目的:探討miR-200a與MAGED4之間是否存在靶向調(diào)控關(guān)系,以及miR-200a對膠質(zhì)瘤遷移侵襲能力的影響。方法:（1）運(yùn)用多種生物信息學(xué)在線軟件,獲取MAGED4基因的3′UTR下游序列,預(yù)測MAGED4潛在的microRNA調(diào)控因子及結(jié)合位點(diǎn)。運(yùn)用生物信息學(xué)在線軟件獲取microRNA基因的相關(guān)信息;（2）microRNA qRT-PCR:提取總RNA檢測正常腦組織和膠質(zhì)瘤細(xì)胞株miR-200a表達(dá)量;（3）膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中轉(zhuǎn)入外源性miR-200a Minics或Inhibitors,上調(diào)或下調(diào)miR-200a表達(dá);（4）分別構(gòu)建MAGED4 3′UTR野生型（WT）和突變型（MUT）熒光素酶報(bào)告基因載體(WT^{MAGED4-3′UTR},MUT^{MAGED4-3′UTR}),將這兩種載體分別轉(zhuǎn)入HEK 293T細(xì)胞、A172細(xì)胞和U87細(xì)胞,檢測熒光素酶活性,驗(yàn)證miR-200a對MAGED4的靶向調(diào)控作用;（5）qRT-PCR和Western Bloting:提取細(xì)胞總RNA,合成cDNA,用于qRT-PCR;提取細(xì)胞全蛋白進(jìn)行West... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MAGED4是miR-200a的潛在靶目標(biāo)A.篩選miRNA調(diào)控因子.B.MAGED4與miR-200a的潛在結(jié)合位點(diǎn).

圖 2-1 miR-200a 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的表達(dá)72 組:A172 細(xì)胞;U87 組:U87 細(xì)胞;U251 組:U25<0.01 為兩組間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.條表示平ion in glioma cells.NB group:Normal brain tissue;A1 group:U251 cell line . miR-200a expression was standard deviation from the mean.質(zhì)瘤細(xì)胞中 miR-200a 的表達(dá)ics 、Inhibitors 和 ngative contro（ 48h 后檢測各組 miR-200a 的相對兩者之間，miR-200a 的相對表達(dá)量無ock 組，Minics 組 miR-200a 的相對（P＜0.01），說明在細(xì)胞中成功上調(diào)對表達(dá)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

不同 miR-200a 轉(zhuǎn)染 A172 后 miR-200a mRNA性對照組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對照;模擬物組:細(xì)胞轉(zhuǎn)劑.U6 作為 miR-200a 的內(nèi)參.與空白組比較, 值的標(biāo)準(zhǔn)偏差.pression in A172 infected different miR-200acells infected with negative control ;Minics groupls infected with miR-200a Inhibitors . miR-200aup. Bars represent standard deviation from the m表 3-2 qRT-PCR 檢測 U87 細(xì)胞 miR-200a 表達(dá)able3-2 qRT-PCR test for miR-200a expression miR-200a Ct 值 ΔCt ΔΔCt 23.74 6.62 - 21.33 5.47 -1.15 25.72 8.03 1.41 23.46 6.53 -0.09


本文編號：2944502