【摘要】：目的:FKBP12.6即FK506結(jié)合蛋白12.6,是一種能與免疫抑制劑FK506結(jié)合、大小為12.6 KD的蛋白質(zhì)。它可以和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣離子釋放通道Ry R2結(jié)合,從而使Ry R2穩(wěn)定地處于關(guān)閉狀態(tài),在穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中發(fā)揮重要作用。腦缺血是中風(fēng)的一種,是一種常見的心腦血管疾病。腦缺血損傷時(shí)常伴有細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子異常增加,而鈣離子濃度的異常增加被認(rèn)為是腦缺血損傷的重要機(jī)制。由于FKBP12.6在細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中具有重要作用,因此推測FKBP12.6在腦缺血中有重要作用。CDC42即細(xì)胞分裂周期蛋白42,在細(xì)胞中主要參與細(xì)胞骨架蛋白的解聚,與細(xì)胞形態(tài)、遷移、分裂密切相關(guān)。有研究報(bào)道Rip(Rat Insulin-2 Promoter)-Cre特異性敲除CDC42小鼠常伴有腦中一些核團(tuán)(主要是弓狀核)的非特異性敲除。弓狀核是攝食與能量代謝平衡的調(diào)節(jié)中樞,故Rip-Cre特異性敲除CDC42小鼠的攝食可能發(fā)生變化。因此,本文旨在探究FKBP12.6在腦缺血損傷中的作用及CDC42缺失對小鼠攝食的影響。方法:中腦動(dòng)脈阻塞手術(shù)建模:缺血60min后將線栓拔出再灌,24h后將腦切成1mm厚的腦片行TTC染色,計(jì)算缺血區(qū)域面積評價(jià)神經(jīng)損傷。FK506給藥組缺血前45min腹腔注射FK506,注射劑量為10mg/kg,對照組注射10ml/kg的生理鹽水。培養(yǎng)胎鼠原代腦皮層細(xì)胞,9天后氧糖剝奪(OGD)處理,處理時(shí)間分別為1.5h、3h,對照組不做處理。繼續(xù)培養(yǎng)24h后,hoechest染色顯示凋亡細(xì)胞并計(jì)數(shù)以評價(jià)神經(jīng)損傷。CDC42條件性敲除小鼠和對照組禁食24小時(shí)后再給食,監(jiān)測0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h不同時(shí)間段內(nèi)的攝食量,一周后再監(jiān)測正常情況下每天的攝食量,連續(xù)監(jiān)測一周。腦部冠狀面冰凍切片HE染色觀察神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)和腦部結(jié)構(gòu)變化,分析Rip-Cre特異性敲除CDC42對攝食的影響。結(jié)果:1.動(dòng)物水平結(jié)果顯示敲除小鼠FKBP12.6基因?qū)δX缺血損傷沒有明顯影響。2.細(xì)胞水平結(jié)果顯示FKBP12.6基因敲除鼠的腦皮層神經(jīng)細(xì)胞在OGD-R處理后其凋亡率與對照組沒有顯著差異。3.動(dòng)物水平結(jié)果顯示FK506在FKBP12.6基因敲除和對照組中都具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用。4.Rip-Cre特異性敲除CDC42基因可使小鼠體重明顯減輕。5.Rip-Cre特異性敲除CDC42小鼠的攝食顯著低于對照組。6.Rip-Cre特異性敲除CDC42基因可使小鼠的腦結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,第三腦室明顯減小。結(jié)論:1.從動(dòng)物和細(xì)胞水平兩方面證明FKBP12.6基因敲除對腦缺血損傷沒有明顯影響,敲除FKBP12.6基因不影響FK506的神經(jīng)保護(hù)作用。2.Rip-Cre特異性敲除CDC42小鼠的攝食和體重顯著下降,第三腦室顯著減小,腦結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743
【圖文】：

第二部分 CDC42 缺失對小鼠攝食的影響41圖Ⅱ-9 腦部切片 HE 染色圖. (A~F)分別為對照組和敲除小鼠嗅球后 3.2 mm、3.5 mm、3.8 mm、4.1 mm、4.4 mm、4.7 mm 處腦切片 HE 染色，黑色箭頭所指為第三腦室(3V).

第二部分 CDC42 缺失對小鼠攝食的影響41圖Ⅱ-9 腦部切片 HE 染色圖. (A~F)分別為對照組和敲除小鼠嗅球后 3.2 mm、3.5 mm、3.8 mm、4.1 mm、4.4 mm、4.7 mm 處腦切片 HE 染色，黑色箭頭所指為第三腦室(3V).

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2782320