目的:組織工程化神經(jīng)作為自體神經(jīng)移植的有效替代物,被廣泛用于橋接神經(jīng)缺損及引導神經(jīng)生長的研究。組織工程化神經(jīng)和自體神經(jīng)移植的最大區(qū)別在于它們所處的再生微環(huán)境不同。如果提供一個理想的再生微環(huán)境,組織工程化神經(jīng)對周圍神經(jīng)的缺損修復還很切實可行的。本研究為了最大程度上地模擬機體再生微環(huán)境,我們選擇共培養(yǎng)雪旺細胞和脂肪干細胞作為種子細胞,并進一步地將它們引入絲素/膠原蛋白神經(jīng)支架中,以此來構(gòu)建組織工程化神經(jīng)。然后用于修復大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損,術(shù)后12周行電生理學及形態(tài)分析學等一系列檢查評估神經(jīng)再生情況。方法:1.分離培養(yǎng)大鼠雪旺細胞（SCs）,并行光鏡下形態(tài)觀察及雪旺細胞標記物S-100免疫熒光染色鑒定;分離培養(yǎng)大鼠脂肪干細胞（ADSCs）,并取其第3代行流式細胞儀分析,觀察其表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105表達情況;取第3代雪旺細胞與脂肪干細胞按2∶1比例進行共培養(yǎng),每天倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。培養(yǎng)14天后,采用免疫熒光染色檢測MAP2、NeuN和GFAP神經(jīng)特異標志物表達情況。2.絲素/膠原蛋白神經(jīng)支架的制備:以桑蠶絲和牛腱為原料制備絲素蛋白和... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

雪旺細胞形態(tài)學及其免疫熒光觀察（A圖第3代雪旺細胞倒置相差顯微鏡下形態(tài)觀察100×，B圖S-100標記物免疫熒光染色400×）

圖 2 脂肪干細胞形態(tài)及其細胞流式檢測（A 圖第 3 代脂肪干細胞倒置相差顯微鏡下形態(tài)觀察 100×，B 圖流式細胞儀檢測脂肪干細胞表型特征）.3 SCs-ADSCs 共培養(yǎng)觀察及鑒定SCs-ADSCs 共培養(yǎng) 24h，原來呈梭形的 ADSCs 以胞核為中心收縮，胞體呈錐、三角形或不規(guī)則形，體積變小并伸出許多短而細的指狀突起。3d 后多數(shù)細的胞體呈球形改變，胞體折光性增強，胞體伸出多個長而粗的突起。7d 時多細胞顯示出神經(jīng)細胞的形態(tài)學特征（圖 3）。共培養(yǎng) 14d 細胞免疫熒光染色顯，細胞不同程度表達 MAP2（25.20±3.03%）、NeuN（22.60±3.20%）以及 GFAP14.80±3.70%）等神經(jīng)細胞特異標記物（圖 4）。

共培養(yǎng)組7d時細胞形態(tài)100×

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2968332