目的:帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,其主要病理學(xué)特征是中腦黑質(zhì)致密帶（substantia nigra pars compacta,SNpc）多巴胺（dopamine,DA）能神經(jīng)元缺失以及路易小體的出現(xiàn)。大量的研究證實(shí),黑質(zhì)（substantia nigra,SN）部位鐵的異常聚集是PD發(fā)病的主要原因。鐵在腦內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)有兩種主要的途徑:轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin,Tf）結(jié)合鐵和非轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵（non-transferrin binding iron,NTBI）,其中二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（divalent metal transporter 1,DMT1）是主要的NTBI轉(zhuǎn)運(yùn)形式。而鐵的轉(zhuǎn)出則是通過鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（ferroportin 1,FPN1）實(shí)現(xiàn)的,FPN1是目前所知唯一一種跨膜的鐵轉(zhuǎn)出蛋白。在人類中,不管未分化還是分化的少突膠質(zhì)細(xì)胞,鐵的轉(zhuǎn)入都是通過Tf或鐵蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1（transferrin receptor1,TfR1）結(jié)合介導(dǎo)。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,少突膠質(zhì)細(xì)胞是主要的鐵染色陽性細(xì)胞,而在PD SN... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料和方法
    1 MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞、原代大鼠OPCs培養(yǎng)
        1.1 細(xì)胞來源
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 常用液體配制
        1.5 MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)步驟
        1.6 原代大鼠OPCs培養(yǎng)與篩選
    2 免疫組織化學(xué)方法鑒定原代培養(yǎng)大鼠OPCs純度
        2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.3 常用液體的配制
        2.4 操作步驟
    3 MTT檢測6-OHDA對MO3.13OPCs活性的影響
        3.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2 常用儀器
        3.3 MTT的方法原理與操作步驟
    4 PMA誘導(dǎo)未分化的MO3.13少突膠質(zhì)分化成分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞
        4.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2 實(shí)驗(yàn)操作步驟
    5 鈣黃綠素負(fù)載檢測培養(yǎng)未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞、分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)入功能
        5.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.3 液體配制
        5.4 未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞接種與藥物處理
        5.5 分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞接種與藥物處理
        5.6 鐵轉(zhuǎn)入實(shí)驗(yàn)
    6 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞、分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞FPN1、TfR1、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)
        6.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.3 細(xì)胞接種與藥物處理
        6.4 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        6.5 熒光實(shí)時(shí)定量（realtime）PCR
    7 Westernblot檢測MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞和原代大鼠OPCsIRP1、TfR1、FPN1蛋白表達(dá)
        7.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        7.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        7.3 所用藥物的配制
        7.4 常用液體配制
        7.5 細(xì)胞接種與藥物處理
        7.6 總蛋白的提取和定量
        7.7 十二烷基硫酸鈉－聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠電泳及轉(zhuǎn)膜
    8 動(dòng)物準(zhǔn)備
        8.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        8.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        8.3 常用液體配制
        8.4 PD大鼠模型制備
    9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    1 MTT檢測不同濃度6-OHDA處理未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞活力
    2 10μM、100μM6-OHDA處理未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞IRP1、FPN1和TfR1的蛋白表達(dá)水平
    3 10μM、100μM6-OHDA處理未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞FPN1和TfR1的mRNA表達(dá)水平
    4 10μM、100μM6-OHDA對未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)入功能的影響
    5 10μM、100μM6-OHDA處理未分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β和TNF-α的mRNA表達(dá)水平
    6 PMA誘導(dǎo)為分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞分化成熟
    7 10、100μMμM6-OHDA處理分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞IRP1、FPN1和TfR1的蛋白表達(dá)水平
    8 10μM、100μM6-OHDA處理分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞FPN1和TfR1的mRNA表達(dá)水平
    9 10μM、100μM6-OHDA對分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞鐵轉(zhuǎn)入功能的影響
    10 10μM、100μM6-OHDA處理分化的MO3.13少突膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β和TNF-α的mRNA表達(dá)水平
    11 6-OHDA處理OPCs促進(jìn)細(xì)胞的增殖
    12 提取純化后的原代大鼠OPCs已達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需要的水平
    13 6-OHDA處理原代大鼠OPCsIRP1、FPN1和TfR1的蛋白表達(dá)水平
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]低氧誘導(dǎo)因子對鐵代謝的調(diào)節(jié)（英文）[J]. 許曼曼,王俊,謝俊霞.  生理學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]Oligodendroglia and neurotrophic factors in neurodegeneration[J]. Andrew N.Bankston,Mariana D.Mandler,Yue Feng.  Neuroscience Bulletin. 2013(02)
[3]NG2 Cell Response in the CNP-EGFP Mouse After Contusive Spinal Cord Injury[J]. JUDITH M LYTLE,RAMESH CHITTAJALLU,JEAN R WRATHALL,VITTORIO GALLO.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2009(01)



本文編號(hào)：2920582