【摘要】：目的:目前的研究顯示,Epsin 3(EPN3)表達(dá)主要局限于胃壁細(xì)胞、受傷或病變的組織中,而正常的腦組織中不表達(dá)EPN3。EPN3已被確定作為癌基因參與雌激素受體陽(yáng)性的乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌中,但對(duì)其在癌癥中具體的功能知之甚少。本研究目的是探討EPN3在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系,以及初步探討EPN3在膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性行為中的作用及分子機(jī)制。方法:從臨床上選取167例不同級(jí)別的人膠質(zhì)瘤組織,按照WHO分級(jí),I級(jí)+II級(jí)為低級(jí)別膠質(zhì)瘤,III級(jí)+IV級(jí)為高級(jí)別膠質(zhì)瘤。采用免疫組化的檢測(cè)方法,檢測(cè)167例不同級(jí)別的人膠質(zhì)瘤組織中EPN3蛋白的表達(dá)量。再采用細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法,選取U87和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染來(lái)敲低和過(guò)表達(dá)EPN3,進(jìn)而研究EPN3對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)作用,并采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證各分子的表達(dá)情況。Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)研究EPN3對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲作用。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,96例低級(jí)別膠質(zhì)瘤組織(WHO分級(jí)I+II)中,有17例(17.7%)EPN3蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性;在71例高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中(WHOⅢ+Ⅳ),有37例(52.1%)EPN3蛋白水平表達(dá)呈陽(yáng)性。在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組和高級(jí)別膠質(zhì)瘤組之間,EPN3陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果之間有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001)。但患者的年齡、性別和腫瘤大小與EPN3之間無(wú)顯著差異性(P0.05)。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)EPN3激活了轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist,并通過(guò)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞上皮 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過(guò)程促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲。同時(shí),過(guò)表達(dá)EPN3增加了NICD1,β-catenin的表達(dá)水平。結(jié)論:EPN3在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮腫瘤促進(jìn)子的作用,并且通過(guò)激活轉(zhuǎn)錄因子Slug和Twist而非Snail 1來(lái)誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞EMT過(guò)程,從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生遷移和侵襲。EPN3誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生EMT過(guò)程可能與Notch1和β-catenin信號(hào)通路有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.4
【圖文】：

對(duì)這 167 例膠質(zhì)瘤組織進(jìn)行分析，如圖 1-1 所示，圖（A）最左側(cè)為結(jié)腸癌組織陽(yáng)性對(duì)照，中間的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陽(yáng)性結(jié)果，右側(cè)的為膠質(zhì)瘤組織 EPN3 陰性結(jié)果。結(jié)果顯示，96 例低級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中，有 17 例 EPN3 表達(dá)為陽(yáng)性（17.7%）；71 例高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中，有 37 例 EPN3 表達(dá)結(jié)果為陽(yáng)性（52.1%）（表 1）（圖 1）。低級(jí)別膠質(zhì)瘤組織和高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中 EPN3 陽(yáng)性率相比，EPN3 在兩組之間的表達(dá)水平有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001，表 1）。在 167 例膠質(zhì)瘤樣本中， 小于 45 歲的患者有 90 例，其中 EPN3 表達(dá)陽(yáng)性者有 28 例（31.1%）， 年齡大于等于 45 歲的患者有 77 例，EPN3 表達(dá)陽(yáng)性者有 26 例（33.8%），兩者之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表 1)。腫瘤組織小于 4.5cm 的121 例患者中，EPN3 陽(yáng)性者有 39 例（32.2%），腫瘤組織大于等于 4.5cm 的 46例患者中，EPN3 陽(yáng)性者占 15 例（32.6%），兩組之間也沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表 1）。A

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 Epsin3通過(guò)誘導(dǎo)EMT過(guò)程促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移和侵襲1.2.3 EPN3 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中的表達(dá)水平接著，我們采用 Western blotting 的方法對(duì) 6 個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（A172，SNB19，LN229，U251，LN308 和 U87）進(jìn)行 EPN3 蛋白表達(dá)的測(cè)定。如圖 1-1 (B)，在不同的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中，EPN3 的表達(dá)水平各不相同。其中 U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中EPN3 表達(dá)水平最高，A172 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)水平最低。B

圖 1-1 （C）通過(guò)脂質(zhì)體將質(zhì)粒 sh-EPN3-4 和 pCMV6-EPN3 轉(zhuǎn)染到 U87 和U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，分別用來(lái)敲低和過(guò)表達(dá) EPN3 水平，scrambled 和empty 分別作為陰性對(duì)照。Western blotting 以及實(shí)時(shí)定量 PCR 等方法分別用來(lái)檢測(cè) EPN3 mRNA 的表達(dá)水平以及蛋白表達(dá)情況。* P＜0.05，P**＜0.01，P***＜0.001。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少三次。 過(guò)表達(dá) EPN3 促進(jìn) U87 和 U251 膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，EPN3 在高級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)明顯增高，由們推測(cè)，是否 EPN3 促進(jìn)膠質(zhì)瘤組織惡性生物學(xué)行為的發(fā)生？為了進(jìn)一步EPN3 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中發(fā)揮的作用，我們采用了 Transwell 小室（上室未鋪方法來(lái)檢測(cè) EPN3 對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的影響，Transwell 小室（上室鋪膠）來(lái)檢測(cè) EPN3 對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的影響。結(jié)果如圖 2 所示，與對(duì)照組比，下調(diào) EPN3 的表達(dá)顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87 和 U251 細(xì)胞的遷移和力（P＜0.01，圖 2A），而上調(diào) EPN3 則明顯促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株 U87 和 U251

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本文編號(hào)：2760556