【摘要】：目的:目前的研究顯示,Epsin 3(EPN3)表達主要局限于胃壁細胞、受傷或病變的組織中,而正常的腦組織中不表達EPN3。EPN3已被確定作為癌基因參與雌激素受體陽性的乳腺癌和非小細胞肺癌中,但對其在癌癥中具體的功能知之甚少。本研究目的是探討EPN3在膠質(zhì)瘤組織中的表達與臨床病理特征的關系,以及初步探討EPN3在膠質(zhì)瘤細胞惡性行為中的作用及分子機制。方法:從臨床上選取167例不同級別的人膠質(zhì)瘤組織,按照WHO分級,I級+II級為低級別膠質(zhì)瘤,III級+IV級為高級別膠質(zhì)瘤。采用免疫組化的檢測方法,檢測167例不同級別的人膠質(zhì)瘤組織中EPN3蛋白的表達量。再采用細胞體外培養(yǎng)的方法,選取U87和U251膠質(zhì)瘤細胞系,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染來敲低和過表達EPN3,進而研究EPN3對膠質(zhì)瘤細胞的生物學作用,并采用實時定量PCR和Western blotting實驗來驗證各分子的表達情況。Transwell遷移和侵襲實驗來研究EPN3對膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲作用。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,96例低級別膠質(zhì)瘤組織(WHO分級I+II)中,有17例(17.7%)EPN3蛋白表達呈陽性;在71例高級別膠質(zhì)瘤組織中(WHOⅢ+Ⅳ),有37例(52.1%)EPN3蛋白水平表達呈陽性。在低級別膠質(zhì)瘤組和高級別膠質(zhì)瘤組之間,EPN3陽性表達結(jié)果之間有明顯的統(tǒng)計學差異(P0.001)。但患者的年齡、性別和腫瘤大小與EPN3之間無顯著差異性(P0.05)。在膠質(zhì)瘤細胞系中過表達EPN3激活了轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist,并通過誘導膠質(zhì)瘤細胞上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程促進細胞遷移和侵襲。同時,過表達EPN3增加了NICD1,β-catenin的表達水平。結(jié)論:EPN3在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮腫瘤促進子的作用,并且通過激活轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist而非Snail 1來誘導膠質(zhì)瘤細胞EMT過程,從而促進膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生遷移和侵襲。EPN3誘導膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生EMT過程可能與Notch1和β-catenin信號通路有關。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.4
【圖文】：

對這 167 例膠質(zhì)瘤組織進行分析，如圖 1-1 所示，圖（A）最左側(cè)為結(jié)腸癌組織陽性對照，中間的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陽性結(jié)果，右側(cè)的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陰性結(jié)果。結(jié)果顯示，96 例低級別膠質(zhì)瘤組織中，有 17 例 EPN3 表達為陽性（17.7%）；71 例高級別膠質(zhì)瘤組織中，有 37 例 EPN3 表達結(jié)果為陽性（52.1%）（表 1）（圖 1）。低級別膠質(zhì)瘤組織和高級別膠質(zhì)瘤組織中 EPN3 陽性率相比，EPN3 在兩組之間的表達水平有明顯的統(tǒng)計學意義（P＜0.001，表 1）。在 167 例膠質(zhì)瘤樣本中， 小于 45 歲的患者有 90 例，其中 EPN3 表達陽性者有 28 例（31.1%）， 年齡大于等于 45 歲的患者有 77 例，EPN3 表達陽性者有 26 例（33.8%），兩者之間沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05，表 1)。腫瘤組織小于 4.5cm 的121 例患者中，EPN3 陽性者有 39 例（32.2%），腫瘤組織大于等于 4.5cm 的 46例患者中，EPN3 陽性者占 15 例（32.6%），兩組之間也沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05，表 1）。A

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 Epsin3通過誘導EMT過程促進膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲1.2.3 EPN3 在膠質(zhì)瘤細胞系中的表達水平接著，我們采用 Western blotting 的方法對 6 個膠質(zhì)瘤細胞系（A172，SNB19，LN229，U251，LN308 和 U87）進行 EPN3 蛋白表達的測定。如圖 1-1 (B)，在不同的膠質(zhì)瘤細胞系中，EPN3 的表達水平各不相同。其中 U251 膠質(zhì)瘤細胞中EPN3 表達水平最高，A172 膠質(zhì)瘤細胞中表達水平最低。B

圖 1-1 （C）通過脂質(zhì)體將質(zhì)粒 sh-EPN3-4 和 pCMV6-EPN3 轉(zhuǎn)染到 U87 和U251 膠質(zhì)瘤細胞中，分別用來敲低和過表達 EPN3 水平，scrambled 和empty 分別作為陰性對照。Western blotting 以及實時定量 PCR 等方法分別用來檢測 EPN3 mRNA 的表達水平以及蛋白表達情況。* P＜0.05，P**＜0.01，P***＜0.001。所有實驗重復至少三次。 過表達 EPN3 促進 U87 和 U251 膠質(zhì)瘤細胞侵襲和遷移免疫組織化學結(jié)果顯示，EPN3 在高級別膠質(zhì)瘤組織中表達明顯增高，由們推測，是否 EPN3 促進膠質(zhì)瘤組織惡性生物學行為的發(fā)生？為了進一步EPN3 在膠質(zhì)瘤細胞中發(fā)揮的作用，我們采用了 Transwell 小室（上室未鋪方法來檢測 EPN3 對膠質(zhì)瘤細胞遷移的影響，Transwell 小室（上室鋪膠）來檢測 EPN3 對膠質(zhì)瘤細胞侵襲能力的影響。結(jié)果如圖 2 所示，與對照組比，下調(diào) EPN3 的表達顯著抑制膠質(zhì)瘤細胞株 U87 和 U251 細胞的遷移和力（P＜0.01，圖 2A），而上調(diào) EPN3 則明顯促進膠質(zhì)瘤細胞株 U87 和 U251

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本文編號：2760556