本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體4在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究擬檢測TLR4在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá),探討TLR4對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。方法:1采用RT-PCR方法檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251-MG中TLR4的m RNA表達(dá)情況。2采用Western Blot方法檢測U251-MG細(xì)胞中TLR4的蛋白表達(dá)情況。3構(gòu)建TLR4 si RNA重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至U251-MG細(xì)胞。采用RT-PCR方法檢測基因轉(zhuǎn)染后U251-MG細(xì)胞中TLR4的m RNA表達(dá)情況。4采用Western Blot方法檢測基因轉(zhuǎn)染后U251-MG細(xì)胞中TLR4的蛋白表達(dá)情況。5采用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測TLR4基因沉默前后對膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的影響。6采用MTT實驗檢測TLR4基因沉默前后膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖活性。7采用ELISA法檢測TLR4基因表達(dá)沉默前后膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10和VEGF含量變化。結(jié)果:1 RT-PCR實驗結(jié)果顯示,在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251-MG中可檢測到TLR4m RNA表達(dá)。2 Western Blot實驗結(jié)果顯示,在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251-MG中可檢測到TLR4蛋白表達(dá)。3將TLR4 si RNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251-MG細(xì)胞后,檢測TLR4的m RNA表達(dá)情況,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA質(zhì)粒24h后,U251-MG細(xì)胞中TLR4 m RNA表達(dá)水平(0.138±0.0004)比轉(zhuǎn)染空載體組(1.003±0.0005)、未轉(zhuǎn)染組(1.034±0.0006)顯著降低(P0.01)。轉(zhuǎn)染空載體組與未轉(zhuǎn)染組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4將TLR4 si RNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251-MG細(xì)胞后,檢測TLR4的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染空載體組(0.900±0.0062)、未轉(zhuǎn)染組(1.007±0.0029)相比,轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA基因24h后,U251-MG細(xì)胞中TLR4蛋白表達(dá)水平(0.200±0.0042)顯著降低(P0.05)。轉(zhuǎn)染空載體組與未轉(zhuǎn)染組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。5流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示,未轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)染空載體和轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA的U251-MG細(xì)胞,經(jīng)10μg/ml LPS作用48h,與未經(jīng)LPS作用時相比,三組細(xì)胞S期細(xì)胞比例均明顯增高,G0/G1期細(xì)胞比例下降(P0.05);在LPS刺激情況下,轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA組細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞相比,S期細(xì)胞比例顯著降低,G0/G1期細(xì)胞比例增高(P0.05)。6 MTT實驗結(jié)果顯示,經(jīng)10μg/ml LPS刺激后,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染空載體組相比,轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA組細(xì)胞增殖率顯著降低(P0.05)。7 ELISA實驗結(jié)果顯示,經(jīng)10μg/ml LPS作用12h后,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染空載體組相比,轉(zhuǎn)染TLR4 si RNA組U251-MG細(xì)胞分泌IL-6,IL-10,VEGF的含量明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251-MG表達(dá)TLR4,沉默TLR4基因表達(dá)可抑制LPS誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 Toll樣受體4 基因沉默 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-21
• 結(jié)果21-23
• 附圖23-26
• 附表26-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30
• 參考文獻30-34
• 綜述Toll樣受體4與惡性腫瘤的研究進展34-41
• 參考文獻38-41
• 致謝41-42
• 個人簡歷42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 農(nóng)文政;杜萍;甘精華;黃麗珍;;宮頸癌中白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12檢測及其意義[J];右江醫(yī)學(xué);2011年01期

2 易翔;唐安洲;覃穎;;鼻咽癌中白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12檢測及其意義[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2009年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫巧玲;TLR4促進腫瘤細(xì)胞免疫逃逸和凋亡抵抗的分子機制研究[D];浙江大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體4在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：287696