【摘要】：背景膠質(zhì)瘤是成人腦部最常見的原發(fā)腫瘤,平均每年每10萬中約為4-5人發(fā)病,并且其死亡率顯著高于其他腦腫瘤。盡管在過去的幾十年間,神經(jīng)外科手術(shù)治療與放射治療的發(fā)展取得了長足的發(fā)展,但作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最為常見的原發(fā)性腫瘤,膠質(zhì)瘤的中位生存時間也僅僅在15個月左右。因此,研究膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制,并為尋找新的治療膠質(zhì)瘤的靶點提供理論基礎(chǔ),就顯得尤為重要。TRIM29(tripartite motif-29),也被稱作ATDC,屬于TRIM蛋白家族的一員,該家族由70多名成員組成。TRIM蛋白家族以擁有一系列保守的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)為特征,其中包括B-box1型(B1),B-box2型(B2)和RING指和卷曲螺旋(RBCC)結(jié)構(gòu)域基元。目前研究顯示,TRIM家族參與調(diào)節(jié)了多種生物學(xué)進(jìn)程,例如細(xì)胞發(fā)育、分化、凋亡及腫瘤發(fā)生等。TRIM29(ATDC)基因位于染色體11q23位置,其最初被認(rèn)為是遺傳病共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張中的異位基因,并發(fā)現(xiàn)其可以增加細(xì)胞的輻射抗性。據(jù)報道顯示,TRIM29在多種腫瘤中發(fā)揮著重要的作用,其與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移以及成瘤能力等密切相關(guān),但目前在膠質(zhì)瘤中還未見到明確報道及研究。目的本研究旨在探究TRIM29在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與患者臨床特征的相關(guān)性、以及TRIM29對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和成瘤性的影響,并對其內(nèi)在機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法1.通過免疫組織化學(xué)法檢測56例膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的TRIM29蛋白表達(dá),并分析膠質(zhì)瘤組織中TRIM29蛋白的表達(dá)與臨床病理特征間的關(guān)系。通過Western blot法在膠質(zhì)瘤常見細(xì)胞株(A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG)中檢測TRIM29蛋白的表達(dá)譜。2.利用RNA干擾技術(shù)獲得穩(wěn)定敲低的shTRIM29組細(xì)胞。并通過Transwell、MTT、BrdU及軟瓊脂克隆形成實驗,檢測TRIM29對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、增殖能力的影響。3.通過裸鼠皮下成瘤模型的構(gòu)建,檢測TRIM29在體內(nèi)對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、成瘤能力的影響。4.采用Western blot法檢測TRIM29對AKT信號通路相關(guān)蛋白的影響,探究TRIM29調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤增殖、成瘤、遷移能力的內(nèi)在機(jī)制。結(jié)果1.免疫組化結(jié)果顯示,TRIM29蛋白表達(dá)在膠質(zhì)瘤組織中多以強(qiáng)陽性表達(dá)為主,而在正常腦組織中則多為陰性或弱陽性表達(dá)為主。此外,通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),TRIM29在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與腫瘤WHO分級呈正相關(guān)(r=0.535,P0.05);與年齡、性別等無明顯相關(guān)性(P0.05)。Western blot法檢測顯示,TRIM29在膠質(zhì)瘤常見細(xì)胞株A172、LN-229、U-87 MG、U-118MG中均有表達(dá),且在惡性程度較高的U-87 MG細(xì)胞株中的表達(dá)量明顯高于其他細(xì)胞株,故選取該細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)實驗。2.RNA干擾處理后,得到TRIM29穩(wěn)定敲低的shTRIM29組的U-87 MG細(xì)胞。Transwell、MTT、BrdU及軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果顯示,敲低TRIM29可明顯抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力,同時BrdU標(biāo)記陰性細(xì)胞數(shù)量下降,細(xì)胞的克隆形成能力也明顯減弱,說明TRIM29在膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移中發(fā)揮重要作用。3.裸鼠體內(nèi)成瘤實驗結(jié)果提示,敲低TRIM29后腫瘤的生長速度減慢,體積降低,同時Ki67的表達(dá)量也明顯降低。4.通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn),TRIM29的敲低可引起AKT的活化形式p-AKT表達(dá)的降低。結(jié)論1.TRIM29在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)上升,與膠質(zhì)瘤的WHO分期呈正相關(guān),同時TRIM29在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中均有表達(dá),且在惡性程度較高的U-87MG細(xì)胞中表達(dá)明顯升高,提示TRIM29的高表達(dá)與膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān)。2.下調(diào)TRIM29的蛋白表達(dá)可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力。3.下調(diào)TRIM29的表達(dá),可在體內(nèi)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、成瘤能力,說明TRIM29是影響膠質(zhì)瘤發(fā)展的關(guān)鍵因素。4.TRIM29可能通過AKT信號通路,對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、成瘤、遷移進(jìn)行調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

A:TRIM29 在正常腦組織中陰性表達(dá)；B:TRIM29 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中陽性表達(dá)圖 2.3.1 TRIM29 在正常腦組織和膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá).2 膠質(zhì)瘤組織中 TRIM29 蛋白的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系。對膠質(zhì)瘤患者TRIM29的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行Spearman 相關(guān)，TRIM29 的表達(dá)與膠質(zhì)瘤 WHO 分級呈正相關(guān)（r=0.535,P＜0.05），具29 表達(dá)越高，膠質(zhì)瘤的惡性程度越高，但與患者年齡、性別無明顯相關(guān)表 2.3.1 TRIM29 在 56 例膠質(zhì)瘤標(biāo)本中的表達(dá)及臨床病理參數(shù)理特征 例數(shù) TRIM29 表達(dá)量 P*值低表達(dá) 高表達(dá)齡 0.0640 歲 36 14 22

圖 2.3.2 膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中 TRIM29 的蛋白表達(dá).0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；兩組間比較采用 t 檢。檢驗水準(zhǔn)：α=0.05。經(jīng)外科最為常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和致死率、放療、化療等治療手段都取得了飛速的進(jìn)步，僅在 15 個月左右，因此，尋找新的治療方法便顯生發(fā)展的機(jī)制研究越發(fā)受到重視，在內(nèi)在機(jī)制上醫(yī)療發(fā)展的重點和熱點。尋找影響膠質(zhì)瘤發(fā)展進(jìn)

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文3.3 實驗結(jié)果3.3.1 通過 RNA 干涉膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-87 MG 中 TRIM29 的表達(dá)情況檢測通過慢病毒 RNA 干擾技術(shù)，我們對人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-87 MG 中的 TRIM2敲低，結(jié)果得到穩(wěn)定敲低 TRIM29 的 shTRIM29（實驗組）U -87 MG 細(xì)胞shScramble 組（對照組）作為實驗對照細(xì)胞。通過對兩組 U-87 MG 細(xì)胞進(jìn)行測，結(jié)果顯示，shTRIM29(實驗組)細(xì)胞中 TRIM29 蛋白的表達(dá)水平明顯低于組（對照組）細(xì)胞，說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞 TRIM29 已成功敲低，可用作后續(xù)實驗。（

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本文編號：2797142