【摘要】：目的研究維生素D(vitamin D,VD)對大鼠全腦缺血(global cerebral ischemia,GCI)的神經(jīng)保護(hù)作用,進(jìn)一步闡明ERK信號通路在VD改善大鼠GCI后神經(jīng)功能障礙中的作用,從而為GCI治療提供新的干預(yù)措施。方法將130只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組(Sham組,n=40)、全腦缺血模型組(GCI組,n=40)、VD治療組(GCI+VD組,n=40)、p-ERK1/2抑制劑組(GCI+VD+PD98059組,n=5)和溶劑二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)組(GCI+VD+DMSO組,n=5)。采用改良四血管閉塞法建立大鼠GCI模型,于缺血后1、3、5、7天通過神經(jīng)功能缺損評分(Neurological Severity Scores,NSS)和干濕比重法評估各組大鼠神經(jīng)功能缺損程度和腦組織含水量;于缺血后3天通過HE染色和透射電鏡觀察各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)變化,TUNEL染色檢測各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況,應(yīng)用Western-Blot法、免疫組化染色和免疫熒光染色檢測各組大鼠海馬組織VDR、p-ERK1/2、Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果1神經(jīng)功能缺損程度:GCI組大鼠在缺血后1、3、5、7天NSS評分與Sham組相比明顯升高(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3、5、7天NSS評分與GCI組相比明顯降低(P0.05)。2腦組織含水量:GCI組大鼠在缺血后1、3、5、7天腦組織含水量與Sham組相比明顯升高(P0.05);而GCI+VD組大鼠在缺血后3、5、7天腦組織含水量與GCI組相比明顯降低(P0.05)。3 HE染色:Sham組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,胞漿透明,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,染色質(zhì)分布均勻,核仁清晰,形態(tài)接近正常;GCI組大鼠在缺血后3天海馬CA1區(qū)部分神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂,胞體收縮呈三角形或極不規(guī)則,胞漿紅染,胞核固縮,結(jié)構(gòu)不清;GCI+VD組大鼠在缺血后3天海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性壞死和缺失的數(shù)量、程度均與GCI組相比減輕。4透射電鏡:Sham組大鼠海馬組織神經(jīng)細(xì)胞的胞核較大、呈圓形或橢圓形,核膜結(jié)構(gòu)清晰、完整,染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀均勻分布,胞質(zhì)內(nèi)無空泡形成;GCI組大鼠在缺血后3天海馬組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,染色質(zhì)凝集成塊,核膜和細(xì)胞器溶解或消失,有空泡形成;GCI+VD組大鼠在缺血后3天海馬組織神經(jīng)細(xì)胞損傷與GCI組相比減輕。5 TUNEL染色:Sham組大鼠海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞零星分布,著色淺淡;GCI組大鼠在缺血后3天海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)與Sham組相比明顯升高(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3天海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)與GCI組相比明顯降低(P0.05)。6 VDR Western-Blot分析:GCI組大鼠在缺血后3天海馬組織VDR蛋白表達(dá)量與Sham組相比明顯升高(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3天海馬組織VDR蛋白表達(dá)量與GCI組相比明顯升高(P0.05)。7 Caspase-3、Bcl-2及Bax免疫組化染色:GCI組大鼠在缺血后3天與Sham組相比海馬CA1區(qū)Caspase-3和Bax免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加,Bcl-2免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3天與GCI組相比海馬CA1區(qū)Caspase-3和Bax免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少,Bcl-2免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加(P0.05)。8Cleaved caspase-3、Bcl-2及Bax Western-Blot分析:GCI組大鼠在缺血后3天與Sham組相比海馬組織Cleaved-caspase-3和Bax蛋白表達(dá)量明顯升高,Bcl-2蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3天與GCI組相比海馬組織Cleaved caspase-3和Bax蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.05),Bcl-2蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.05)。9 p-ERK1/2和Neu N的免疫熒光染色:Sham組大鼠海馬CA1區(qū)p-ERK1/2蛋白表達(dá)較低,較少與Neu N陽性細(xì)胞共定位;GCI組大鼠在缺血后3天與Sham組相比海馬CA1區(qū)Neu N陽性細(xì)胞明顯減少,但p-ERK1/2蛋白表達(dá)升高;GCI+VD組在大鼠缺血后3天與GCI組相比海馬CA1區(qū)p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平明顯升高,且較多與Neu N陽性細(xì)胞共定位。10 p-ERK1/2的Western-Blot分析:GCI組大鼠在缺血后3天海馬組織p-ERK1/2蛋白表達(dá)量與Sham組相比明顯升高(P0.05);GCI+VD組大鼠在缺血后3天p-ERK1/2蛋白表達(dá)量與GCI組相比明顯升高(P0.05)。11引入p-ERK1/2抑制劑PD98059后的Western-Blot分析:GCI+VD+PD98059組大鼠在缺血后3天與GCI+VD+DMSO組相比,海馬組織Cleaved caspase-3和Bax蛋白表達(dá)量明顯升高,而p-ERK1/2和Bcl-2蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.05)。結(jié)論1 VD通過減輕大鼠腦水腫,降低神經(jīng)功能缺損評分,從而改善大鼠腦缺血后神經(jīng)功能障礙;2 VD改善大鼠腦缺血后神經(jīng)功能障礙的分子機(jī)制可能與激活ERK信號通路,減少海馬神經(jīng)細(xì)胞線粒體凋亡因子有關(guān)。
【圖文】：

在缺血后 1、3、5、7 天 NSS 評分與 Sham 組相比明顯I+VD 組大鼠在缺血后 3、5、7 天 NSS 評分與 GCI 組相0.001, P<0.001）。（見表 1，圖 1）表 1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損得分比較（x ±s）e1 Comparison of neurological deficits of rats in each group（x ±s），P<0.05；#：與 GCI 組比，P<0.05。n神經(jīng)功能缺損得分1d 3d 5d 5 2.40±0.54 2.60±0.55 2.20±0.45 5 13.20±0.84* 11.60±0.89* 10.60±1.14* 95 12.40±0.89* 9.00±1.22*#7.40±0.55*#5303.582 124.584 149.396 <0.001 <0.001 <0.001

GCI 組大鼠在缺血后 1、3、5、7 天腦組織含水量與 Sham 組相比0.001）；而 GCI+VD 組大鼠在缺血后 3、5、7 天腦組織含水量與降（P 均<0.001）。（見表 2，圖 2）表 2 各組大鼠腦組織含水量比較（x ±s）Table2 Comparison of brain water content of rats in each group（x ±s）ham 組比，P<0.05；#：與 GCI 組比，，P<0.05。腦組織含水量（%）1d（n=5） 3d（n=5） 5d（n=5） 7d（n 75.29±0.29 75.48±0.25 75.23±0.25 75.36± 77.30±0.28* 78.35±0.29* 77.48±0.37* 77.37± 組 77.10±0.30* 77.14±0.18*#76.12±0.24*#76.06±072.834 173.975 74.944 62.8<0.001 <0.001 <0.001 <0.0
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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1 郭元星;;雙能量CT的腦卒中超早期快速篩查研究進(jìn)展[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2014年05期

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本文編號：2613054