【摘要】：背景與目的目前腦卒中的死亡率已經(jīng)位居全球疾病的第二位,我國(guó)第一位。腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)是卒中的一種重要類型。急性ICH患者病死率和致殘率均較高,且缺乏有效的治療手段。大多數(shù)病例會(huì)遺留不同程度的神經(jīng)功能障礙,常需要長(zhǎng)期的康復(fù)訓(xùn)練及生活護(hù)理,因此給家庭乃至社會(huì)都帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)和生活負(fù)擔(dān)。ICH的病理損傷主要包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。大量研究表明免疫反應(yīng)在ICH后腦組織的繼發(fā)性損傷中起重要作用。急性ICH后的系統(tǒng)性免疫反應(yīng)主要包括免疫激活和隨后的免疫抑制。前者主要包括小膠質(zhì)細(xì)胞激活、中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎癥相關(guān)細(xì)胞的腦內(nèi)浸潤(rùn),以及促炎癥因子的分泌和釋放。后者主要包括卒中誘導(dǎo)的免疫抑制。急性ICH之后,腦抗原通過損傷的血腦屏障釋放入血。腦抗原和卒中的嚴(yán)重性及預(yù)后緊密相關(guān)。ICH之后的免疫抑制能夠避免針對(duì)腦抗原的過度免疫反應(yīng),但免疫抑制也可以降低機(jī)體對(duì)各種病原體的抵抗力,導(dǎo)致各種感染的發(fā)生。感染是卒中后死亡的重要原因之一。ICH后免疫狀態(tài)的改變和時(shí)間依賴性地招募各種炎癥細(xì)胞,表明大多數(shù)的炎癥細(xì)胞展現(xiàn)有利的和不利的雙重作用。中性粒細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)特征和作用已經(jīng)有大量文獻(xiàn)報(bào)道,但是特別的淋巴細(xì)胞亞群,尤其是T淋巴細(xì)胞亞群在ICH之后的適應(yīng)性免疫反應(yīng)過程中的作用尚不清楚。CD4+CD25+Fox P3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)通常被認(rèn)為在維持免疫平衡和抵抗免疫失衡引起的組織損傷過程中起關(guān)鍵作用。最新研究表明,Tregs在調(diào)節(jié)卒中誘導(dǎo)的免疫損傷和隨后的免疫抑制起重要作用,但機(jī)制尚不明確。目前關(guān)于Tregs的進(jìn)展主要集中在缺血性卒中,尚缺乏針對(duì)ICH患者的相關(guān)研究。在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)主要研究ICH患者外周血Tregs的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)改變、神經(jīng)功能障礙、腦相關(guān)抗原和肺炎以及它們之間的相關(guān)性,為尋找利用急性ICH患者的Tregs進(jìn)行免疫治療提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1 ICH患者及對(duì)照組選擇急性ICH患者診斷和治療根據(jù)AHA/ASA的ICH指南進(jìn)行,患者都經(jīng)過頭部CT或MRI明確出血性病灶。納入ICH患者70人,同時(shí)選取60例過去無卒中病史的健康人員作為對(duì)照組,兩組的年齡及性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。根據(jù)神經(jīng)功能缺損程度又區(qū)分為輕中度患者及重度患者。本研究所有實(shí)驗(yàn)方案均經(jīng)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院和新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)審批同意。1.2標(biāo)本采集分別于ICH第3天、第7天時(shí)清晨空腹采集患者抗凝血。采用EDTA作為抗凝劑。同時(shí)送檢常規(guī)檢測(cè)。1.3 ICH患者卒中后肺炎發(fā)生情況測(cè)定于出血后第3天、第7天評(píng)定ICH患者卒中后肺炎發(fā)生情況,卒中相關(guān)肺炎的診斷根據(jù)臨床表現(xiàn)和體格檢查(包括肺部的聽診和叩診、膿性呼吸道分泌物、發(fā)熱)、痰培養(yǎng)、胸片或肺部CT的結(jié)果確定。1.4流式細(xì)胞儀單克隆抗體熒光檢測(cè)血標(biāo)本采集后立刻處理進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)單克隆熒光抗體表面染色。采用密度梯度離心方法獲得單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)表面染色后,破膜進(jìn)行胞內(nèi)染色。應(yīng)用流式細(xì)胞儀FACScalibur及其分析軟件獲取數(shù)據(jù)。1.5 ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor,TGF-β)、白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)血漿水平1.6 ELISA方法檢測(cè)腦相關(guān)抗原NSE、S100B及MBP血漿濃度2結(jié)果2.1淋巴細(xì)胞亞群ICH患者外周血CD3+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比3天組、7天組為(67.96±7.331,66.19±7.439%),與對(duì)照組69.22±7.166%比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ICH患者CD3+CD4+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比,3天組、7天組為(44.32±8.614,42.24±7.653%),與對(duì)照組44.52±7.247%比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ICH患者外周血CD3+CD69+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞百分比3天組為、7天組為(4.669±2.842,5.739±2.954%),對(duì)照組為2.622±2.159%。ICH3天組與對(duì)照組比較,活化的T細(xì)胞比例明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);ICH7天組與對(duì)照組比較,活化的T細(xì)胞比例明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.2外周血TregsICH患者外周血Tregs占CD4+細(xì)胞百分比(Treg%),3天組、7天組為(5.569±2.597,6.653±2.924%),對(duì)照組為4.199±1.869%。ICH 3天組與對(duì)照組比較,外周血Tregs百分比明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);ICH 7天組與對(duì)照組比較,外周血Tregs百分比明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);2.3病情輕重及性別對(duì)Tregs的影響ICH 3天組,外周血Treg%病情重的患者為6.301±2.654%,輕中度的患者為4.793±2.329%,兩者比較重度組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在ICH 7天組,外周血Treg%病情重的患者為7.641±2.950%,輕中度的患者為5.634±2.560%,兩者比較重度組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。ICH 3天組女性外周血Treg%為5.268±2.648%,與男性結(jié)果5.807±2.566%比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);7天組女性外周血Treg%為6.292±2.798%,與男性結(jié)果6.944±3.029%比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.4卒中后肺炎與患者Tregs比例的關(guān)系ICH 3天組肺炎患者與無肺炎患者Treg%分別為6.945±2.553%與5.111±2.468%,肺炎患者明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。ICH 7天組肺炎患者與無肺炎患者Treg%分別為7.823±2.771%與6.205±2.884%,肺炎患者明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.5 Tregs相關(guān)細(xì)胞因子ICH患者外周血TGF-β含量,3天組為22.82±3.11 ng/ml、7天組為26.01±3.05ng/ml,分別與對(duì)照組14.18±2.17 ng/ml比較均明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);ICH患者外周血IL-10含量,3天組為21.34±2.98 pg/ml、7天組為22.91±3.48 pg/ml,分別與對(duì)照組14.15±2.59 pg/ml比較均顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.6腦相關(guān)抗原含量ICH 3天組NSE血漿含量(23.57±2.897 ng/m L)較對(duì)照組(14.33±2.428ng/m L)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);ICH 7天組血漿NSE含量(22.49±2.956 ng/m L)與對(duì)照組相比顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。ICH 3天組S100B血漿含量(377.6±56.74 pg/m L)較對(duì)照組(289.9±45.89pg/m L)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);ICH 7天組血漿S100B血漿含量(319.9±58.16 pg/m L)與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。ICH 3天組MBP血漿含量(6.713±1.232 ng/m L)較對(duì)照組(3.401±0.755ng/m L)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);ICH 7天組血漿MBP含量(7.828±1.394 ng/m L)與對(duì)照組相比明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),2.7腦相關(guān)抗原與Tregs相關(guān)性分析外周血NSE含量與Treg%在ICH 3天組、7天組均無相關(guān)性(P0.05)。外周血S100B含量與Treg%在ICH 3天組、7天組均呈顯著正相關(guān)(P0.01);外周血MBP含量與Treg%在ICH 3天組、7天組均無相關(guān)性(P0.05)。2.8病情輕重對(duì)ICH患者S100B血漿含量的影響ICH 3天組,病情重的患者血漿S100B含量(398.65±55.26 pg/m L)較輕中度患者(355.21±49.92 pg/m L)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。ICH7天組,病情重的患者血漿S100B含量(339.424±62.008 pg/m L)較輕中度患者(299.750±46.783 pg/m L)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.9外周血S100B分別與TGF-β、IL-10的相關(guān)性分析在ICH 3天組,外周血S100B與TGF-β含量呈顯著正相關(guān)(P0.01);在ICH7天組,外周血S100B與外周血TGF-β含量呈顯著正相關(guān)(P0.01)。外周血S100B與IL-10血漿水平在ICH 3天組、7天組均無相關(guān)性(P0.05)3結(jié)論3.1 ICH患者急性出血之后促發(fā)系統(tǒng)和外周免疫反應(yīng),導(dǎo)致激活的外周T細(xì)胞增多。3.2 ICH患者外周血Tregs比例明顯增多,以及相應(yīng)的細(xì)胞因子TGF-β和IL-10含量增高,提示Tregs參與調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)。3.3嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙的ICH患者外周血Tregs比例較輕中度患者增高更為顯著,提示病情嚴(yán)重程度影響外周血Tregs水平。3.4發(fā)生肺炎的ICH患者外周血Tregs比例較未發(fā)生肺炎的患者增高更為顯著,提示感染影響外周血Tregs水平。3.5 ICH患者腦抗原NSE、S100B和MBP釋放增多,提示腦抗原可能促發(fā)自身免疫反應(yīng)。此外,S100B蛋白在嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙患者較輕中度患者增高更加顯著。3.6血漿S100B蛋白與Tregs比例呈正相關(guān),但NSE、MBP蛋白與Tregs比例無相關(guān)性。3.7 S100B蛋白與TGF-β呈正相關(guān),提示其可能通過調(diào)節(jié)TGF-β上調(diào)Tregs的比例,參與調(diào)節(jié)卒中后免疫抑制反應(yīng)過程。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.34

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬林林;任長(zhǎng)虹;曾現(xiàn)偉;吉訓(xùn)明;;調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年23期

本文編號(hào)：2802748