發(fā)布時(shí)間：2021-01-06 13:54

　　目的:Girdin是2005年新發(fā)現(xiàn)的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,它能夠募集并聯(lián)結(jié)、調(diào)控細(xì)胞內(nèi)微絲,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、遷移、血管生成及自噬等功能。細(xì)胞遷移不僅在細(xì)胞重要生理活動(dòng)中起作用,同時(shí)也是腫瘤發(fā)生、發(fā)展等病理過程中的重要步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前有研究報(bào)道,Girdin蛋白在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,為進(jìn)一步探索Girdin蛋白與腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的作用機(jī)制,本研究著眼于Girdin在膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲中的功能并闡明其相關(guān)分子機(jī)制,全面了解Girdin蛋白的功能為臨床治療惡性膠質(zhì)瘤提供新的靶點(diǎn)。方法:第一部分:1、在PCDH-P-Vector載體的基礎(chǔ)上構(gòu)建PCDH-P-Girdin過表達(dá)慢病毒表達(dá)質(zhì)粒,利用HEK-293T細(xì)胞包裝慢病毒。2、慢病毒感染惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株LN229,提高Girdin蛋白的表達(dá)水平;通過Western Blotting技術(shù)驗(yàn)證其表達(dá)效率,并篩選出穩(wěn)定表達(dá)的克隆。3、利用生長曲線分析Girdin過表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響。4、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測Girdin過表達(dá)對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的影響。5、粘附實(shí)驗(yàn)檢測Girdin過表達(dá)對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞粘附能力... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ－ＥＦｌ－Ｐｕｒｏ慢病毒表達(dá)載體圖譜??２分別用?Ｂａｍ?Ｈ?Ｉ?和?Ｎｏｔ?Ｉ?酶雙酶切ＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ?－ＥＦ１?－Ｐｕｒｏ?載體和?Ｇｉｒｄｉｎ??

和Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９。通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測穩(wěn)定細(xì)胞中Ｇｉｒｄｉｎ的表達(dá)情況，結(jié)??果顯示與對(duì)照組Ｖｅｃｔｏｒ?／ＬＮ２２９細(xì)胞相比，Ｇｉｒｄｉｎ?／ＬＮ２２９細(xì)胞Ｇｉｒｄｉｎ蛋白表達(dá)顯??著增加（如圖２Ａ所示）。??Ａ??八?ＬＮ２２９?Ｖｅｃｔｏｒ／ＬＮ２２９?Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９??Ｇｉｒｄｉｎ?－??ＧＡＰＤＨ??圖２?Ａ?ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ檢測Ｇｉｒｄｉｎ蛋白在ＬＮ２２９細(xì)胞中的表達(dá)情況??為了觀察Ｇｉｒｄｉｎ蛋白高表達(dá)后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響，本研究釆用??增殖實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察６天中兩組細(xì)胞存活增殖能力的差異，結(jié)果顯示與Ｖｅｃｔｏｒ??／ＬＮ２２９細(xì)胞相比較，Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９細(xì)胞的增殖能力沒有明顯變化，差異不具有??統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（如圖２Ｂ所示）。??２５??

和Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９。通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測穩(wěn)定細(xì)胞中Ｇｉｒｄｉｎ的表達(dá)情況，結(jié)??果顯示與對(duì)照組Ｖｅｃｔｏｒ?／ＬＮ２２９細(xì)胞相比，Ｇｉｒｄｉｎ?／ＬＮ２２９細(xì)胞Ｇｉｒｄｉｎ蛋白表達(dá)顯??著增加（如圖２Ａ所示）。??Ａ??八?ＬＮ２２９?Ｖｅｃｔｏｒ／ＬＮ２２９?Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９??Ｇｉｒｄｉｎ?－??ＧＡＰＤＨ??圖２?Ａ?ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ檢測Ｇｉｒｄｉｎ蛋白在ＬＮ２２９細(xì)胞中的表達(dá)情況??為了觀察Ｇｉｒｄｉｎ蛋白高表達(dá)后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力的影響，本研究釆用??增殖實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察６天中兩組細(xì)胞存活增殖能力的差異，結(jié)果顯示與Ｖｅｃｔｏｒ??／ＬＮ２２９細(xì)胞相比較，Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９細(xì)胞的增殖能力沒有明顯變化，差異不具有??統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（如圖２Ｂ所示）。??２５??


本文編號(hào)：2960690