【摘要】：目的:對(duì)兩個(gè)進(jìn)行性肌陣攣性共濟(jì)失調(diào)家系的致病基因進(jìn)行捕獲和驗(yàn)證,確定致病基因,為該病的發(fā)病機(jī)制和分子遺傳學(xué)研究提供新的依據(jù)。方法:(1)收集資料:收集兩個(gè)進(jìn)行性肌陣攣性共濟(jì)失調(diào)家系成員的相關(guān)資料。采集家系患者一般信息、發(fā)病年齡、臨床表現(xiàn)、相關(guān)輔助檢查結(jié)果如腦電圖、頭部MRI等,用EDTA抗凝管留取5ml血樣,放入-80℃冰箱保存待測(cè);正常人需要采集一般信息和留取血樣;同時(shí)畫出家系圖。(2)全外顯子組測(cè)序:待血樣留取完成后進(jìn)行DNA提取并完成DNA質(zhì)量評(píng)估;然后選擇家系1中兩名發(fā)病年齡早、臨床表現(xiàn)典型、病情嚴(yán)重的患者DNA,對(duì)其進(jìn)行片段化、末端修復(fù)反應(yīng)、3'末端加“A”反應(yīng)、連接測(cè)序接頭、文庫(kù)片段篩選、PCR擴(kuò)增DNA文庫(kù)、全外顯子芯片雜交、雜交文庫(kù)清洗及純化、PCR擴(kuò)增外顯子DNA文庫(kù),然后用Illumina Hiseq2000進(jìn)行高通量測(cè)序;得出的數(shù)據(jù)信息首先進(jìn)行數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估,然后參考序列比對(duì)分析、SNV/In Del檢測(cè)、SNV/In Del注釋,將所有的SNV/In Del位點(diǎn)與最新發(fā)布的群體數(shù)據(jù)庫(kù)、功能數(shù)據(jù)庫(kù)、以及疾病數(shù)據(jù)庫(kù)等已知信息進(jìn)行比對(duì)分析,評(píng)估這些SNV/In Del位點(diǎn)的變異頻率、功能特征、保守性、致病性等,快速地找到最有生物學(xué)意義的SNV/In Del位點(diǎn),尋找出候選致病基因。(3)Sanger測(cè)序驗(yàn)證:首先對(duì)完成全外顯子組測(cè)序的患者進(jìn)行自我驗(yàn)證,排除假陽性位點(diǎn);其次在PMA家系1中進(jìn)行家系共分離驗(yàn)證,考慮到該家系可能為常染色體顯性遺傳不全外顯,排除標(biāo)準(zhǔn)為:患者DNA未出現(xiàn)的突變位點(diǎn);然后進(jìn)行家系外驗(yàn)證,對(duì)已經(jīng)收集的另一個(gè)PMA家系同樣進(jìn)行該致病基因驗(yàn)證,明確是否也是同一個(gè)致病基因;最后以千人基因組數(shù)據(jù)庫(kù)作為對(duì)照組數(shù)據(jù),明確正常人群中是否攜帶該突變。結(jié)果:(1)PMA家系1共有67名成員,其中男性成員34人,女性成員33人;有臨床表型者16人,包括男性9人,女性7人,無臨床表型51人;每一代都有患者,但少數(shù)患者存在臨床隔代遺傳的現(xiàn)象。PMA家系2共有35名成員,其中男性成員16人,女性成員19人;有臨床表型者5人,包括男性2人,女性3人;無臨床表型30人。(2)家系1中大多數(shù)患者發(fā)病年齡介于10~20歲之間,平均發(fā)病年齡為15歲,發(fā)病年齡最小者4歲,最大者24歲,Ⅱ代中全部4個(gè)患者平均發(fā)病年齡為21.25歲,Ⅲ代中全部4個(gè)患者平均發(fā)病年齡為15歲,Ⅳ代中全部4個(gè)患者平均發(fā)病年齡為12.25歲;家系2中多數(shù)患者發(fā)病年齡也介于10~20歲之間,平均發(fā)病年齡為14歲,發(fā)病年齡最小者10歲,最大者20歲,Ⅰ代中1個(gè)患者發(fā)病年齡為18歲,Ⅱ代中全部3個(gè)患者平均發(fā)病年齡為14歲,Ⅲ代中1個(gè)患者發(fā)病年齡為11歲。(3)臨床表現(xiàn)多有進(jìn)行性加重的肌陣攣、共濟(jì)失調(diào),無認(rèn)知障礙,無癲癇發(fā)作。輔助檢查血、尿常規(guī)、肝腎功能基本正常,心電圖、X線胸片未見異常,肌電圖檢查示各肌均未見特征性改變,頭顱MRI示腦實(shí)質(zhì)未見異常信號(hào),部分患者腦溝略增寬。視頻腦電可見睡眠中雙額、額中線可見低幅棘波、棘慢波。(4)全外顯子組測(cè)序后初步分析得到了89162個(gè)基因突變位點(diǎn);結(jié)合各種數(shù)據(jù)庫(kù)和預(yù)測(cè)軟件進(jìn)一步篩選得到26個(gè)候選致病突變位點(diǎn):TACC2、OR8D4、SLC8A3、C16orf3、MARCH10、MROH7、OSBP2、WDR60、SGCE、PABPC1、CWF19L1、TAS2R43、INSC、ANO5、KLRF2、TAS2R43、CCDC168、IL34、FOXK2、LTBP2、JSRP1、LRRC3C、CYP4B1、ZGPAT、TENM2、PABPC1。(5)對(duì)完成全外顯子組測(cè)序的患者進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證,確實(shí)存在SGCE基因的該突變;其次對(duì)家系1中其余配合留取血樣的患者(11名)及正常表型成員(18名)進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證,結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有患者均攜帶有SGCE基因相同的突變,正常表型的家系的18名成員中有15名成員無SGCE基因相同突變,有3名成員有SGCE基因相同突變,符合家系共分離;然后對(duì)另一個(gè)PMA家系進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證,留取的10份DNA均無SGCE基因相同突變;最后在千人基因組中并未發(fā)現(xiàn)有SGCE基因相同突變。結(jié)論:(1)該兩個(gè)PMA家系為常染色體顯性遺傳,均有遺傳早現(xiàn),家系1為不全外顯;(2)PMA家系1致病基因突變?yōu)镾GCE,首次發(fā)現(xiàn)SGCE突變?yōu)镻MA致病基因;(3)PMA家系2未發(fā)現(xiàn)SGCE基因突變,致病基因暫不明確,考慮為遺傳異質(zhì)性所致。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R744.7
【圖文】：

AgroseGel質(zhì)檢圖譜

樣本平均測(cè)序深度

樣本插入片段分布

【參考文獻(xiàn)】

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1 王雪;韓濤;劉學(xué)伍;趙秀鶴;王淑貞;劉奇跡;遲兆富;;肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)不能一家系臨床及神經(jīng)影像學(xué)特點(diǎn)[J];中華神經(jīng)科雜志;2012年03期

2 呂云惠;;肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)障礙一家系報(bào)告[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2011年08期

3 李金波;;肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)障礙2例[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2007年03期

4 劉敏,譚蘭,宋玉強(qiáng);肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)障礙(PMA型)一例報(bào)告[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2005年03期

5 詹淑琴,王玉平,賈建平,李存江,李寧;肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)不能:13例報(bào)告及6例文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年05期

6 黃堅(jiān),周暉,趙忠新,吳維華,董淑貞,黃流清,邵福源;肌陣攣小腦協(xié)調(diào)不良癥(附3例報(bào)告)[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2004年05期

7 劉振寶;苗玲;;肌陣攣性小腦協(xié)調(diào)障礙一例報(bào)告及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2009年09期

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1 周暉;黃堅(jiān);趙瑛;吳維華;;肌陣攣小腦協(xié)調(diào)不良癥的神經(jīng)電生理研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

本文編號(hào)：2751234