第一部分FOXD3基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株中的表達(dá)目的：構(gòu)建攜帶有外源性人FOXD3基因的真核表達(dá)載體，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH及SK-N-MC細(xì)胞株，觀測(cè)瘤細(xì)胞中FOXD3過(guò)表達(dá)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。方法：運(yùn)用基因工程方法構(gòu)建FOXD3真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH及SK-N-MC細(xì)胞株，兩種細(xì)胞系均分為三組，即空白對(duì)照組（control）、空白質(zhì)粒組（plasmid negative control, PNC）及目的質(zhì)粒組（FOXD3+），采用熒光顯微鏡觀測(cè)轉(zhuǎn)染效率，運(yùn)用western blot和real-time PCR方法檢測(cè)瘤細(xì)胞中FOXD3蛋白和mRNA過(guò)表達(dá)水平。結(jié)果：構(gòu)建了FOXD3基因的真核表達(dá)載體；兩種細(xì)胞系空白對(duì)照組均無(wú)熒光，PNC及FOXD3+組細(xì)胞均有綠色熒光，且兩組熒光亮度及密度相近，經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析轉(zhuǎn)染效率達(dá)70%-85%。兩種細(xì)胞系空白對(duì)照組和PNC組FOXD3蛋白及mRNA的表達(dá)水平低下，SK-N-SH及SK-N-MC細(xì)胞的FOXD3+組FOXD3蛋白表達(dá)水平較PNC組分別升高5.78倍（P<0... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 FOXD3 基因真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株中的表達(dá)
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 FOXD3 基因過(guò)表達(dá)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、凋亡的影響
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 FOXD3 基因過(guò)表達(dá)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲遷移、血管生成的影響
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
研究小結(jié)
綜述 FOXD3 的生物學(xué)功能研究 THE BIOLOGICAL FUNCTION STUDYON FOXD363
    參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Nanog and transcriptional networks in embryonic stem cell pluripotency[J]. James A Thomson.  Cell Research. 2007(01)



本文編號(hào)：2996956