研究背景:由于具有高發(fā)病率,高復(fù)發(fā)率,高致殘率和高致死率特點,急性腦血管病(ACVD)已經(jīng)是嚴重威脅人類身心健康,造成家庭和社會沉重負擔(dān)的罪魁禍首,因此倍受關(guān)注。微核糖核酸(miRNA)是一類廣泛存在真核細胞的長約20~25bp的非編碼核糖核酸(RNA),具有高度保守的特點。RNA聚合酶II負責(zé)將編碼miRNA的基因翻譯成初始miRNA(pri-miRNA)。pri-miRNA長度可達數(shù)千個堿基對,具有一個或多個莖環(huán)結(jié)構(gòu),它由RNA酶Ⅲ-Drosha和雙鏈RNA結(jié)合蛋白Pasha的識別和裂解,并在DiGeorge關(guān)鍵區(qū)域基因8(DGCR8)的幫助下生成一個70~90個核苷酸的前體miRNA(pre-miRNA)。pre-miRNA通過exportin-5的功能從細胞核轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)中。在細胞質(zhì)中,pre-miRNA通過RNA酶Ⅲ-Dicer的修飾,形成成熟的雙鏈miRNA。接下來這種成熟的雙鏈miRNA會很快被整合到miRNA介導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中。通常一條鏈被降解,成熟的單鏈miRNA能保留在該RISC中。然后成熟的單鏈miRNA能夠通過堿基互補配對原則與靶信使RNA(mRNA)的3,-UTR的堿基序列相結(jié)合,轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶mRNA的表達活性、抑制其表達或引起靶mRNA的降解,從而參與生物體的細胞周期調(diào)控、凋亡、分化以及免疫炎癥等一系列重要的病理生理過程。lin-4是1993年第一個在線蟲中發(fā)現(xiàn)的生命周期中具有控制時序發(fā)育的miRNA。據(jù)估計脊椎動物的基因組編碼至少1000多個獨特的miRNA,預(yù)計將調(diào)節(jié)至少50%基因的表達。雖然miRNA在人類中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了超過735種,約占人類基因的1~4%,據(jù)報道,絕大多數(shù)miRNA可以調(diào)控200多個mRNA,這使得miRNA成為最大的一類基因表達調(diào)控因子。但是還有許多關(guān)于它們在細胞中的確切功能和作用仍然有待解決。一個miRNA可以調(diào)控多個靶mRNA的表達,也可以幾個miRNA的組合成為一個miRNA基因簇來精細調(diào)控某個靶mRNA的表達,同時某些mRNA和(或)其蛋白編碼的產(chǎn)物也可以通過前反饋機制控制某些miRNA的表達,其結(jié)果是導(dǎo)致相應(yīng)蛋白質(zhì)合成的缺失或減少,導(dǎo)致疾病的發(fā)生。研究證實miRNA除了存在于細胞內(nèi),還存在細胞外各種體液中,如血液、尿液、唾液,腦脊液,胸腹水等。同時還發(fā)現(xiàn)同一種miRNA可存在于幾種不同的體液中,而有些miRNA只存在于一種體液中,如血漿中miR-224,其中血漿中特異的miRNA最多。miRNA在血中大量存在且相對穩(wěn)定,可能與miRNA具有對抗內(nèi)源性核糖核酸酶(RNase)活性的機制,耐RNase降解有關(guān),致使其在血循環(huán)中可長期穩(wěn)定存在,煮沸、酸堿環(huán)境、反復(fù)凍融、長期保存等各種處理方法均不會造成miRNA的損失,因此血清或血漿miRNA作為一種有潛力的生物標志物,臨床應(yīng)用價值大。miRNA相關(guān)的研究涉及領(lǐng)域較為廣泛,比如腫瘤,心血管疾病,ACVD,糖尿病,肺部疾病、免疫等等方面。ACVD包括急性缺血性腦卒中(AIS)和急性出血性腦卒中(AHS),其中前者又分為急性腦梗死(ACI)和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)。雖然臨床表現(xiàn)形式各異,但是發(fā)病機制卻存在諸多相似之處。氧化應(yīng)激,炎癥反應(yīng),水腫形成,神經(jīng)細胞凋亡等等是參與ACVD繼發(fā)性腦損傷的重要因素。研究發(fā)現(xiàn),ACVD患者中與炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激相關(guān)的miR-29b和miR-424水平有差異性表達,提示其可能參與調(diào)控ACVD腦組織的損傷或保護機制。但是,不同的研究結(jié)果也存在著爭議,比如有的研究認為血液和或腦組織miR-29b上調(diào),另外有的實驗結(jié)果卻支持miR-29b下調(diào)。miR-424在腦缺血再灌注不同時間點表達也不同,因此,miR-29b和miR-424在ACVD患者血循環(huán)中表達水平如何?是否可以作為早期診斷ACVD的生物學(xué)標志物?是否能夠用于ACI和TIA的早期鑒別診斷?是否與ACVD的短期預(yù)后相關(guān)?是否在ACVD不同的亞組分析中仍有差異性表達?仍然有待于進一步研究。因此本文將從兩部分對上述問題進行研究探討,概述如下:第一部分血循環(huán)miR-29b和mi R-424與急性缺血性腦卒中的分類及短期預(yù)后的相關(guān)性目的分析血循環(huán)miR-29b和miR-424在急性缺血性腦卒中(AIS)患者中的表達水平,探索miR-29b和miR-424與AIS的分類及短期預(yù)后的相關(guān)性。方法選取我院2016年5月~2017年5月發(fā)病后24h內(nèi)入住急診科或神經(jīng)內(nèi)科的102例AIS住院患者為研究對象(ACI組70例和TIA組32例),選取同期健康體檢者30例為對照組。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測三組的血循環(huán)miR-29b和miR-424表達水平,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)濃度,同時進行血常規(guī)檢測計算出血小板/淋巴細胞比率(PLR)。發(fā)病后進行1個月跟蹤隨訪,根據(jù)格拉斯哥預(yù)后評分(GOS)來評估ACI患者的短期預(yù)后(GOS評分4~5分為預(yù)后良好,GOS評分1~3分為預(yù)后不良),將ACI組分為預(yù)后良好組和預(yù)后不良組進行亞組分析。依據(jù)梗死部位直徑是否大于2cm,將ACI組分為腔隙性腦梗死組(LI組)和非腔隙性腦梗死組(非LI組)進行亞組分析。采用2~(-ΔΔCT)法計算相對于對照組miRNA的表達水平的fold change(倍數(shù)變化)。所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析均采用統(tǒng)計軟件SPSS19.0。數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布及方差齊性,兩樣本均數(shù)之間采用獨立樣本t檢驗,不滿足采用t~/檢驗;多個樣本均數(shù)間采用單因素方差分析(ANOVA),滿足于方差齊性,兩兩比較采用LSD法檢驗,不滿足方差齊性,采用Tamhane法,所有計量資料結(jié)果用（？）±S表示;數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布,相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析;分類變量組間差異比較采用χ~2檢驗;檢驗水準α=0.05,P0.05表明有統(tǒng)計學(xué)意義。分別比較ACI組,TIA組與對照組的血循環(huán)miR-29b、miR-424、血清TNF-α和血PLR水平間的差異性,比較ACI不同預(yù)后組患者的miR-29b、miR-424、TNF-α和PLR水平間的差異性,比較ACI不同亞組(LI組和非LI組)患者的miR-29b、miR-424、TNF-α和PLR水平間的差異性,同時分析血循環(huán)miR-29b、miR-424和炎性因子(TNF-α和PLR)與AIS的分類及ACI短期預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果ACI組患者血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平明顯低于TIA組和對照組(均P0.05),血清TNF-α水平明顯高于TIA組和對照組(均P0.05),而TIA組和對照組間miR-29b、miR-424和TNF-α比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(均P0.05);ACI組患者血PLR水平明顯高于TIA組和對照組(均P0.05),而且TIA組PLR也明顯高于對照組(P0.05);ACI組預(yù)后不良組miR-29b和miR-424相對表達水平明顯低于預(yù)后良好組,PLR水平明顯高于預(yù)后良好組(均P0.05),而ACI組不同預(yù)后組間TNF-α比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);ACI亞組LI組和非LI組間miR-29b、miR-424、TNF-α和PLR比較無明顯差異(均P0.05);ACI組miR-29b和miR-424與TNF-α和PLR均呈負相關(guān)(r_s=-0.265,P=0.027;r_s=-0.322,P=0.007;r_s=-0.469,P=0.000;r_s=-0.683,P=0.000),與發(fā)病后1個月的GOS評分均呈正相關(guān)(r_s=0.350,P=0.003;r_s=0.282,P=0.018)。結(jié)論1、與健康對照組相比,血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平在ACI組患者中均明顯下調(diào),可以作為診斷ACI潛在的生物學(xué)標志物。2、血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平在ACI和TIA組患者中有明顯差異,可以初步用于AIS的早期分類和鑒別診斷。3、LI組和非LI組血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,提示miR-29b和miR-424水平的高低不能用于鑒別LI和非LI。4、血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平與ACI的炎性因子呈負相關(guān),與發(fā)病后1個月的GOS評分呈正相關(guān),且ACI不同預(yù)后組miR-29b和miR-424均有顯著性差異,可以初步用來評估其短期預(yù)后。第二部分血循環(huán)miR-29b和miR-424在急性腦出血中的表達及其臨床意義目的分析血循環(huán)miR-29b和miR-424在急性腦出血(ACH)患者中的表達水平,探索miR-29b、miR-424與ACH的相關(guān)性。方法選取我院2016年8月~2017年10月發(fā)病后24h內(nèi)入住急診科,神經(jīng)內(nèi)科或神經(jīng)外科的58例ACH住院患者為研究對象,選取同期健康體檢者35例為對照組。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)分別檢測ACH組患者發(fā)病后第3天和對照組體檢當(dāng)天的血循環(huán)miR-29b和miR-424表達水平,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測ACH組患者發(fā)病后第3天和對照組體檢當(dāng)天的血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和S100蛋白濃度。發(fā)病后進行1個月跟蹤隨訪,根據(jù)格拉斯哥預(yù)后評分(GOS)來評估ACH患者的短期預(yù)后(GOS評分4~5分為預(yù)后良好,GOS評分1~3分為預(yù)后不良),將ACH組分為預(yù)后良好組和預(yù)后不良組進行亞組分析。依據(jù)發(fā)病后第3天是否繼發(fā)出血后腦梗死,將ACH組分為ACH繼發(fā)性腦梗死組(SCI組)和ACH無繼發(fā)性腦梗死組(Non-SCI組)進行亞組分析。采用2~(-ΔΔCT)法計算相對于對照組miRNA的表達水平的fold change(倍數(shù)變化)。所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析均采用統(tǒng)計軟件SPSS19.0。數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布及方差齊性,兩樣本均數(shù)之間采用獨立樣本t檢驗,不滿足采用t~/檢驗,所有計量資料結(jié)果用（？）±S表示;數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布,相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析;分類變量組間差異比較采用χ~2檢驗;檢驗水準α=0.05,P0.05表明有統(tǒng)計學(xué)意義。分別比較ACH組與對照組的血循環(huán)miR-29b、miR-424、血清NSE和S100蛋白水平間的差異性,比較ACH不同亞組(SCI組和Non-SCI組)患者的miR-29b、miR-424、血清NSE和S100蛋白水平間的差異性,比較ACH不同預(yù)后組患者的miR-29b、miR-424、血清NSE和S100蛋白水平間的差異性,以及顱腦手術(shù)干預(yù)比例的差異性,同時分析ACH患者血循環(huán)miR-29b、miR-424與NSE、S100蛋白及其短期預(yù)后(GOS評分)和顱腦手術(shù)干預(yù)的相關(guān)性。結(jié)果ACH組患者血循環(huán)miR-424相對表達水平明顯低于對照組(P0.05);ACH組患者血清NSE和S100蛋白水平明顯高于對照組(均P0.05);而ACH組患者血循環(huán)miR-29b略低于對照組,但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);ACH亞組SCI組miR-424相對表達水平明顯低于Non-SCI組(P0.05),而SCI組miR-29b略低于Non-SCI組,但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),組間NSE和S100蛋白比較也無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(均P0.05);ACH預(yù)后不良組miR-29b和miR-424相對表達水平明顯低于預(yù)后良好組(均P0.05);而ACH不同預(yù)后組間NSE和S100蛋白比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(均P0.05);ACH預(yù)后不良組顱腦手術(shù)干預(yù)比例明顯高于預(yù)后良好組(81.0%vs 24.3%,P=0.000);ACH組miR-29b與NSE呈負相關(guān),與發(fā)病后1個月的GOS評分呈正相關(guān),均有統(tǒng)計學(xué)意義(r_s=-0.290,P=0.027;r_s=0.400,P=0.002),雖然與S100蛋白及顱腦手術(shù)干預(yù)呈負相關(guān),但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(r_s=-0.199,P=0.134;r_s=-0.153,P=0.251);ACH組miR-424與NSE、S100蛋白及顱腦手術(shù)干預(yù)呈負相關(guān),與GOS評分呈正相關(guān),均有統(tǒng)計學(xué)意義(r_s=-0.289,P=0.028;r_s=-0.267,P=0.043;r_s=-0.317,P=0.015;r_s=0.311,P=0.017)。結(jié)論1、與健康對照組相比,血循環(huán)miR-424相對表達水平在ACH組患者中明顯下調(diào),可以作為診斷ACH潛在的生物學(xué)標志物。2、血循環(huán)miR-424相對表達水平在ACH是否繼發(fā)腦梗死組間有明顯差異,可以初步用于ACH后繼發(fā)腦梗死的預(yù)測。3、ACH不同預(yù)后組miR-424相對表達水平與顱腦手術(shù)干預(yù)呈負相關(guān),miR-424水平的高低,可以初步用于ACH后是否需要顱腦手術(shù)干預(yù)的回顧性預(yù)測。4、血循環(huán)miR-29b和miR-424相對表達水平與ACH患者的NSE和S100蛋白呈負相關(guān),與發(fā)病后1個月的GOS評分呈正相關(guān),且ACH不同預(yù)后組間miR-29b和miR-424均有顯著性差異,可以初步用來評估其短期預(yù)后。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

ACI不同預(yù)后組血循環(huán)miR-424的比較（±s）

ACI不同預(yù)后組血PLR的比較（±s）
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李武英;金俊;陳健;郭陽;湯郡;譚盛;;腦梗死和腦出血患者外周血中循環(huán)microRNA表達譜差異的初步分析[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2014年11期

2 田力;張毅;滕偉禹;;腦出血患者神經(jīng)元特異性烯醇化酶的變化[J];中國老年學(xué)雜志;2008年02期

本文編號：2889694