【摘要】：目的：研究小腦延髓池注入凝血酶(Thrombin, TM)對大鼠腦血管的損害作用及與基底動脈痙攣的關(guān)系；并探討腦脊液中TM對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage, SAH)模型及非SAH模型腦血管的損害是否存在差異。 方法：(1)采用通過小腦延髓池注入TM的方法將一定劑量的外源性TM注入大鼠蛛網(wǎng)膜下腔,采用“小腦延髓池二次注血法”制作大鼠SAH模型,大鼠(全血+TM)模型的制作方法是在第一次注血時將中等劑量(3U)的TM通過小腦延髓池注射而形成。(2)實驗動物分組：采用隨機數(shù)字表法將健康清潔級大鼠分為A1(對照)組、A2(單純TM)組和A3(全血+TM)組三個組。①在A1(對照)組中的實驗動物均行假手術(shù),通過大鼠小腦延髓池注入相應(yīng)劑量的生理鹽水形成假手術(shù)對照組；②在A2(單純TM)組中通過小腦延髓池向大鼠蛛網(wǎng)膜下腔單純注入凝血酶3U；③在A3組中的實驗動物為SAH模型,并在第一次注血時向蛛網(wǎng)膜下腔注入凝血酶3U。(3)手術(shù)成功后,根據(jù)實驗設(shè)計在術(shù)后第3天進(jìn)行灌注處死大鼠,取腦基底動脈標(biāo)本行病理組織學(xué)檢查,并運用計算機專業(yè)數(shù)碼圖像分析軟件Image-Pro Plus (IPP)6.0測量各組大鼠腦基底動脈內(nèi)腔橫截面積,以小腦上動脈下0.2mm處為斷端,小腦前下動脈起點上下斷端以及基底動脈與椎動脈交點處上斷端4點取材血管橫截面制作病理切片；再者,各組標(biāo)本行免疫組化后檢測基底動脈壁蛋白酶激活受體-1(Proteinase-activated Receptor-1, PAR-1)和腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表達(dá)水平,以PAR-1和TNF-α平均光密度值為半定量指標(biāo)做統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果：①單純注射凝血酶(TM)組(A2)與對照組(A1)比較,大鼠基底動脈內(nèi)腔橫截面積較小,差異性顯著(P0.05),基底動脈PAR-1和TNF-α的平均光密度值較A1組高,有顯著性差異(P0.05)；②同等劑量TM,在SAH模型(A3組)中,基底動脈內(nèi)腔橫截面積較非SAH模型(A2組)小,有顯著性差異(P0.05),但基底動脈TNF-α平均光密度值卻較A2組低,有顯著性差異(P0.05),基底動脈PAR-1平均光密度值無顯著性差異(P=0.420.05)。 結(jié)論：①TM注入大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后基底動脈內(nèi)腔橫截面積縮小,免疫組化檢測顯示基底動脈壁凝血酶受體PAR-1和炎性因子TNF-α的表達(dá)水平增高,提示腦脊液中存在TM有致CVS和腦血管損害作用；②SAH模型與非SAH模型比較,相同劑量TM注入蛛網(wǎng)膜下腔后,基底動脈內(nèi)腔橫截面積、PAR-1表達(dá)水平和TNF-α的表達(dá)水平差異性不全顯著,提示無論是否存在SAH, TM均可導(dǎo)致腦血管痙攣發(fā)生。 目的：研究大鼠SAH模型腦脊液中TM存在于蛛網(wǎng)膜下腔的時間與其對腦血管的損害程度的相關(guān)性；探討大鼠SAH模型腦脊液中TM與腦血管痙攣(Cerebral vasospasm, CVS)程度之間的量效關(guān)系。 方法：(1)采用“小腦延髓池二次注血法”制作大鼠SAH模型,并在第一次注血時將不同研究劑量的TM注入大鼠蛛網(wǎng)膜下腔,形成(全血+TM)模型。(2)實驗動物分組：采用隨機數(shù)字法將符合實驗要求的大鼠分為B1組(3天)和B2組(7天)兩個實驗組。所有實驗動物按照方法(1)制作SAH模型, B1組和B2組分別各設(shè)四個小組：①全血,②全血+TM(1U),③全血+TM(3U),④全血+TM(5U)。(3)手術(shù)成功后,根據(jù)實驗設(shè)計分別在第3天或第7天灌注處死大鼠,取腦基底動脈標(biāo)本行病理組織學(xué)檢查,運用計算機專業(yè)數(shù)碼圖像分析軟件Image-Pro Plus (IPP)6.0測量各組大鼠腦基底動脈內(nèi)腔橫截面積；然后各組標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測大鼠腦基底動脈壁PAR-1和TNF-α的平均光密度值。 結(jié)果：(1)全血+TM(3U)3d組(B1.③)和全血+TM(3U)7d組(B2.③)比較,7d組(B2.③)基底動脈橫截面積較小,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0030.05), B2.③組的PAR-1和TNF-α平均光密度值增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0430.05,P=0.0040.05);(2)全血+TM3d組(B1)組內(nèi)四組間比較：隨TM濃度增高,基底動脈橫截面積逐漸縮小、PAR-1和TNF-α平均光密度值逐漸增高,總體組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),進(jìn)一步行兩兩比較,上述三個指標(biāo)的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(3)全血+TM7d組(B2)組內(nèi)四組間比較：四組間在基底動脈內(nèi)腔橫截面積、PAR-1平均光密度值及TNF-α平均光密度值三個指標(biāo)上的比較不全相同,有顯著性差異(P0.05),進(jìn)一步行兩兩比較,組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：①在大鼠SAH模型中,隨著TM存在于蛛網(wǎng)膜下腔的時間延長,CVS程度呈加重趨勢；②在大鼠SAH模型中,存在于腦脊液中的TM劑量越大,CVS程度越重,兩者呈正相關(guān)。
【圖文】：

手術(shù)24小時后，大鼠神經(jīng)功能障礙情況會有所改善，枝循環(huán)較豐富有關(guān)["]�？椥螒B(tài)學(xué)變化型腦標(biāo)本肉眼可見，，大量血凝塊彌漫性分布于蛛網(wǎng)膜s環(huán)周圍及環(huán)池為主。各組實驗動物于設(shè)定時間點以固定組織，取材腦及基底動脈組織石

本文編號：2574561