目的構(gòu)建LRIG2基因全長及胞外段的慢病毒表達載體，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人膠質(zhì)母細胞瘤細胞系，并觀察其蛋白的亞細胞定位。方法PCR擴增LRIG2基因全長（LRIG2）和胞外段（LRIG2ecto）片段，運用基因重組技術分別將片段插入慢病毒表達載體pLVX-Puro-3×Flag；將測序成功的載體pLVX-Puro-3×Flag-LRIG2和pLVX-Puro-3×Flag-LRIG2ecto包裝成慢病毒后分別轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞系U87，U251；嘌呤霉素篩選得到穩(wěn)定細胞株。WesternBlot和Real-time RT-PCR檢測穩(wěn)定株中LRIG2蛋白和mRNA的表達。激光共聚焦檢測LRIG2全長及胞外段蛋白的亞細胞定位。結(jié)果LRIG2全長及胞外段重組質(zhì)粒測序序列完全正確。成功得到過表達LRIG2及LRIG2ecto的U87, U251穩(wěn)定株，U87中LRIG2及LRIG2ecto過表達組相應的mRNA表達分別是對照組的8.42±0.50和29.58±0.98倍；U251中分別是對照組的65.83±4.14和126.34±0.98倍（P<0.01）。免疫熒光顯示在U87及U251中，LR... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
主要縮略詞表
前言
參考文獻
中文摘要
Abstract
第一部分 LRIG2 全長及胞外段慢病毒表達載體的構(gòu)建及其在膠質(zhì)母細胞瘤中的亞細胞定位
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
    附圖
第二部分 LRIG2 全長及胞外段對膠質(zhì)母細胞瘤細胞系增殖和凋亡的影響及其機制
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
    附圖
第三部分 LRIG2 全長及胞外段對膠質(zhì)母細胞瘤細胞系遷移和侵襲的影響
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻
    附圖
綜述
    參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Effects of RNAi-mediated Gene Silencing of LRIG1 on Proliferation and Invasion of Glioma Cells[J]. 毛峰,王寶峰,席桂發(fā),孫偉,張華楸,葉飛,郭東生,雷霆.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2012(02)



本文編號：2962518