本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)NQO1對左旋多巴異動癥的影響及其機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究高表達(dá)醌氧化還原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase-1, NQ01)對左旋多巴異動癥(Levodopa-induced dyskinesia, LID)的影響,從而進(jìn)一步探究異動癥的發(fā)病機(jī)制和其預(yù)防策略。方法：對已有的NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行繁育,運(yùn)用PCR技術(shù)對子代NQ01轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因型的鑒定和篩選,通過免疫組化法比較NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦組織NQO1的表達(dá)情況。借助腦立體定位儀,在小鼠腦單側(cè)紋狀體區(qū)域注射6-羥多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA),構(gòu)建小鼠的帕金森病模型；通過趴壁實(shí)驗(yàn)、安非他明誘導(dǎo)轉(zhuǎn)圈實(shí)驗(yàn)檢測帕金森病小鼠的行為學(xué)特征；運(yùn)用免疫組化觀察帕金森病小鼠腦黑質(zhì)致密部(Substantia nigra compact part, SNpc)多巴胺細(xì)胞的損傷程度。在此基礎(chǔ)上,篩選模型鼠中行為學(xué)數(shù)據(jù)相近的小鼠,給小鼠腹腔注射左旋多(L-dihydroxyphenylalanine, L-DOPA)和鹽酸芐絲肼(Benserazide hydrochioride),建立小鼠異動癥模型；再次通過趴壁實(shí)驗(yàn)來觀察帕金森病小鼠給藥L-DOPA后特征性癥狀的改善情況；根據(jù)異常不自主運(yùn)動(Abnormal involuntary movements, AIM)評分來比較NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠異動癥的嚴(yán)重程度；運(yùn)用免疫組化分別觀察小鼠中腦多巴胺(Dopamine, DA)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)神經(jīng)元的損傷情況。結(jié)果：經(jīng)過繁育鑒定共獲得98只小鼠,其中NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中的NQO1表達(dá)量明顯高于野生型小鼠。6-OHDA造模后,實(shí)驗(yàn)組小鼠安非他明誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)圈數(shù)明顯高于假手術(shù)組,實(shí)驗(yàn)組小鼠左前肢的使用情況顯著低于假手術(shù)組。免疫組化結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組小鼠黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞損傷明顯。行為學(xué)和組織學(xué)結(jié)果證明實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了6-OHDA損毀一側(cè)黑質(zhì)的帕金森病小鼠模型。腹腔給藥左旋多巴21天后,相比生理鹽水組,給藥組小鼠的左前肢使用率增加,顯示出左旋多巴的治療效應(yīng)。但隨著給藥劑量加倍,實(shí)驗(yàn)組小鼠異動癥現(xiàn)象明顯,對比野生型(WT)、較高表達(dá)NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠(Tg68)、高表達(dá)NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠(Tg27)發(fā)現(xiàn)：Tg68 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠的AIM評分相比有降低趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異；Tg27 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠AIM評分明顯低于野生型小鼠。免疫組化結(jié)果顯示,Tg27 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠黑質(zhì)中損傷側(cè)存活的多巴胺細(xì)胞數(shù)目多于野生型小鼠。在導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)的5-HT細(xì)胞上,各組小鼠間未發(fā)現(xiàn)明顯差異結(jié)論：通過在腦內(nèi)紋狀體區(qū)域注射6-OHDA,成功構(gòu)建了小鼠的帕金森病模型。NQO1表達(dá)量高的Tg27 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠異動癥的程度較低,其黑質(zhì)中損傷側(cè)存活的多巴胺細(xì)胞數(shù)目較多,提示高表達(dá)NQO1具有抗異動癥的效應(yīng)。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果并未顯示異動癥與5-HT神經(jīng)元具有相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：NQO1 L-DOPA 異動癥 DA神經(jīng)元 5-HT神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠的篩選及帕金森病模型的構(gòu)建12-31
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-23
• 2 結(jié)果23-30
• 2.1 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定23-25
• 2.2 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中NQO1表達(dá)的免疫組化25
• 2.3 小鼠帕金森病模型的構(gòu)建25-26
• 2.4 小鼠的趴壁實(shí)驗(yàn)26-27
• 2.5 安非他明誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)圈實(shí)驗(yàn)27
• 2.6 帕金森病小鼠的TH免疫組化27-30
• 3 小結(jié)和討論30-31
• 第二章 NQO1轉(zhuǎn)基因小鼠對L-DOPA異動癥的影響31-49
• 前言31-32
• 1 材料和方法32-36
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料32-33
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法33-36
• 2 結(jié)果36-46
• 2.1 小鼠帕金森病模型的篩選及實(shí)驗(yàn)分組36-37
• 2.2 小鼠的趴壁實(shí)驗(yàn)37-38
• 2.3 小鼠的AIM行為學(xué)38-41
• 2.4 異動癥小鼠的TH免疫組化41-43
• 2.5 異動癥小鼠的5-HT免疫組化43-46
• 3 小結(jié)和討論46-49
• 第三章 綜述49-55
• 1 異動癥及其機(jī)制的研究進(jìn)展49-52
• 1.1 突觸前機(jī)制49-50
• 1.2 突觸后機(jī)制50-52
• 2 多巴醌、多巴胺醌及醌蛋白的神經(jīng)毒性52-53
• 3 異動癥的醌-醌蛋白機(jī)制53
• 4 醌氧化還原酶1對醌的還原作用53-55
• 參考文獻(xiàn)55-64
• 附錄64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：高表達(dá)NQO1對左旋多巴異動癥的影響及其機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：275523