本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細胞Cx43及其半通道在腦缺血再灌注損傷中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景缺血性腦血管疾病是臨床神經(jīng)內(nèi)科的常見疾病,其治療發(fā)展過程中的缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury, IRI)被認為是比疾病本身更具有破壞性,通常是決定預后的關(guān)鍵因素。腦神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的凋亡是腦缺血再灌注損傷的重要病理表現(xiàn),目前關(guān)于前者的研究較多,而后者的研究很少。星形膠質(zhì)細胞在神經(jīng)膠質(zhì)細胞中體積最大,在哺乳動物腦內(nèi)分布最廣泛,同時它比腦內(nèi)其他細胞具有更廣泛的縫隙連接(Gap junctions, GJs)�？p隙連接是相鄰細胞間細胞膜上傳遞信息的物質(zhì)管道,由兩個半通道(Hemichannel, HC)構(gòu)成�？p隙連接蛋白是構(gòu)成該通道的蛋白,其含量最多、分布最廣泛的是連接蛋白43(Connexin43, Cx43),目前被證實跟各種顱腦損傷以及細胞凋亡信號傳導密切相關(guān)。本實驗使用缺血再灌注損傷體外模型(細胞氧葡萄糖剝奪-再恢復模型),通過對Cx43、半通道抗體1(HC1)和細胞凋亡標志物—半胱天冬蛋白酶3(Caspase3, Casp3)表達的檢測,從細胞水平探討星形膠質(zhì)細胞Cx43及其半通道與細胞凋亡的關(guān)系以及在腦缺血再灌注損傷中二者可能起的作用。目的通過對細胞進行氧葡萄糖剝奪-再恢復(oxygen-glucose deprivation reoxygenation, OGDR)處理,研究Cx43及其半通道對星形膠質(zhì)細胞活性的影響以及與星形膠質(zhì)細胞凋亡的關(guān)系,探討Cx43及其半通道可能在缺血再灌注損傷中的作用,從而為缺血性腦血管疾病的治療和預后提供新的理論基礎(chǔ)和治療指南。方法人類大腦星形膠質(zhì)細胞株通過細胞培養(yǎng),使用免疫細胞化學染色檢測膠質(zhì)纖維酸性蛋白(星形膠質(zhì)細胞標志物,glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Cx43及HCl以鑒定其表達。細胞經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染后分為三組,分別為cell line組(正常細胞株)、Psup組(空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染)和shRNA組(特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染),通過免疫印跡法對每組Cx43和HC1的表達進行檢測。每組細胞分別給予OGDR處理,各組內(nèi)未處理細胞作為對照組。在不同的氧葡萄糖再恢復時間Ohour、4hours和24hours (Oh、4h、24h),用MTT法檢測各組細胞活性,通過免疫印跡法檢測各組Cx43,HCl和Casp3的表達。結(jié)果1.本實驗使用的細胞可見Cx43+GFAP和HCl+GFAP的表達,鑒定結(jié)果為星形膠質(zhì)細胞,且細胞膜存在Cx43及其半通道的表達。2. Cell line組和Psup組細胞中都有Cx43和HC1的表達,但在shRNA組中沒有Cx43和HC1的表達,轉(zhuǎn)染成功。3. OGDR后cell line組和Psup組星形膠質(zhì)細胞的細胞活性在氧葡萄糖再恢復4h明顯下降,與對照組差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05),而在氧葡萄糖恢復0h和24h的細胞活性與對照組差異均無統(tǒng)計學意義(均P0.05)；shRNA組星形膠質(zhì)細胞在氧葡萄糖再恢復0h、4h和24h的細胞活性與對照組差異均無統(tǒng)計學意義(均P0.05)。4. OGDR后cell line組和Psup組星形膠質(zhì)細胞中Cx43、HC1和Casp3的表達在氧葡萄糖再恢復4h明顯升高,與對照組差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05),而在氧葡萄糖恢復0h和24h的表達與對照組差異均無統(tǒng)計學意義(均P0.05)；shRNA組星形膠質(zhì)細胞中Cx43、HC1和Casp3在氧葡萄糖再恢復0h、4h和24h的表達與對照組差異均無統(tǒng)計學意義(均胗0.05)結(jié)論1.腦缺血再灌注損傷早期星形膠質(zhì)細胞存活力降低,Cx43及其半通道可能起促進作用。2.腦缺血再灌注損傷早期星形膠質(zhì)細胞凋亡增多,Cx43及其半通道可能促進了細胞凋亡進程,進而在預測早期腦缺血再灌注損傷方面起關(guān)鍵作用。3.雖然本研究中特異性Cx43-shRNA轉(zhuǎn)染是作為一種分析工具,但臨床中可能為改善缺血再灌注損傷后的腦細胞活性,減少細胞凋亡提供一個有前景的治療手段。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白43 半通道 星形膠質(zhì)細胞 缺血再灌注損傷 氧葡萄糖剝奪-再恢復
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號說明12-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-31
• 討論31-39
• 結(jié)論39-40
• 附表40-42
• 參考文獻42-49
• 致謝49-50
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文50-51
• 附件51

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