腫瘤的代謝重編程是維持腫瘤細(xì)胞增殖存活的關(guān)鍵。從20世紀(jì)Warburg效應(yīng)提出以來(lái),人們對(duì)腫瘤代謝的認(rèn)識(shí)不斷加深,代謝重編程被認(rèn)為是正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤的顯著性標(biāo)志。在腫瘤細(xì)胞中代謝重編程主要表現(xiàn)為有氧糖酵解的增強(qiáng)和谷氨酰胺代謝的活躍等。神經(jīng)膠質(zhì)瘤（Glioma）是一種最常見的顱內(nèi)腫瘤,因其高復(fù)發(fā)率、高死亡率的特點(diǎn),一直以來(lái)被看作是臨床治療上的難題。課題組前期表達(dá)純化得到的東亞鉗蝎氯離子通道毒素蛋白（Buthus martensii Karshch chlorion channel toxin,BmKCT）,已被證實(shí)能夠抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲,但是分子機(jī)制尚不清楚。本研究主要是通過(guò)代謝組學(xué)的方法探究BmKCT抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。首先,通過(guò)蛋白表達(dá)純化得到融合蛋白GST-BmKCT,利用圓二色譜檢測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和熱穩(wěn)定性。利用MTT法檢測(cè)GST-BmK CT的增殖抑制活性。利用氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS）分析鑒定出膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)63種代謝產(chǎn)物,并且發(fā)現(xiàn)與GST處理組相比,BnKCT處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞48小時(shí)胞內(nèi)丙酮酸水平降低,谷氨酸和谷氨酰胺在胞內(nèi)聚集。丙酮酸是由丙酮酸激酶（P... 

【文章來(lái)源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２東亞鉗蝎氯毒素的３Ｄ結(jié)構(gòu)模型［３９］??．［３９１??

酰胺溶解就可以使細(xì)胞免于死亡。谷氨酰胺溶解是一種線粒體途徑，涉及谷氨酰胺??酶對(duì)谷氨酰胺的初始脫氨基產(chǎn)生谷氨酸，然后將谷氨酸轉(zhuǎn)化為ａ－ＫＧ，參與ＴＣＡ循環(huán)??產(chǎn)生ＡＴＰ和合成代謝碳（如圖１．４所示）。谷氨酸轉(zhuǎn)化為ａ－ＫＧ是由谷氨酸脫氫酶１??或其他轉(zhuǎn)氨酶催化的（包括谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶２和谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶２），其??中谷氨酸脫氫酶最為主要。谷氨酸脫氫酶是一種線粒體酶，大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)??胞中具有廣泛表達(dá)單一的由ＧＬＵＤ１基因編碼的ＧＤＨ１酶特性，通常在人類癌癥中??升高。研究己證實(shí)ｍＴＯＲＣｌ可通過(guò)過(guò)表達(dá)ＳＩＲＴ４，從而下調(diào)ＧＬＵＤ１催化活性，抑??制癌細(xì)胞增殖Ｐ］。谷氨酰胺溶解還支持分子的產(chǎn)生，例如谷胱甘肽和ＮＡＤＰＨ，它們??保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激。越來(lái)越多的證據(jù)表明，許多類型的癌細(xì)胞具有控制氧化還??原改變的特性，與正常細(xì)胞相比，ＲＯＳ水平增加［７２－７３］�；钚匝醯倪m度增加可促進(jìn)細(xì)??胞增殖和分化

Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ??Ｇｌｕｔａｍａｔｅ??圖１．４谷氨酸在細(xì)胞內(nèi)多種代謝途徑？??Ｆｉｇ?１．４?Ｇｌｕｔａｍａｔｅ?ｉｓ?ｒｅｑｕｉｒｅｄ?ｆｏｒ?ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｉｎ?ｃｅｌｌｓ［７０］??１．４論文的設(shè)計(jì)思路??１．４．１研究?jī)?nèi)容與意義??神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞簡(jiǎn)稱膠質(zhì)瘤，是一種死亡率高的原發(fā)性腦腫瘤。目前治療膠質(zhì)??瘤的方法仍是手術(shù)為主，放化療為輔，但是依舊無(wú)法達(dá)到完全治愈的效果。近些年??新的治療模式如免疫治療、分子靶向治療等也在臨床上相繼開展，從腫瘤的分子水??平出發(fā)尋找合適的靶向藥物就顯得尤為重要。從１９９３年蝎氯離子通道毒素被分離鑒??定至今，己被證實(shí)能特異地結(jié)合膠質(zhì)瘤細(xì)胞并抑制其侵襲和轉(zhuǎn)移［４（Ｍ３］。及》ＫＣＴ與??ＣＴＸ具有６８％的同源性，同樣具有抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和增殖的能力［４５］，并能誘導(dǎo)??膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡［５１］，但是ＣＴ抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和促凋亡的機(jī)制尚不清楚。??代謝重編程已經(jīng)被確定為是腫瘤惡性轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一。代謝重編程主要發(fā)生在??腫瘤細(xì)胞中，是癌細(xì)胞為了滿足自身發(fā)展所采取的策略。通過(guò)阻斷腫瘤細(xì)胞特有的??代謝過(guò)程是有效地干預(yù)腫瘤增殖和生長(zhǎng)的方法之一。??本研宄利用分子克隆表達(dá)純化了融合蛋白ＧＳＴ－５ｗＫＣＴ和對(duì)照標(biāo)簽蛋白ＧＳＴ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]東亞鉗蝎氯毒素通過(guò)下調(diào)PKM2介導(dǎo)的有氧糖酵解抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖活性[J]. 蔡雨晴,杜軍,薄濤,郭田田,付月君,梁愛華.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2019(01)
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[5]谷氨酸代謝與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 呂美珍,曾而明.  中華神經(jīng)外科雜志. 2017 (05)
[6]基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9在膠質(zhì)瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用[J]. 曾吉玲,楊振宇,馬千權(quán),張立芹,羅學(xué)港.  臨床與病理雜志. 2015(02)
[7]MMP-2/MMP-9在炎癥中的研究進(jìn)展[J]. 王海波,俞為榮.  醫(yī)學(xué)綜述. 2014(17)
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[9]代謝組學(xué)研究策略與方法的新進(jìn)展[J]. 夏建飛,梁瓊麟,胡坪,王義明,羅國(guó)安.  分析化學(xué). 2009(01)
[10]代謝組學(xué)——腫瘤學(xué)研究的重要技術(shù)平臺(tái)[J]. 洪毅,談冶雄,王紅陽(yáng).  中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2007(06)

博士論文
[1]東亞鉗蝎氯離子通道毒素的生物活性研究[D]. 殷麗天.山西大學(xué) 2009



本文編號(hào)：2937572