背景神經(jīng)炎癥是導致C1型尼曼-匹克�。∟ieman-Pick disease type C1,NPC1）神經(jīng)系統(tǒng)受損的重要因素之一,在NPC1的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要的角色。在NPC1患者和Npc1^-/-小鼠腦內(nèi)均觀察到小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的激活,激活后的膠質(zhì)細胞分泌并釋放大量的炎癥因子參與神經(jīng)炎癥的發(fā)生發(fā)展,最終引起神經(jīng)元損傷�，F(xiàn)已知miRNA可以通過調(diào)控炎癥相關基因的表達參與神經(jīng)炎癥的調(diào)控,然而,miRNA在NPC1的神經(jīng)炎癥中是否發(fā)揮調(diào)控作用尚不清楚。目的分析Npc1^-/-小鼠海馬中神經(jīng)炎癥因子及miRNA表達的變化,構建miRNA-mRNA的調(diào)控網(wǎng)絡,探討miRNA對神經(jīng)炎癥的調(diào)控作用,為深入闡明NPC1致病、免疫機理和尋找藥物治療靶點提供理論依據(jù)。方法聯(lián)合應用蛋白芯片（RayBiotech,QM-INF-1-1）和Small RNA測序分析P40的Npc1^-/-小鼠（n=3）和Npc1^+/+小鼠（n=3）的海馬組織,篩選Npc1^-/-小鼠差異表達的炎癥因子,通過m... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院河南省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

標準品梯度稀釋

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文13換用1×洗液II通道進行清洗，每孔加入250μl，清洗6次，每次10s，去離子水稀釋；4）檢測抗體混合物小管中加入1.4ml的樣品稀釋液，混合均勻后快速離心。接著將檢測抗體每個孔加入80μL，搖床上37°C2小時；5）每孔加250μl1×洗液I放置洗板機中，清洗10次，每次10s，去離子水稀釋后，換用1×洗液II通道進行清洗，每孔加入250μl，清洗6次，每次10s，去離子水稀釋；6）在Cy3-鏈霉親和素小管中加入1.4ml的樣品稀釋液，混合均勻后離心。接著將Cy3-鏈霉親和素每個孔加入80μL，添加80μl的到每個孔中，避光搖床上37°C孵育1h；7）每孔加250μl1×洗液I放置洗板機中，清洗10次，每次10s，去離子水稀釋后，換用1×洗液II通道進行清洗，每孔加入250μl，清洗6次，每次10s，去離子水稀釋；1.2.2神經(jīng)炎癥因子的蛋白芯片數(shù)據(jù)提取及差異分析（1）熒光檢測。拆掉玻片框架后，通過InnoScan300激光掃描儀掃描，選擇Cy3通道（激發(fā)頻率=532nm），掃描參數(shù)為WaveLengh：532nm、Resolution：10μm。（2）上述方法掃描得到數(shù)據(jù)后以|log2(foldchange)|≥1及P<0.05作為篩選條件，使用linmma在R語言中篩選差異表達的神經(jīng)炎癥因子，所得上調(diào)差異表達因子或下調(diào)差異表達因子的表達水平，在有統(tǒng)計學意義的條件下均是對照組的4倍。（3）蛋白芯片上各蛋白片段的分布本研究所用蛋白芯片檢測過程中的陣列如圖2所示。圖2.蛋白芯片陣列Fig.2.Proteinchiparray

新鄉(xiāng)醫(yī)學院碩士學位論文15列reads進行質(zhì)量控制等生物信息學分析。圖3SmallRNA文庫制備Fig.3ThepreparationoflibraryforsmallRNA1.3.2測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量評估（1）通過illuminaHiSeqTM2500測序平臺進行高通量測序得到的原始序列（RawReads）需要經(jīng)堿基識別（BaseCalling）分析轉(zhuǎn)化為測序序列（SequencedReads），以FASTQ格式存儲。測序得到的rawreads，里面含有帶接頭的、低質(zhì)量的reads，接著對rawreads進行處理，步驟如下：1）去除低質(zhì)量reads；2）去除無法確定堿基信息的比例大于10%的reads；3）去除有5’接頭污染的reads；4）去除沒有3’接頭序列和插入片段的reads；5）剔除掉3’接頭序列；6）去除polyA/T/G/C的reads（2）數(shù)據(jù)處理后得到純凈序列（cleanreads），篩選長度區(qū)間為18-35nt的cleanreads

【參考文獻】：
期刊論文
[1]MiRNA-146a通過NF-κB依賴的途徑促進血管平滑肌細胞增殖[J]. 熊瑋,董少紅,袁建輝,李江華,劉建軍,徐新云.  南方醫(yī)科大學學報. 2012(02)



本文編號：3008462