神經(jīng)退行性疾病（Neurodegenerative disease）是指中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織非正常退變引起的功能缺陷與衰退的一類疾病,病理上表現(xiàn)為腦和脊髓發(fā)生神經(jīng)元變性、丟失。研究發(fā)現(xiàn),機(jī)體內(nèi)過量的自由基產(chǎn)生導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病過程中起著重要的作用。近年來,神經(jīng)干細(xì)胞（Neural Stem Cells, NSCs）因其具有自我更新的能力和多向分化潛能,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)再生和重建方面引起廣泛關(guān)注,但NSCs移植后存活率低和易于受到氧化應(yīng)激損傷的缺陷,則成為其應(yīng)用在神經(jīng)退行性疾病臨床治療上的限制。吡咯喹啉醌（Pyrroloquinline quinone, PQQ）在自然界中廣泛存在,作為氧化還原酶的輔基參與機(jī)體內(nèi)的多種氧化還原反應(yīng),具有多種生物學(xué)功能,尤其是其強(qiáng)大的清除自由基能力和神經(jīng)營養(yǎng)保護(hù)功能已經(jīng)引起人們的注意。本文首先通過體外懸浮方式培養(yǎng)NSCs,同時(shí)采用H2O2和Glu造成細(xì)胞氧化應(yīng)激,以構(gòu)建NSCs藥物損傷模型。結(jié)果表明,二者均能對NSCs產(chǎn)生毒性作用,其毒性作用呈時(shí)間依賴和濃度依賴；據(jù)此,本文分別采用0.35mM H2O2作用細(xì)胞24h建立體外NSCs直接氧化... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 神經(jīng)干細(xì)胞
        1.1.1 NSCs的定義
        1.1.2 NSCs的生物學(xué)特征
        1.1.3 NSCs的標(biāo)記與鑒定
        1.1.4 NSCs的培養(yǎng)
        1.1.5 NSCs的應(yīng)用前景
    1.2 PQQ的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 PQQ的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 PQQ的自然分布
        1.2.3 PQQ的生物學(xué)功能
    1.3 氧化應(yīng)激
        1.3.1 氧化應(yīng)激的概念
        1.3.2 自由基的產(chǎn)生和清除
        1.3.3 氧化應(yīng)激與神經(jīng)退行性疾病
        1.3.4 氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
    1.4 小結(jié)
2 NSCs的原代分離培養(yǎng)及毒素?fù)p傷模型的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 NSCs的原代取材及培養(yǎng)
        2.2.2 NSCs的繼代培養(yǎng)
        2.2.3 NSCs生長曲線的測定
        2.2.4 NSCs的鑒定
        2.2.5 細(xì)胞存活率的檢測
50)的計(jì)算">        2.2.6 半數(shù)致死濃度(LC₅₀)的計(jì)算
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 NSCs的原代及繼代培養(yǎng)
        2.3.2 NSCs的生長曲線
        2.3.3 NSCs的免疫組織化學(xué)鑒定
2O₂對NSCs細(xì)胞存活率的影響">        2.3.4 H₂O₂對NSCs細(xì)胞存活率的影響
        2.3.5 Glu對NSCs細(xì)胞存活率的影響
    2.4 本章小結(jié)
3 PQQ對NSCs自身增殖、凋亡及分化的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料及方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 溶液配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞存活率的檢測
        3.2.2 細(xì)胞生長曲線的測定
        3.2.3 Hoechst33258染色
        3.2.4 細(xì)胞凋亡率的計(jì)算
        3.2.5 細(xì)胞分化潛能的測定
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.3.1 PQQ對NSCs存活率的影響
        3.3.2 PQQ對NSCs生長曲線的影響
        3.3.3 PQQ對NSCs自發(fā)性凋亡的影響
        3.3.4 PQQ對NSCs生長及分化能力的影響
    3.4 本章小結(jié)
4 PQQ對體外培養(yǎng)NSCs損傷的保護(hù)作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
        4.1.2 溶液配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 CCK-8法測定細(xì)胞活率
        4.2.2 Hoechst33258-PI熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)變化
        4.2.3 Annexin V-FITC和PI雙染色分析細(xì)胞凋亡
        4.2.4 SOD的檢測
        4.2.5 CAT的檢測
        4.2.6 GSH-Px的檢測
        4.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.3.1 PQQ后添加對損傷的NSCs存活率的影響
        4.3.2 PQQ預(yù)處理對損傷的NSCs存活率的影響
        4.3.3 PQQ對損傷NSCs的保護(hù)作用
        4.3.4 PQQ對損傷NSCs凋亡和壞死的影響
        4.3.5 PQQ對損傷NSCs內(nèi)抗氧化酶活性變化的影響
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)摘要
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3036284