目的:觀(guān)察mTOR抑制劑依維莫司（Everolimus,RAD001）對(duì)U251細(xì)胞增殖、自噬的影響;同時(shí)探討RAD001聯(lián)合替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）對(duì)U251細(xì)胞增殖、自噬的影響;為RAD001在人惡性膠質(zhì)瘤治療方面提供可靠的理論依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分。第一部分我們通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討RAD001對(duì)U251細(xì)胞增殖、自噬的影響。首先,我們采用了CCK-8法檢測(cè)不同工作濃度的RAD001在不同時(shí)間段對(duì)U251細(xì)胞增殖抑制的影響。使用透射電鏡觀(guān)測(cè)經(jīng)RAD001處理后U251細(xì)胞內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)的改變。采用免疫熒光觀(guān)測(cè)經(jīng)RAD001處理后的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞GFP-LC3融合蛋白的分布情況。再通過(guò)Western Blot檢測(cè)RAD001對(duì)細(xì)胞內(nèi)LC3B、Becli n-1、P62蛋白水平的影響。第二部分我們通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討RAD001聯(lián)合TMZ對(duì)U251細(xì)胞增殖、自噬的影響。我們將U251細(xì)胞隨機(jī)分為下列三組:空白對(duì)照組、TMZ單藥組以及RAD001與TMZ聯(lián)合組,采用CCK-8法了解各組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制情況;應(yīng)用透射電鏡觀(guān)測(cè)空白對(duì)照組、TMZ單藥及聯(lián)合給藥對(duì)U251細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)... 

【文章來(lái)源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RAD001以濃度及時(shí)間依賴(lài)的方式抑制U251細(xì)胞活性的增殖抑制率曲線(xiàn)圖

OR 抑制劑依維莫司聯(lián)合替莫唑胺對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞自噬作用影響的實(shí)驗(yàn)研鏡觀(guān)察依維莫司對(duì) U251 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變 的 RAD001 處理 U251 細(xì)胞 48h 后，使用透射電子顯微自噬溶酶體的形成。從圖 2 中可見(jiàn)大量雙膜結(jié)構(gòu)的自噬體體，里面含有分解的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線(xiàn)粒體及高爾基復(fù)合物等殘1 能夠誘使 U251 細(xì)胞發(fā)生自噬。

21熒光觀(guān)測(cè)經(jīng) RAD001 處理后的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 GFP-LC3 融合蛋粒數(shù)量明顯多于圖 3A 中熒光斑點(diǎn)數(shù)量，圖 3B 中細(xì)胞產(chǎn)生的B 的自噬作用更強(qiáng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cancer metabolic reprogramming: importance, main features, and potentials for precise targeted anti-cancer therapies[J]. Liem Minh Phan,Sai-Ching Jim Yeung,Mong-Hong Lee.  Cancer Biology & Medicine. 2014(01)



本文編號(hào)：2989582