發(fā)布時(shí)間：2021-01-17 19:01

　　目的基于百草枯（PQ）造帕金森（PD）模型小鼠黑質(zhì)lncRNA表達(dá)譜結(jié)果,選擇lncRNA-AK039862進(jìn)行研究。于體內(nèi)動(dòng)物層面及體外細(xì)胞層面中,探討AK039862在PQ改變神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞或/和多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞中Pafah1b1/Foxa1表達(dá)變化中的作用。方法體內(nèi)動(dòng)物層面:（1）應(yīng)用已建立的PQ致PD模型的方法,即0、5、10 mg/kg PQ、30 mg/kg 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶（MPTP）染毒小鼠,qRT-PCR驗(yàn)證各組黑質(zhì)、海馬、大腦皮質(zhì)中AK039862、AK048895表達(dá)水平變化（n=4）;（2）應(yīng)用多重?zé)晒庠浑s交,探討10 mg/kg組中AK039862表達(dá)的空間（細(xì)胞、亞細(xì)胞）分布特征;（3）應(yīng)用CNC、GO、Pathway、RNA-蛋白質(zhì)相互作用預(yù)測(cè)（RPISeq）分析預(yù)測(cè)并篩選出AK039862潛在靶基因;（4）應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)各組黑質(zhì)中靶基因Pafah1b1/Foxa1的mRNA表達(dá)情況（n=4）。體外細(xì)胞層面:（1）以0、30、60、90、120μM PQ分別處理bv2細(xì)胞24、36、48h,CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖活力（n... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PQ導(dǎo)致多巴胺能細(xì)胞損害機(jī)制圖

福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1，是乙�；饷笍�(fù)合體中重要的調(diào)節(jié)亞基，又稱(chēng) Lis1，無(wú)腦回癥蛋白 1)內(nèi)，轉(zhuǎn)錄方向與 Pafah1b1 相反（屬于反義鏈 lncRNA），如下圖 2 所示。Pafah1b1 在生命進(jìn)程中起到至關(guān)重要的作用，純合子缺失會(huì)致胚胎死亡，雜合子 Pafah1b1基因敲除小鼠的研究報(bào)告顯示，小鼠大腦皮層溝回形成受阻，海馬區(qū)神經(jīng)元遷移速度減慢[41]。半合子 pafah1b1 由于染色體缺失或點(diǎn)突變可影響神經(jīng)細(xì)胞遷移及有絲分裂，從而引起細(xì)胞自發(fā)性破裂而導(dǎo)致無(wú)腦回癥。且在細(xì)胞應(yīng)激（包括氧化應(yīng)激，缺血，線(xiàn)粒體功能障礙，炎癥或疾�。┑臈l件下，lis1 可通過(guò)參與 lis1/Ndel1/Dynein 途徑誘導(dǎo) CDK5 異常磷酸化，異常磷酸化的 CDK5 因?qū)?lis1/Ndel1 /Dynein途徑的高親和性而阻斷微管中動(dòng)力蛋白 ATP 依賴(lài)性釋放，破壞軸突運(yùn)輸線(xiàn)粒體、溶酶體、自噬體等細(xì)胞器及信號(hào)分子等過(guò)程[42]。在諸如 PD 等多種神經(jīng)退行性疾病均涉及 CDK5 活性失調(diào)而涉及神經(jīng)元存活，遷移和分化，突觸發(fā)生，突觸可塑性和神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)輸?shù)雀鞣N生理及病理的調(diào)節(jié)過(guò)程[43, 44]。

而在神經(jīng)元發(fā)育過(guò)程中調(diào)控多巴胺能祖母細(xì)胞；調(diào)控未成熟神經(jīng)元中 Nurr1（Nr4a2）、engrailed 1 的表達(dá)；影響芳香族 L-氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，調(diào)控成熟神經(jīng)元中脫羧酶、酪氨酸羥化酶的合成[49]。Foxa1 對(duì)于下丘腦基底核發(fā)育及功能完整性也是至關(guān)重要，F(xiàn)oxa1 基因敲除小鼠會(huì)在圍產(chǎn)期死亡[50]。綜上所述，基于前人的研究成果及本課題組的前期研究成果，我們提出科學(xué)假設(shè)：百草枯引起的 lncRNA-AK039862 表達(dá)改變可能在百草枯誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損害中發(fā)揮著一定的功能作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1 途徑在百草枯誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞損害中發(fā)揮一定的作用；lncRNA-AK039862/Pafah1b1/Foxa1途徑在炎癥混合培養(yǎng)下的百草枯誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)損害中發(fā)揮一定的作用。本課題擬通過(guò) qRT-PCR、基因過(guò)表達(dá)、基因敲低等技術(shù)手段，從體內(nèi)動(dòng)物層面和體外細(xì)胞層面，探討 LncRNA-AK039862 在百草枯抑制神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞和多巴胺能細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞增殖及改變 Pafah1b1/Foxa1 表達(dá)中的作用。本課題技術(shù)路線(xiàn)用框圖表示如下：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Characterizing and annotating the genome using RNA-seq data[J]. Geng Chen,Tieliu Shi,Leming Shi.  Science China（Life Sciences）. 2017(02)



本文編號(hào)：2983426