目的:單增李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）以―特洛伊木馬‖形式穿越血腦屏障這一方式在細(xì)菌性腦炎、腦膜炎的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義,其中細(xì)胞遷移和突破血腦屏障是必須的,RhoGTP酶家族是調(diào)控細(xì)胞遷移的關(guān)鍵因子。本研究擬探討RhoA在該過(guò)程中的表達(dá),觀察RhoA對(duì)細(xì)胞遷移和免疫因子的表達(dá)等生物學(xué)行為的影響。同時(shí)研究RhoA調(diào)控巨噬細(xì)胞對(duì)血腦屏障的影響。方法:1.Tranwell小室遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RAW264.7帶菌遷移能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)Lm感染RAW264.7后IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的變化;qRT-PCR和Western blot檢測(cè)Lm感染RAW264.7后,RhoGTP酶家族在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)差異。2.基因干擾技術(shù)干擾RhoA在RAW264.7中的表達(dá),并用qRT-PCR和Western blot驗(yàn)證其效率;Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)照組和... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Lm感染促進(jìn)RAW264.7遷移能力A：Transwell小室遷移結(jié)果B：遷移結(jié)果計(jì)數(shù)圖（**p＜0.01，***p＜0.001）

圖 2.2 Lm 感染促進(jìn) RAW264.7 細(xì)胞免疫因子的 mRNA 水平的表達(dá)IL-10 的相對(duì)表達(dá)量 B：IL-6 的相對(duì)表達(dá)量 C：TNF-α 的相對(duì)表達(dá)量 D：的相對(duì)表達(dá)量（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.2 Listeria monocytogenes infection promoted mRNA expression of RAW264.7 imfactors Relative expression of IL-10 B: Relative expression of IL-6 C:: Relative expressioTNF-α D: Relative expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001）3 Lm 感染促進(jìn) IL-1β、IL-6、TNF-α 蛋白水平表達(dá)設(shè)立無(wú) Lm 刺激組、MOI=1、MOI=10、MOI=100，刺激 9h 后收集上清SA 檢測(cè)上清中 IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果如下圖所示：IL-1β 和 TNF-α 在蛋白水平的表達(dá)隨菌量增加顯著增加，ILI=100 時(shí)顯著升高，與對(duì)照組比，IL-10 在 Lm 刺激后表達(dá)無(wú)明顯變化。

圖 2.3 Lm 感染促進(jìn) RAW264.7 細(xì)胞因子蛋白水平的表達(dá)-1β 蛋白水平的表達(dá) B：IL-6 蛋白水平的表達(dá) C：TNF-α 蛋白水平的表達(dá) D蛋白水平的表達(dá)（* p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001）re 2.3 Listeria monocytogenes infection promotes the expression of RAW264.7 imfactor proteinsrotein expression of IL-1β B:Protein expression of IL-6 C: Protein expression of TD:Protein expression of IL-10（* p＜0.05,** p＜0.01,*** p＜0.001） qRT-PCR 檢測(cè) Lm 感染 RAW264.7 后 RhoGTP 酶家族基因表達(dá)下列結(jié)果（圖 2.4）顯示，Lm 感染后，RhoA 和 Rnd1 隨菌量的增加而升hoA 的增幅較 Rnd1 明顯；RhoB 僅在 MOI=1 時(shí)升高 2.5 倍，隨菌量的 呈下降趨勢(shì)；RhoC 在 MOI=100 時(shí)升高 1.5 倍左右；RAC1 實(shí)驗(yàn)組左右，Cdc42 表達(dá)各組間無(wú)明顯差異。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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