目的:癲癇是由大腦神經(jīng)元異常放電引起的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,發(fā)病過程中神經(jīng)網(wǎng)絡處于興奮-抑制失衡的狀態(tài)。癲癇病因有很多,遺傳因素為原發(fā)性癲癇的主因,腦出血、腦腫瘤、腦外傷、炎癥、感染等是導致繼發(fā)性癲癇發(fā)生的常見原因�，F(xiàn)已有許多有研究報道CNTNAP2基因的異常與癲癇的發(fā)生有關(guān),其編碼的蛋白Caspr2參與了中樞神經(jīng)網(wǎng)絡興奮性的調(diào)節(jié)過程。我們在臨床癲癇病例中亦發(fā)現(xiàn)了一個新的突變CNTNAP2（R777G）,我們推測Caspr2很可能參與調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)興奮-抑制平衡系統(tǒng),而當發(fā)生基因突變時,神經(jīng)網(wǎng)絡興奮傳導異常,很有可能會引起癲癇發(fā)生。因此,本研究初步探究Caspr2對神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)與興奮性功能的影響,給癲癇發(fā)病機制的研究提供理論基礎。方法:我們構(gòu)建了帶綠色熒光的人源野生型CNTNAP2基因與突變?nèi)嗽碈NTNAP2（R777G）基因的質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染至細胞系HEK293T、SH-SY5Y和小鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元中,通過Western blot與熒光定量PCR檢測人源野生型Caspr2與突變蛋白Caspr2（R777G）的表達情況;通過熒光顯微鏡觀察小鼠原代培養(yǎng)神經(jīng)元過表達野生型Caspr2或突變蛋白Cas... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學廣東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 癲癇的研究現(xiàn)狀
    1.1 癲癇的定義
    1.2 癲癇的病因
        1.2.1 原發(fā)性癲癇
        1.2.2 繼發(fā)性癲癇
    1.3 癲癇的發(fā)病機制
        1.3.1 基因突變與離子通道異常
        1.3.2 神經(jīng)遞質(zhì)異常
        1.3.3 免疫及炎癥因素
        1.3.4 神經(jīng)膠質(zhì)細胞
第二章 Caspr2蛋白的研究現(xiàn)狀
    2.1 Caspr2的分子結(jié)構(gòu)
    2.2 Caspr2的主要功能
        2.2.1 在髓鞘近結(jié)側(cè)區(qū)募集Kv1.1、Kv1.2
        2.2.2 參與神經(jīng)元的遷移
        2.2.3 參與神經(jīng)網(wǎng)絡的正�；顒�
    2.3 Caspr2在人與鼠腦中的不同分布與表達
    2.4 Caspr2與癲癇聯(lián)系密切
    2.5 CN7NAP2基因新突變位點及病例背景
第三章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 動物及飼養(yǎng)條件
        3.1.2 細胞
        3.1.3 抗體
        3.1.4 化學藥品和材料、試劑盒及培養(yǎng)基
        3.1.5 主要試劑與溶液的配制
        3.1.6 主要實驗儀器設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.2 大量提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒
        3.2.3 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.4 細胞分離及培養(yǎng)
        3.2.5 細胞轉(zhuǎn)染
        3.2.6 蛋白質(zhì)免疫印跡
        3.2.7 實時熒光定量PCR
        3.2.8 電生理技術(shù)
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
第四章 實驗結(jié)果與分析
    4.1 質(zhì)粒構(gòu)建成功
        4.1.1 pEGFP-N1-CNTNAP2質(zhì)粒構(gòu)建
        4.1.2 pEGFP-N1-CNTNAP2 （R777G）質(zhì)粒構(gòu)建
    4.2 細胞系轉(zhuǎn)染成功
    4.3 Caspr2與神經(jīng)元形態(tài)異常
    4.4 Caspr2與神經(jīng)元興奮性異常
結(jié)語
參考文獻
附錄
致謝
統(tǒng)計學審核證明


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]兒童特發(fā)性全身性癲癇易感基因CACNA1H及GABRB3的分析研究[D]. 劉敏.廣西醫(yī)科大學 2012



本文編號：3023488