PC12 細胞轉化為神經細胞的的鑒定
        2.2.3 神經細胞 OGD 模型的制備及鑒定結果
    2.3 討論
    2.4 小結
    2.5 參考文獻
第3章 靶向沉默 SMAD7 基因及沉默效果的檢測
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 主要溶液的配制
        3.1.4 實驗方法
        3.1.5 統(tǒng)計學處理
    3.2 結果
        3.2.1 轉染效率檢測結果
        3.2.2 MTT 法細胞存活率檢測
        3.2.3 Real time-PCR 測定 Smad7 基因 mRNA 的表達
        3.2.4 Western blot 檢測 Smad7 基因蛋白表達
    3.3 討論
    3.4 小結
    3.5 參考文獻
第4章 SMAD7-SIRNA 對 ACTA/SMADS 信號轉導通路的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)、細胞分化及 OGD 模型制備
        4.2.2 細胞轉染
        4.2.3 Smad7、ActA、p300 mRNA 檢測（Real time PCR）
        4.2.4 免疫印跡檢測 Smad7、ActA、p300 蛋白表達
        4.2.5 統(tǒng)計學處理
    4.3 結果
        4.3.1 Real time-PCR 檢測 Smad7、ActA、p300 mRNA 表達
        4.3.2 免疫印跡檢測 Smad7、ActA、p300 蛋白表達
    4.4 討論
    4.5 小結
    4.6 參考文獻
第5章 SMAD7-SIRNA 對神經細胞缺血損傷細胞凋亡的影響
    5.1 實驗材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 細胞培養(yǎng)，細胞分化及 OGD 模型制備
        5.2.2 細胞轉染
        5.2.3 凋亡小體的檢測（DAPI 染色）
        5.2.4 細胞凋亡檢測（流式細胞儀檢測）
        5.2.5 Procaspase-3 蛋白檢測（免疫印跡）
        5.2.6 統(tǒng)計學處理
    5.3 結果
        5.3.1 凋亡小體檢測
        5.3.2 FCM 檢測細胞凋亡
        5.3.3 免疫印跡檢測 Procaspase-3 蛋白表達
    5.4 討論
    5.5 小結
    5.6 參考文獻
結論
攻讀博士期間獲得的成果
致謝



本文編號：3048497