目的:Girdin是2005年新發(fā)現(xiàn)的肌動蛋白結合蛋白,它能夠募集并聯(lián)結、調(diào)控細胞內(nèi)微絲,具有調(diào)節(jié)細胞生長、遷移、血管生成及自噬等功能。細胞遷移不僅在細胞重要生理活動中起作用,同時也是腫瘤發(fā)生、發(fā)展等病理過程中的重要步驟和關鍵環(huán)節(jié)。目前有研究報道,Girdin蛋白在促進腫瘤細胞侵襲和轉移過程中發(fā)揮重要作用,為進一步探索Girdin蛋白與腫瘤細胞遷移和侵襲的作用機制,本研究著眼于Girdin在膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲中的功能并闡明其相關分子機制,全面了解Girdin蛋白的功能為臨床治療惡性膠質(zhì)瘤提供新的靶點。方法:第一部分:1、在PCDH-P-Vector載體的基礎上構建PCDH-P-Girdin過表達慢病毒表達質(zhì)粒,利用HEK-293T細胞包裝慢病毒。2、慢病毒感染惡性膠質(zhì)瘤細胞株LN229,提高Girdin蛋白的表達水平;通過Western Blotting技術驗證其表達效率,并篩選出穩(wěn)定表達的克隆。3、利用生長曲線分析Girdin過表達對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響。4、劃痕實驗檢測Girdin過表達對惡性膠質(zhì)瘤細胞運動能力的影響。5、粘附實驗檢測Girdin過表達對惡性膠質(zhì)瘤細胞粘附能力... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ－ＥＦｌ－Ｐｕｒｏ慢病毒表達載體圖譜??２分別用?Ｂａｍ?Ｈ?Ｉ?和?Ｎｏｔ?Ｉ?酶雙酶切ＣＤＨ－ＣＭＶ－ＭＣＳ?－ＥＦ１?－Ｐｕｒｏ?載體和?Ｇｉｒｄｉｎ??

和Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９。通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ檢測穩(wěn)定細胞中Ｇｉｒｄｉｎ的表達情況，結??果顯示與對照組Ｖｅｃｔｏｒ?／ＬＮ２２９細胞相比，Ｇｉｒｄｉｎ?／ＬＮ２２９細胞Ｇｉｒｄｉｎ蛋白表達顯??著增加（如圖２Ａ所示）。??Ａ??八?ＬＮ２２９?Ｖｅｃｔｏｒ／ＬＮ２２９?Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９??Ｇｉｒｄｉｎ?－??ＧＡＰＤＨ??圖２?Ａ?ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ檢測Ｇｉｒｄｉｎ蛋白在ＬＮ２２９細胞中的表達情況??為了觀察Ｇｉｒｄｉｎ蛋白高表達后對膠質(zhì)瘤細胞增殖能力的影響，本研究釆用??增殖實驗連續(xù)觀察６天中兩組細胞存活增殖能力的差異，結果顯示與Ｖｅｃｔｏｒ??／ＬＮ２２９細胞相比較，Ｇｉｒｄｉｎ／ＬＮ２２９細胞的增殖能力沒有明顯變化，差異不具有??統(tǒng)計學意義（如圖２Ｂ所示）。??２５??

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本文編號：2960690