【摘要】：缺血性腦中風(fēng)是危害全球人類健康的重要疾病之一。其發(fā)病率一直居高不下,而目前對于腦中風(fēng)治療手段有限,急需尋求新的改善腦中風(fēng)的方法。在腦中風(fēng)發(fā)生的急性期,小膠質(zhì)細(xì)胞作為重要的固有免疫細(xì)胞,能夠迅速活化,引起一系列的炎癥反應(yīng)。隨著中風(fēng)的發(fā)展,腦內(nèi)微環(huán)境的改變,小膠質(zhì)細(xì)胞可被微環(huán)境中的某些因子刺激分化為不同的表型,課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在體外將小膠質(zhì)細(xì)胞極化為M2型后回輸至中風(fēng)小鼠腦內(nèi)能夠明顯減小腦中風(fēng)損傷區(qū)的梗死面積,提示M2型小膠質(zhì)細(xì)胞能夠作為改善腦中風(fēng)的一種策略,但其具體機(jī)制尚不明確,有待于進(jìn)一步的研究。因此本研究通過3D培養(yǎng)技術(shù)將M2型小膠質(zhì)細(xì)胞與HUVEC血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng),檢測血管生成情況,并分析其可能的機(jī)制是否是通過分泌exosomes發(fā)揮作用。基于以上的背景,我們從以下幾方面進(jìn)行了研究:1、將小膠質(zhì)細(xì)胞系BV2分別極化為M1型和M2型,并鑒定了表型;2、為了研究不同表型的小膠質(zhì)細(xì)胞的促血管生成作用,我們通過BV2細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC進(jìn)行3D共培養(yǎng)以及雞胚絨毛尿囊膜實驗,均觀察到M2型BV2具有較強(qiáng)的促血管生成能力。3、為了研究M2型BV2發(fā)揮促血管生成作用的機(jī)制,我們分離了不同表型BV2細(xì)胞培養(yǎng)上清中的外泌體(exosomes)并將其直接與內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC進(jìn)行3D共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)M2型BV2來源的exosomes能夠更好的促進(jìn)血管生成。4、為了進(jìn)一步揭示exosomes發(fā)揮促血管作用的具體機(jī)制,我們用基因芯片的方法檢測了不同表型BV2細(xì)胞釋放的exosomes內(nèi)micro RNA的表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)mi RNA-26a差異較明顯,且有報道其與血管生成相關(guān),那么M2型BV2細(xì)胞很有可能是通過此mi RNA來實現(xiàn)促血管生成的。我們通過以上實驗揭示了M2型小膠質(zhì)細(xì)胞可以促進(jìn)血管生成,并且這種作用是通過釋放exosomes實現(xiàn)的,而exosomes中的mi RNA-26a可能是其發(fā)揮促血管生成作用的一個關(guān)鍵機(jī)制之一。本研究為改善中風(fēng)提供了新的可能和新的方法。
【圖文】：

第一部分 小膠質(zhì)細(xì)胞的極化及其表型的鑒定2 結(jié)果2.1 LPS 極化 BV2 為 M1 型，IL-4 極化 BV2 為 M2 型的基因水平檢測為了得到 M2 型的小膠質(zhì)細(xì)胞 BV2 進(jìn)行后續(xù)實驗，實驗室分別采用 LPS 誘導(dǎo) M1 型 BV2 細(xì)胞（對照組），，用 IL-4 誘導(dǎo) M2 型 BV2 細(xì)胞（實驗組），于誘導(dǎo)48 h 提取細(xì)胞的 RNA 進(jìn)行基因檢測。采用 PCR 的方法檢測巨噬細(xì)胞 M1 型表面標(biāo)志 TNF-α 和 iNOS；M2 型表面標(biāo)志 Arg-1 和 TGF-β 的基因水平表達(dá)，結(jié)果如圖 1 所示：

BV2極化后血管生成相關(guān)基因的表達(dá)檢測A)ELISA檢測BV2極化后上清中VEGF的表達(dá);日)R丁一戶CR檢測BV2極化后血管生成相關(guān)基因VEGF,HGF,FGF.EGF,PGF.PDGF,MMP-2.MMP一的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3

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