目的:探究pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro重組慢病毒對膠質(zhì)瘤SHG44細胞生物學(xué)功能的影響及可能作用機制,為防治膠質(zhì)瘤惡變提供理論依據(jù)。方法:1.將LMO3基因構(gòu)建至p LL3.7-CMV-IRES-puro載體,進行慢病毒的包裝,以慢病毒感染膠質(zhì)瘤SHG44細胞株。嘌呤霉素篩選LMO3雙標簽過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株和對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株;2.將細胞分為Control組、Vector組及LMO3組,采用CCK8、EdU試劑盒和流式細胞儀檢測膠質(zhì)瘤SHG44細胞增殖活性和細胞周期分布情況;3.通過細胞遷移實驗在顯微鏡下觀察和記錄24 h,48 h每一組細胞的傷口愈合情況,判斷膠質(zhì)瘤細胞的遷移能力;4.裸鼠皮下分別接種LMO3組和Vector組膠質(zhì)瘤SHG44細胞,觀察裸鼠成瘤能力及腫瘤質(zhì)量來評估LMO3表達變化對裸鼠成瘤能力的影響。5.分別用MAPK的激動劑hEGF和抑制劑U0126與PD98059刺激各組膠質(zhì)瘤SHG44細胞,一部分用于EdU檢測hEGF、U0126處理后SHG44細胞的增殖能力;另一部分收集細胞運用Western Blot技術(shù)檢測LMO3過表達后MEK1、p-MEK1、E... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

LMO3過表達株的鑒定

pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對 SHG44 細胞(注:與 Control 組比較，*P<0.05) 法檢測 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒CK8 結(jié)果，選取貼壁 72 h 后的 SHG44 細胞，EdU 檢原理是：熒光染料 Apollo 通過與 EdU 特異性反應(yīng)，法。結(jié)果顯示：LMO3 組的細胞陽性率(0.290±33l0.043)，Vector 組(0.413±0.024)表明 LMO3 表達上4 細胞的增殖活性見圖 4-3。

圖 4-2 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對 SHG44 細胞增值率的影響(注:與 Control 組比較，*P<0.05)4.2.2 EdU 法檢測 pLL3.7-CMV-LMO3-IRES-puro 重組慢病毒對 SHG44 增殖活性的影響依據(jù) CCK8 結(jié)果，選取貼壁 72 h 后的 SHG44 細胞，EdU 檢測細胞的增殖能力。其主要原理是：熒光染料 Apollo 通過與 EdU 特異性反應(yīng)，觀察細胞 DNA復(fù)制活性的方法。結(jié)果顯示：LMO3 組的細胞陽性率(0.290±0.043)顯著低于Control 組(0.433l0.043)，Vector 組(0.413±0.024)表明 LMO3 表達上調(diào)顯著抑制了膠質(zhì)瘤 SHG44 細胞的增殖活性見圖 4-3。

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]LMO3基因在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達及意義[J]. 李殿煒,李佳蔚,丁永忠,趙治華,呂同德,楊金升,惠玲.  蘭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2009(03)
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本文編號：2996018