缺血性腦卒中是危害人類健康的嚴(yán)重疾病，其防治方法和發(fā)病機(jī)制一直是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。缺血性腦損傷可發(fā)生復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化同時(shí)產(chǎn)生一定的生物學(xué)作用，因此，闡明與缺血性腦損傷有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化，尋找通路中的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)和可應(yīng)用于臨床的神經(jīng)保護(hù)物質(zhì)，進(jìn)而在神經(jīng)細(xì)胞缺血損傷后促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞功能的恢復(fù)，對(duì)缺血性腦卒中的治療具有重要意義。Smad7屬于I-Smad家族，在TGF-β信號(hào)通路中發(fā)揮抑制作用。Smad7是TGF-β作用的靶基因之一，可反饋調(diào)節(jié)TGF-β/Smad信號(hào)通路，維持該通路的平衡，Smad7能夠與R-Smad（Smad2、Smad3）競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合被激活的TGF-β受體，從而阻止Smad2、Smad3與TGF-β受體結(jié)合及其隨后的磷酸化過程。目前研究表明，Smad7蛋白的高表達(dá)與胰腺癌、肝癌密切相關(guān)，還有研究表明轉(zhuǎn)染Smad7基因可明顯抑制腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程，另有研究表明，TGF-β超家族成員激活素A（ActA）/Smads通路的激活具有神經(jīng)保護(hù)作用。Smad7作為一種信號(hào)蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在其表達(dá)，Smad7在缺血性腦損傷中的變化規(guī)律和作用尚不明確，國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。本... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 SIRNA 技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1.1 siRNA 的設(shè)計(jì)
        1.1.2 siRNA 的合成
        1.1.3 siRNA 導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的方法
        1.1.4 siRNA 技術(shù)的應(yīng)用
        1.1.5 問題與展望
    1.2 SMADS 蛋白的研究進(jìn)展
        1.2.1 Smads 蛋白家族的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 Smads 與細(xì)胞增殖
        1.2.3 Smads 與心血管疾病
        1.2.4 Smads 與凋亡
        1.2.5 Smads 與血管平滑肌細(xì)胞
        1.2.6 Smads 與神經(jīng)系統(tǒng)
        1.2.7 展望
    1.3 參考文獻(xiàn)
第2章 PC12 細(xì)胞誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞 OGD 模型的制備和鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.2 PC12 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)細(xì)胞的的鑒定
        2.2.3 神經(jīng)細(xì)胞 OGD 模型的制備及鑒定結(jié)果
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
    2.5 參考文獻(xiàn)
第3章 靶向沉默 SMAD7 基因及沉默效果的檢測(cè)
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 主要溶液的配制
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 MTT 法細(xì)胞存活率檢測(cè)
        3.2.3 Real time-PCR 測(cè)定 Smad7 基因 mRNA 的表達(dá)
        3.2.4 Western blot 檢測(cè) Smad7 基因蛋白表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
    3.5 參考文獻(xiàn)
第4章 SMAD7-SIRNA 對(duì) ACTA/SMADS 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分化及 OGD 模型制備
        4.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.3 Smad7、ActA、p300 mRNA 檢測(cè)（Real time PCR）
        4.2.4 免疫印跡檢測(cè) Smad7、ActA、p300 蛋白表達(dá)
        4.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 Real time-PCR 檢測(cè) Smad7、ActA、p300 mRNA 表達(dá)
        4.3.2 免疫印跡檢測(cè) Smad7、ActA、p300 蛋白表達(dá)
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
    4.6 參考文獻(xiàn)
第5章 SMAD7-SIRNA 對(duì)神經(jīng)細(xì)胞缺血損傷細(xì)胞凋亡的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞分化及 OGD 模型制備
        5.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.3 凋亡小體的檢測(cè)（DAPI 染色）
        5.2.4 細(xì)胞凋亡檢測(cè)（流式細(xì)胞儀檢測(cè)）
        5.2.5 Procaspase-3 蛋白檢測(cè)（免疫印跡）
        5.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 凋亡小體檢測(cè)
        5.3.2 FCM 檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        5.3.3 免疫印跡檢測(cè) Procaspase-3 蛋白表達(dá)
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
    5.6 參考文獻(xiàn)
結(jié)論
攻讀博士期間獲得的成果
致謝



本文編號(hào)：3048497