本文關(guān)鍵詞：楊梅黃酮對(duì)小鼠及人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外抑制作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,惡性程度高且易復(fù)發(fā)及局部擴(kuò)散。目前,其主要治療方式仍是手術(shù)切除,但由于位于中樞神經(jīng)系統(tǒng),切除范圍有限以致難以徹底清除。因此,需要輔以其他治療方法,如化療、放療、免疫治療等。目前,對(duì)膠質(zhì)瘤的治療已取得了一定成果,但由于一些不良反應(yīng)及膠質(zhì)瘤耐藥的出現(xiàn),我們有必要尋求毒副作用更小且有效的藥物。楊梅黃酮作為一種植物化學(xué)物,廣泛存在于自然界的植物中,廉價(jià)易得,已證實(shí)其具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎等多重生物學(xué)功能。近年來(lái),對(duì)其研究主要集中于抗腫瘤方面,表現(xiàn)為對(duì)非小細(xì)胞肺癌、皮膚癌、食管癌等腫瘤均有一定的治療作用。因此,本課題將楊梅黃酮用于腦膠質(zhì)瘤治療的實(shí)驗(yàn)研究以探究其對(duì)膠質(zhì)瘤的治療作用。本課題分別應(yīng)用小鼠腦膠質(zhì)瘤GL261細(xì)胞及人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探究楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制作用。主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行研究,分別是楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞增殖及凋亡的影響;楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響;楊梅黃酮對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)體外成管能力的影響。為進(jìn)一步研究楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤的治療作用及機(jī)制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。一、楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響1.楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的影響通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞活性的影響。結(jié)果顯示,對(duì)于GL261細(xì)胞,楊梅黃酮在濃度為20μM時(shí)即可對(duì)其活性產(chǎn)生抑制作用,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01),隨濃度升高,抑制作用更明顯,并且作用48h表現(xiàn)出比作用24h更強(qiáng)的抑制作用。對(duì)于U251細(xì)胞,在楊梅黃酮濃度為240μM時(shí)對(duì)其活性產(chǎn)生抑制作用(p0.05),隨濃度增加,抑制作用更明顯,并且作用時(shí)間延長(zhǎng)(48h)也可增強(qiáng)其對(duì)U251細(xì)胞活性的抑制作用。說(shuō)明楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活性抑制作用具有劑量-時(shí)間依賴性。2.楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)兩種細(xì)胞周期的影響。結(jié)果顯示,楊梅黃酮可增加兩種細(xì)胞G1期的比例,將細(xì)胞周期阻滯于G1期,從而抑制細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步通過(guò)Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白,結(jié)果顯示楊梅黃酮可抑制U251細(xì)胞周期蛋白Cycline D1的表達(dá)。3.楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用通過(guò)Hoechst 33342染色觀察楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。熒光顯微鏡下觀察可發(fā)現(xiàn)楊梅黃酮可使兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡小體出現(xiàn)的比例增加。進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果顯示,楊梅黃酮可增加兩種細(xì)胞早期凋亡與晚期凋亡細(xì)胞的比例,與相應(yīng)的對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),說(shuō)明楊梅黃酮可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡。二、楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲的影響1.楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞遷移的影響利用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)GL261與U251細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果顯示,對(duì)于GL261細(xì)胞,楊梅黃酮濃度在5μM時(shí)即表現(xiàn)出對(duì)其遷移的抑制作用(p0.05)。并且隨濃度增加,抑制作用更明顯。對(duì)于U251細(xì)胞,在楊梅黃酮濃度為100μM及200μM時(shí),均表現(xiàn)出與平行對(duì)照有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.001)的對(duì)U251細(xì)胞遷移的抑制作用。2.楊梅黃酮對(duì)GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞侵襲的影響為研究楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響,我們?cè)赥ranswell小室底部鋪上Matrigel以模仿細(xì)胞外基質(zhì),然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,楊梅黃酮可減少穿過(guò)小室的GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞的數(shù)目,與相應(yīng)的對(duì)照相比,細(xì)胞數(shù)目差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞MMPs m RNA轉(zhuǎn)錄水平的影響,結(jié)果顯示楊梅黃酮可降低GL261細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9的m RNA水平,也可降低U251細(xì)胞內(nèi)MMP-2、MMP-9以及MMP-14的m RNA水平,與相應(yīng)的對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。三、楊梅黃酮對(duì)HUVEC體外成管能力的影響利用CCK-8試劑盒檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)HUVEC增殖的影響,通過(guò)HUVEC的遷移及在Matrigel上成管檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)HUVEC成管能力的影響。結(jié)果顯示,楊梅黃酮可抑制HUVEC的增殖,且具有劑量-時(shí)間依賴性。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,同對(duì)照組相比,楊梅黃酮可抑制HUVEC的遷移(p0.001)。在成管實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,楊梅黃酮可明顯減少誘導(dǎo)形成的小管的長(zhǎng)度(p0.05)。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),我們可得出結(jié)論,楊梅黃酮可抑制膠質(zhì)瘤GL261細(xì)胞與U251細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡,同時(shí),也可抑制這兩種細(xì)胞的遷移及侵襲。楊梅黃酮可作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,抑制U251細(xì)胞誘導(dǎo)的HUVEC體外成管。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 楊梅黃酮 腫瘤血管 MMPs
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 前言4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-16
• 第1章 文獻(xiàn)綜述16-22
• 1.1 腫瘤間質(zhì)16-19
• 1.1.1 腫瘤血管16-17
• 1.1.1.1 腫瘤血管結(jié)構(gòu)及其功能16
• 1.1.1.2 抗血管生成治療及其進(jìn)展16-17
• 1.1.2 基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）17-19
• 1.1.2.1 MMPs結(jié)構(gòu)與功能17-18
• 1.1.2.2 MMPs抑制劑及其研究進(jìn)展18-19
• 1.2 楊梅黃酮19-22
• 1.2.1 楊梅黃酮抗腫瘤作用19-20
• 1.2.2 楊梅黃酮其他生物學(xué)作用20-22
• 第2章 材料和方法22-33
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料22-24
• 2.1.1 主要試劑22-23
• 2.1.2 主要儀器23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品23
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-32
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)24
• 2.2.2 CCK-8 實(shí)驗(yàn)24
• 2.2.3 細(xì)胞周期流式檢測(cè)24-25
• 2.2.4 Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白25-26
• 2.2.5 Hoechst 33342 染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)26-27
• 2.2.6 細(xì)胞凋亡流式檢測(cè)27-28
• 2.2.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（劃痕法）28
• 2.2.8 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)（Transwell法）28
• 2.2.9 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)（Transwell法）28-29
• 2.2.10 RT-PCR檢測(cè)29-31
• 2.2.11 成管實(shí)驗(yàn)31-32
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32-33
• 第3章 結(jié)果33-51
• 3.1 楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響33-41
• 3.1.1 CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞活性的影響33-34
• 3.1.2 楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響34-37
• 3.1.3 楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響37-41
• 3.2 楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲的影響41-48
• 3.2.1 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的影響41-43
• 3.2.2 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響43-45
• 3.2.3 RT-PCR檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞MMPs m RNA的水平45-48
• 3.3 楊梅黃酮對(duì)HUVEC體外成管的影響48-51
• 3.3.1 楊梅黃酮對(duì)HUVEC增殖的作用48
• 3.3.2 楊梅黃酮對(duì)HUVEC遷移的影響48-49
• 3.3.3 成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅黃酮對(duì)U251細(xì)胞誘導(dǎo)的HUVEC成管的影響49-51
• 第4章 討論51-56
• 4.1 楊梅黃酮通過(guò)抑制增殖和促進(jìn)凋亡抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)51-53
• 4.2 楊梅黃酮通過(guò)降低MMPS的表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移及侵襲53-54
• 4.3 楊梅黃酮可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移及體外成管54-56
• 第5章 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間取得的科研成果63-64
• 致謝64-65

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  本文關(guān)鍵詞：楊梅黃酮對(duì)小鼠及人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外抑制作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：300316