【摘要】：背景和目的:腦卒中是導(dǎo)致我國居民致死和致殘的首要原因。吸煙者患卒中的風(fēng)險是不吸煙者的二到四倍,而且吸煙與卒中的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。既往研究揭示吸煙者循環(huán)內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量和C-反應(yīng)蛋白水平明顯升高,提示吸煙可能影響免疫系統(tǒng)。然而,香煙煙霧暴露對缺血后腦損傷和神經(jīng)炎癥的具體影響目前還不清楚。為了解決這一問題,我們使用短暫局灶性腦缺血的小鼠模型,研究了香煙煙霧對缺血后的腦損傷和炎癥反應(yīng)的影響及機(jī)制。方法:實驗組小鼠連續(xù)4天每天兩次接受香煙煙霧暴露。對照組接受正常空氣暴露。最后一次暴露24小時后,誘導(dǎo)60分鐘大腦中動脈阻塞模型(MCAO)。我們采用改良的神經(jīng)功能評分(modified Neurological Severity Score,mNSS)于MCAO再灌注后第1、3天評價小鼠的神經(jīng)功能,通過2,3,5-三苯基四唑氯化銨(TTC)染色測定腦梗死體積。通過酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定香煙煙霧暴露后小鼠血清中可替寧(Cotinine)水平,并測定了空氣及香煙煙霧暴露后小鼠的動脈血?dú)饧澳X血流量(CBF)。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測MCAO再灌注后腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞和外周浸潤的白細(xì)胞;通過RT-PCR技術(shù)檢測IL-6、IL-1β和CCL2等炎癥因子。部分小鼠接受如下藥物處理:Binarit是單核細(xì)胞趨化蛋白合成抑制劑,用0.5%的羥甲基纖維素水溶液稀釋,以50mg/kg的劑量經(jīng)口灌胃給藥,每日兩次,在香煙煙霧暴露的第一天Bindarit開始給藥并持續(xù)到實驗結(jié)束。MCC950是選擇性NLRP3炎性小體抑制劑,以10mg/kg劑量腹腔給藥,與煙霧暴露同時開始。結(jié)果:對比于空氣暴露的小鼠,吸入香煙煙霧的小鼠誘導(dǎo)短暫性大腦中動脈阻塞模型(MCAO)后,神經(jīng)功能缺損和梗死體積加重;同時,腦組織內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞以及浸潤的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)量增多,炎性因子IL-1β、IL-6及趨化因子CCL2上調(diào),表明香煙煙霧暴露加劇了缺血后的神經(jīng)炎癥。我們還發(fā)現(xiàn)香煙煙霧暴露后小鼠外周血中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的動員增加,且使用Bindarit抑制中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化后可減輕香煙煙霧暴露對缺血性腦損傷的加重作用。此外,香煙煙霧暴露可以上調(diào)外周血中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的NLRP3炎性小體。使用NLRP3炎性小體抑制劑MCC950后,可以抵消香煙煙霧暴露對腦卒中的加重。結(jié)論:香煙煙霧暴露加重了缺血性腦損傷。香煙煙霧暴露調(diào)動了外周中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞,他們參與了缺血后的神經(jīng)炎癥和腦損傷。這些發(fā)現(xiàn)提示香煙煙霧暴露對缺血性腦損傷有害。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743
【圖文】：

25 3.香煙煙霧暴露促進(jìn)外周中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的炎性反霧暴露組小鼠連續(xù) 4 天接受香煙煙霧暴露，對照組正常煙霧暴露組及對照組小鼠的外周血，脾臟和腦組織作為兩組小鼠的外周血液中中性粒細(xì)胞（CD11b+ Ly6G+）、 Ly6C high）、CD4+ T 細(xì)胞（CD3+ CD4+）、CD8+ T 細(xì)胞（CCD3- CD19+）的計數(shù)情況，其中外周血中香煙煙霧暴露11b+ Ly6G+）和單核細(xì)胞（CD11b+ Ly6C high）比對照組學(xué)意義；其它免疫細(xì)胞亞群在煙霧暴露組 CD4+ T、CD8組中無顯著差異，每組 n = 7；B.香煙煙霧暴露組脾臟中+ Ly6G+）、單核細(xì)胞（CD11b+ Ly6C high）、CD4+ T 細(xì)胞（C

和單核細(xì)胞募集減輕香煙煙霧暴露對缺血性腦了藥物管理和實驗設(shè)計過程，實驗組小鼠在指定前所述，連續(xù) 4 天，每天兩次，每次 12 支；對時，對兩組小鼠包括煙霧暴露組和空氣暴露組g，每日口服灌胃兩次，連續(xù) 4 天給藥，與香煙，予兩組小鼠誘導(dǎo)短暫性大腦中動脈阻塞再灌第 1 天，評估兩組小鼠即煙霧暴露組和對照組 B.對接受 Bindarit 煙霧暴露組和對照組小鼠誘模型后的第 1 天，獲取兩組小鼠腦組織切片，暴露組和對照組小鼠腦組織切片梗死面積大小 圖中煙霧暴露組和對照組小鼠的梗死體積，統(tǒng) 后的煙霧暴露組和對照組小鼠的腦梗死體積無明. 對接受 Bindarit 煙霧暴露組和對照組小鼠誘導(dǎo)型后的第 1 天，進(jìn)行了 mNSS 評分，評分統(tǒng)計

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文2.5香煙煙霧暴露上調(diào)外周中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞NLRP3炎性小體的表達(dá)NLRP3 炎性小體是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白，可促進(jìn)局部炎癥反應(yīng)，并導(dǎo)致缺血性腦損傷[48, 49]。因此，我們假設(shè) NLRP3 炎性小體的激活與了煙霧暴露引起的腦卒中損傷加重過程。我們發(fā)現(xiàn)香煙煙霧暴露導(dǎo)致外周血液中的中性粒細(xì)胞（CD11b+ Ly6G+）和單核細(xì)胞（CD11b+ Ly6Chigh）NLRP炎性小體的表達(dá)顯著增加，同樣在脾臟也發(fā)現(xiàn)了一致的結(jié)果（圖 5A-D）。這些結(jié)果表明，在暴露于香煙煙霧后，外周中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的 NLRP3 炎小體活性增加，提示香煙煙霧通過激活 NLRP3 炎性小體啟動了中性粒細(xì)胞和核細(xì)胞的免疫反應(yīng)。

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本文編號：2770071