第一部分蟾毒它靈在體外對人膠質(zhì)瘤細胞的生長抑制作用的評價目的：在體外培養(yǎng)環(huán)境下,了解蟾毒它靈對人膠質(zhì)瘤細胞的增殖抑制作用及IC50濃度區(qū)間,初步了解蟾毒它靈對U87細胞侵襲能力和細胞周期的影響。方法：運用XTT法測定蟾毒它靈對U87、U251膠質(zhì)瘤細胞系生長抑制的量-時-效關(guān)系。運用XTT法分別測定不同濃度蟾毒它靈作用于原代培養(yǎng)的人膠質(zhì)瘤細胞Jz001和JZ002以及人膠質(zhì)瘤細胞株U87和U251的72小時生長抑制率。正規(guī)幾率單位法計算蟾毒它靈對每種細胞的IC50。TRANSWELL法測定不同濃度蟾毒它靈對U87細胞侵襲能力的影響。流式細胞技術(shù)測定不同濃度蟾毒它靈對U87細胞周期的影響。結(jié)果：藥物干預(yù)后24、48和72小時,各濃度蟾毒它靈對人膠質(zhì)細胞的增殖抑制作用趨勢接近。在體外培養(yǎng)環(huán)境下,不同濃度的蟾毒它靈作用72小時對人腦膠質(zhì)瘤細胞生長抑制活性有較大差異,對Jz001的IC50為0.063ug/ml,對JZ002的IC50為0.084ug/ml,對U87的IC50為0.071ug/ml,對U251的IC50為0.145ug/ml。2-5ug/ml的蟾毒它靈就能明顯降低U87細胞的侵... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

結(jié)晶紫染色顯示不同濃度蟾毒它靈對U87細胞俊襲能力的影響

溶液輕柔洗滌兩遍，ImlO. 25%胰蛋白酶充分濕潤細胞培養(yǎng)瓶底面，作用1分鐘左右，輕輕搖晃瓶身，細胞層呈小片狀脫落，加入5inl完全培養(yǎng)基終止消化，lOral移液管吹打瓶底，所得細胞懸液置入15ml離心管內(nèi)800轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，吸取一滴細胞懸液，置于血細胞計數(shù)板，并加入臺盼藍染液顯微鏡下計數(shù)，未染色細胞數(shù)目測應(yīng)不低于95%，隨后再次800轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，根據(jù)計數(shù)結(jié)果按比例加入適當體積的無血清DMEM培養(yǎng)液，配置成濃度為0. 5X lOVml的細胞懸液，并置于冰面暫時保存。6.動物模型的建立：小鼠稱重后，按照lOOmg/kg腹腔注射稀釋后的水合氯醛溶液，待小鼠麻醉成功后，將其固定于腦立體定向注射儀，頭皮消毒后，做正中切口約5mm長，暴露矢狀縫，冠狀縫及前図，取中線旁開2. 3mm,冠狀縫前0. 1mm為穿刺點，微型磨鉆鉆孔一枚，lOul微量進樣器抽取5ul細胞懸液，垂直進針，進針深度3. 3誦，后退0.5mm，在多道微量注射菜控制下，以lul/min速度注射細胞懸液，注射完成后，留針5inin，緩慢拔出微量進樣器，骨錯封閉穿刺點，術(shù)野再次消毒后，4-0絲線縫合手術(shù)切口，術(shù)畢待小鼠蘇醒能自行活動后，放回飼養(yǎng)籠內(nèi)。

圖2-3 a-c小鼠被固定于小動物線圈內(nèi)11.腫瘤組織的HE和免疫組化染色：小鼠麻醉后行心臟灌注，斷頭取腦，于4%中性多聚甲醛固定，石錯包埋，做冠狀位石錯切片，層厚4脳。11.1石蠟切片的HE染色：(1)切片浸入二甲苯中l(wèi)Omin;(2)切片浸入二甲苯中l(wèi)Omin;(3) 100%酒精 Imin。(4) 100%酒精 Imin。(5)95%酒精 Imin。(6) 95%酒精 Imin。(7) 90%酒精 Imin。(8) 80%酒精 Imin。

【參考文獻】：
期刊論文
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