本文關(guān)鍵詞：小膠質(zhì)細(xì)胞TRIF信號(hào)在帕金森病發(fā)生中的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種慢性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,它的病因至今未明。尸體解剖、遺傳學(xué)調(diào)查、回顧性研究和分子影像學(xué)診斷均提示炎癥反應(yīng)在PD的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。小膠質(zhì)細(xì)胞是參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的主要免疫細(xì)胞,具有炎癥調(diào)理、免疫監(jiān)視和識(shí)別吞噬等功能。經(jīng)典活化的M1型小膠質(zhì)細(xì)胞,通過(guò)釋放大量的前炎性因子和氧自由基等,加重神經(jīng)元的損傷;經(jīng)替代激活途徑活化的M2型小膠質(zhì)細(xì)胞,可與M1型細(xì)胞相拮抗,抑制炎癥反應(yīng),從而減輕神經(jīng)毒性。Toll樣受體是在神經(jīng)系統(tǒng)主要表達(dá)于小膠質(zhì)細(xì)胞的天然免疫受體,其下游TRIF信號(hào)的活化可能與小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2表型轉(zhuǎn)化的內(nèi)在調(diào)控密切相關(guān)。目的:研究TRIF信號(hào)與小膠質(zhì)細(xì)胞遷移活化及向不同表型轉(zhuǎn)化的關(guān)系,探討共培養(yǎng)體系中小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)損傷的多巴胺能神經(jīng)元的作用及特定蛋白表達(dá)水平的影響。方法:1.利用si RNA轉(zhuǎn)染小膠質(zhì)細(xì)胞BV2細(xì)胞系,獲得TRIF表達(dá)量特異性下降的小膠質(zhì)細(xì)胞。Western blot和熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染24小時(shí)后的小膠質(zhì)細(xì)胞TLR3-TRIF信號(hào)通路相關(guān)蛋白及下游細(xì)胞因子的表達(dá)情況。2.使用Transwell共培養(yǎng)體系觀察TRIF分子是否影響小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移能力。3.使用熒光定量PCR檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2活化表型及TRIF敲降是否影響小膠質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化。4.應(yīng)用免疫熒光化學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)等方法觀察共培養(yǎng)體系中小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)MPP+引起的多巴胺能神經(jīng)元凋亡的影響。5.使用Western blot技術(shù)檢測(cè)與小膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)的多巴胺能神經(jīng)元酪氨酸羥化酶及多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示,si RNA轉(zhuǎn)染BV2細(xì)胞24小時(shí)后,TLR3-TRIF信號(hào)通路中TRIF、P-IRF3的表達(dá)均有下降(P0.05),q PCR結(jié)果表明BV2細(xì)胞IFN-β的表達(dá)在對(duì)照組呈逐漸上升趨勢(shì),而在si TRIF組則呈平穩(wěn)態(tài)勢(shì),同一時(shí)間點(diǎn)與si NC組相比具有顯著差異(P0.05)。2.Transwell共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證明,BV2細(xì)胞受MN9D細(xì)胞損傷激活后,si NC組BV2細(xì)胞遷移至transwell膜另一側(cè)的細(xì)胞數(shù)顯著多于si TRIF組(P0.01)。3.q PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,受MN9D細(xì)胞損傷激活或LPS(M1型細(xì)胞誘導(dǎo)劑)/IL-4(M2型細(xì)胞誘導(dǎo)劑)誘導(dǎo)后,TNF-α、IL-6、CD86、i NOs等M1型小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物及IL-10、CD206、Arg1、YM1等M2型小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)在si NC細(xì)胞組隨時(shí)間上升趨勢(shì)明顯,而在si TRIF組變化不大,同一時(shí)間點(diǎn)相比存在顯著差異(P0.01)。4.細(xì)胞免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)均發(fā)現(xiàn),共培養(yǎng)體系中si TRIF組BV2細(xì)胞對(duì)于MN9D細(xì)胞的凋亡和損傷作用較si NC組更為明顯(P0.05)。5.Western blot結(jié)果顯示,BV2細(xì)胞與MN9D細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,si NC組MN9D細(xì)胞酪氨酸羥化酶及多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)量與si TRIF組相比具有差異(P0.05)。主要結(jié)論:1.敲降小膠質(zhì)細(xì)胞TRIF信號(hào)可以降低多巴胺能神經(jīng)元損傷刺激下小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移活性。2.敲降小膠質(zhì)細(xì)胞TRIF信號(hào)可以影響多巴胺能神經(jīng)元損傷刺激及誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,減弱小膠質(zhì)細(xì)胞活化效應(yīng)。3.敲降小膠質(zhì)細(xì)胞TRIF信號(hào)可以加重共培養(yǎng)體系中多巴胺能神經(jīng)元的損傷,同時(shí)影響多巴胺能神經(jīng)元酪氨酸羥化酶和多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的蛋白表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：PD 小膠質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞表型 TRIF 多巴胺能神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分 TRIF信號(hào)對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞遷移活化及表型轉(zhuǎn)化的作用15-37
• 1 材料與方法15-28
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-28
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-34
• 2.1 siRNA干擾TRIF在BV2 細(xì)胞中的表達(dá)可部分阻斷PolyI:C對(duì)TLR3-TRIF信號(hào)通路及下游因子的激活效應(yīng)28-29
• 2.2 敲降TRIF阻礙體外PD損傷模型中BV2 細(xì)胞的遷移29-31
• 2.3 敲降TRIF阻礙體外PD損傷模型中BV2 細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化31-32
• 2.4 敲降TRIF阻礙IL-4/LPS誘導(dǎo)的BV2 細(xì)胞向不同表型轉(zhuǎn)化32-34
• 3 討論34-36
• 4 小結(jié)36-37
• 第二部分 TRIF信號(hào)介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的作用與機(jī)制探討37-45
• 1 材料與方法37-40
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-43
• 2.1 敲降TRIF加重共培養(yǎng)體系中MPP+損傷引起的MN9D細(xì)胞凋亡40-42
• 2.2 敲降TRIF影響共培養(yǎng)體系中MPP+損傷的MN9D細(xì)胞某些特定蛋白的表達(dá)42-43
• 3 討論43-44
• 4 小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 文獻(xiàn)綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 附錄60-62
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果62-63
• 致謝63

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本文編號(hào)：262759