發(fā)布時間：2019-11-21 05:56

【摘要】：膠質(zhì)瘤母細胞瘤是最常見、最具侵襲性的腦腫瘤，其發(fā)病率為每年3.17例/100，000人，占原發(fā)性腦腫瘤17%，其5年生存率及10年生存率分別為4.5%及2.7%。盡管膠質(zhì)母細胞瘤的治療在護理、手術(shù)切除、放療和化療等領(lǐng)域不斷改進，但其中位無進展期及中位生存期仍僅為6.7個月及14.6個月。盡管目前其在手術(shù)，放療和化療方面目前已有相當(dāng)大的進展，但膠質(zhì)母細胞瘤預(yù)后并沒有得到實質(zhì)性改善。根據(jù)既往研究發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)母細胞瘤的預(yù)后極差除了其浸潤生長方式，其具有免疫抑制表型也是其特征之一。而且，膠質(zhì)母細胞瘤細胞幾乎可耐受不同的凋亡刺激。改變細胞凋亡途徑不但促進膠質(zhì)瘤的發(fā)病，而且會促進對傳統(tǒng)遺傳毒性療法的耐受，因為目前的治療方法大多無法有效控制和治療膠質(zhì)母細胞瘤，故具有創(chuàng)新性的治療策略必須得到發(fā)展。在過去的幾十年中人們已經(jīng)作出了大量的努力。通過研究發(fā)現(xiàn)在生理條件下，雖然膠質(zhì)母細胞瘤可抵抗受嚴(yán)格調(diào)控的凋亡性細胞死亡過程，致使癌細胞的存活率有所提高。然而，細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)在膠質(zhì)母細胞瘤細胞凋亡中扮演重要角色，因此，從誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡角度治療膠質(zhì)母細胞瘤成為可能。然而，迄今為止，臨床研究都指向靶向治療途徑，顯示出的療效有限。在膠質(zhì)母細胞瘤治療中，目前研究高效、低毒性的誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞凋亡的靶向治療藥物仍然是膠質(zhì)母細胞瘤研究熱點。 石膽酸是一種膽汁酸，新近研究發(fā)現(xiàn)低濃度的LCA可以使BE(2)-m17和SK-n-MCIXC細胞對過氧化氫誘發(fā)的細胞衰亡變得敏感，一定濃度的LCA使人神經(jīng)元細胞的原始培養(yǎng)物對此類型的細胞死亡具有了一定的抵御能力。在NB細胞系BE(2)-m17和SK-n-MCIXC中，LCA通過與細胞表面緊密結(jié)合，啟動細胞內(nèi)級聯(lián)反應(yīng)觸發(fā)細胞內(nèi)在和外在的細胞衰亡路徑，最終導(dǎo)致細胞死亡。LCA與細胞表面緊密結(jié)合后，通過激活CASPASE-8引起MOMP，這反過來又會導(dǎo)致MOMP。LCA也會通過cAMP/PKA信號通路刺激TGR5傳輸MOMP，激活從細胞質(zhì)膜到線粒體之間的信號。LCA誘發(fā)的MOMP可能會導(dǎo)致細胞色素C從線粒體中流出，從而導(dǎo)致衰亡體的形成和所觀察到的CASPASE-9活化。CASPASE-9隨后會通過酶原-3的蛋白水解過程激活CASPASE-3。CASPASE-3的蛋白水解活化作用也可通過LCA誘發(fā)細胞衰亡的外源路徑內(nèi)的CASPASE-8來實現(xiàn)�；罨腃ASPASE-3通過對蛋白質(zhì)載體的分解完成LCA驅(qū)動型細胞衰亡過程的分解階段。此外，LCA與細胞表面的緊密結(jié)合會引發(fā)CASPASE-6的蛋白水解活化作用。該活化作用的機理和LCA驅(qū)動型細胞衰亡過程中是否有CASPASE-6的參與仍有待確定。另外，LCA與細胞表面的緊密結(jié)合會引起炎癥CASPASE-1的抑制。該抑制可能會衰減細胞激素白細胞介素1β和白細胞介素18的產(chǎn)生和分泌，從而阻止B細胞的生長和增殖，這對LCA的抗癌效用會起到一定的效果。并且通過研究發(fā)現(xiàn)LCA刺激的TGR5會啟動三份子的級聯(lián)反應(yīng)，這會觸發(fā)內(nèi)在和外在路徑的細胞衰亡。首先，它可以通過修改線粒體中的氧化還原過程啟動cAMP/PKA信號通路。其次，升高的LCA細胞內(nèi)ROS響應(yīng)加劇了囊泡將CD95/Fas死亡受體單體從高爾基體轉(zhuǎn)移向細胞質(zhì)膜的過程。第三，受LCA刺激的TGR5可以激活MEKK1/2/3-MKK4/7蛋白激酶的級聯(lián)反應(yīng)。由于LCA可通過級聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)神經(jīng)源性腫瘤凋亡，并且一定濃度下具有對正常神經(jīng)細胞保護作用，故LCA對膠質(zhì)母細胞瘤抗腫瘤研究具有重要價值，，其作用機制仍需進一步研究。 石膽酸可殺死膠質(zhì)瘤細胞，且不損傷正常神經(jīng)元細胞。但石膽酸抗膠質(zhì)瘤的機制目前尚不清楚，尤其是對膠質(zhì)母細胞瘤有無調(diào)控作用尚不可知。既往研究得知不飽和醛類可激活Fas/FasL等細胞凋亡途徑，而活性氧（ROS）可通過導(dǎo)致細胞結(jié)構(gòu)和功能損傷，甚至細胞死亡，產(chǎn)生損害作用。質(zhì)子漏通過脂質(zhì)過氧化作用回到線粒體基質(zhì)，限制活性氧產(chǎn)生，導(dǎo)致氧化磷酸化的解偶聯(lián)發(fā)生。脂質(zhì)過氧化引起自由基變化，生成不飽和醛類，是線粒體信號分子，誘發(fā)細胞凋亡，及引起突變誘發(fā)腫瘤。故建立不飽和醛線粒體模型，提供和搭建了研究石膽酸作用膠質(zhì)母細胞瘤的分子機制的方法、橋梁和平臺，具有重要研究價值。本研究選擇膠質(zhì)母細胞瘤線粒體為研究對象，采用過氧化氫誘導(dǎo)建立膠質(zhì)母細胞瘤線粒體脂質(zhì)過氧化模型，及建立不飽和醛線粒體模型，并在石膽酸干預(yù)下檢測不飽和醛，探索石膽酸對不飽和醛的調(diào)控能力，初步闡明石膽酸通過線粒體抗膠質(zhì)母細胞瘤的分子機制。結(jié)果本研究成功建立了生物活性不飽和醛線粒體模型，并實際應(yīng)用于石膽酸調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤的體外作用機制的研究。借助2-硫代巴比妥酸與生物活性不飽和醛反應(yīng)，確定建立最佳模型條件：膠質(zhì)母細胞瘤線粒體1.5mg/ml，H2O20.6mg/ml，反應(yīng)時間30min，3.0ml46mM硫代巴比妥酸，檢測指標(biāo)為495nm、450nm和532nm峰變化。根據(jù)上述線粒體模型，石膽酸抗不飽和醛調(diào)控495nm、450nm和532nm變化的最佳條件為100μM，反應(yīng)時間為15min和酸性微環(huán)境。研究結(jié)論為石膽酸通過調(diào)控495nm，450nm和532nm峰變化，產(chǎn)生抗膠質(zhì)母細胞瘤作用。故可以得出石膽酸適宜濃度具有抗膠質(zhì)母細胞瘤作用，不飽和醛膠質(zhì)母細胞瘤線粒體模型將成為石膽酸機制研究的有效、快捷實用的平臺。 反式丁烯醛屬于親水性α, β-不飽和醛，可以通過線粒體脂質(zhì)過氧化內(nèi)源性產(chǎn)生，在產(chǎn)生位置高效吸收，然后與DNA反應(yīng)，形成DNA加合物。反式丁烯醛的生物活性羰基，引起脂質(zhì)過氧化作用，誘導(dǎo)細胞凋亡并產(chǎn)生致癌作用。其紫外光譜主峰為495nm，故之前研究結(jié)論石膽酸通過調(diào)控495nm，450nm和532nm峰變化，產(chǎn)生抗膠質(zhì)母細胞瘤作用，有可能通過調(diào)控反式丁烯醛實現(xiàn)。但是目前，在分子水平上，關(guān)于石膽酸、反式丁烯醛、膠質(zhì)母細胞瘤線粒體相互作用研究甚少，涉及相互作用機制報道匱乏。故闡明石膽酸作用于反式丁烯醛的作用及機制具有重要科研價值。因此，我們采用反式丁烯醛為靶標(biāo)，以紫外可見吸收光譜和拉曼振動光譜媒介，觀察石膽酸對反式丁烯醛的紫外可見吸收光譜和拉曼振動光譜變化，奠定石膽酸作為治療腦膠質(zhì)母細胞瘤機制基礎(chǔ)。一方面，有利于闡明石膽酸對反式丁烯醛調(diào)控的分子機制，探究石膽酸作用反式丁烯醛可調(diào)諧分子靶點。另一方面，為進一步研究石膽酸抗膠質(zhì)母細胞瘤分子機制提供理論基礎(chǔ)。本研究采用紫外可見吸收檢測紫外吸收變化，檢測范圍400-600nm；采用拉曼振動光譜檢測反式丁烯醛振動光譜變化，檢測范圍在500-2000cm-1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)石膽酸對反式丁烯醛具有調(diào)控作用，494nm主峰呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，具有濃度依賴性，表明羥醛縮合反應(yīng)發(fā)生。拉曼振動光譜檢測結(jié)果顯示：極強帶1676cm1和強帶1642cm1的呈顯著下降趨勢，結(jié)果顯示：石膽酸對反式丁烯醛的分子調(diào)控靶點可能位于C=O和C=C。石膽酸對反式丁烯醛的調(diào)控特征，為石膽酸具有保護正常神經(jīng)細胞提供了分子學(xué)支持，進一步為石膽酸作為治療膠質(zhì)母細胞瘤的新藥機制進行解釋。故本研究通過紫外可見吸收光譜和拉曼振動光譜檢測，提供了石膽酸調(diào)控反式丁烯醛的光譜特征。結(jié)果表明：石膽酸對反式丁烯醛調(diào)控表現(xiàn)在紫外可見吸收光譜主峰（494nm）和拉曼振動光譜1676cm1極強帶及1642cm1強帶的變化。不同濃度石膽酸明顯降低反式丁烯醛含量。石膽酸調(diào)控反式丁烯醛靶點是C=O和C=C伸縮振動。石膽酸調(diào)控反式丁烯醛的分子機制是降低CHO中氧原子電子云，使CHO保持非激活態(tài)，防止共軛雙鍵分子極化作用，影響甲基誘導(dǎo)效應(yīng)和超共軛效應(yīng)，本研究結(jié)果對石膽酸抗膠質(zhì)母細胞瘤提供分子學(xué)支持，并發(fā)現(xiàn)石膽酸調(diào)控反式丁烯醛的分子靶點，為治療膠質(zhì)母細胞瘤藥物研發(fā)提供了新的思路。
【圖文】：

觀察 1 個主峰（495nm）和 2 個肩峰（532nm 和 450。3 個峰均呈劑量反應(yīng)依賴性特征。線粒體濃度 1.595nm、450nm 和 532nm 峰與線粒體濃度關(guān)系，見圖 450nm 峰值變化大于 532nm 峰值變化，而主峰 495nl 時更明顯。結(jié)果表明：當(dāng)線粒體濃度為 1.5mg/ml 時95nm 峰，可作為線粒體不飽和醛類模型參數(shù)。

22.40μM。模型中 H2O2對不飽和醛類紫外峰變化的線粒體的影入 H2O2，建立膠質(zhì)母細胞瘤線粒體脂質(zhì)過氧化模型實驗?zāi)Ｐ统霈F(xiàn) 3 個不同的峰，一個主峰（450nm）個較小的肩峰（532nm）。在不同的時間段，3 個峰的鐘時，3 個峰變化最明顯，隨著時間推移，峰的變化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡杰,江澄川,陳商群,吳浩強,彭頌先,唐婉君;膠質(zhì)母細胞瘤6號染色體雜合性丟失的初步研究[J];中國癌癥雜志;2001年03期

2 李南云，張?zhí)┖�，錢源澄，嚴(yán)小娟，印洪林，陳海薇;顱內(nèi)巨細胞膠質(zhì)母細胞瘤[J];診斷病理學(xué)雜志;1995年01期

3 ;神經(jīng)系腫瘤[J];國外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2000年05期

4 胡杰,江澄川,陳商群,吳浩強,彭頌先,唐婉君;膠質(zhì)母細胞瘤8號、22號染色體等位基因雜合性丟失的研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年09期

5 徐庚,張鵬,凌鋒;顱內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤及膠質(zhì)母細胞瘤術(shù)后骨瓣復(fù)位的作用(附43例報告)[J];山東醫(yī)藥;2003年15期

6 秦懷海,張楠,靳文毅,劉智;脊髓多形性膠質(zhì)母細胞瘤椎管內(nèi)轉(zhuǎn)移播種一例[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年04期

7 ;健康新知[J];中國新聞周刊;2007年33期

8 劉維生;肖新如;王碩;;膠質(zhì)母細胞瘤中腦組織特異性血管生成抑制因子1的研究進展[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2008年01期

9 薛洪利;孔令權(quán);梁國標(biāo);孫榮君;;大腦膠質(zhì)母細胞瘤62例治療[J];沈陽部隊醫(yī)藥;1994年05期

10 鄭緒鵬;神經(jīng)纖維瘤病并發(fā)腦室膠質(zhì)母細胞瘤一家系[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;1995年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 熊劍;章翔;程光;林洪;費舟;;Ardipusilloside Ⅰ誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞瘤細胞凋亡的研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

2 王翔;劉艷輝;毛慶;劉進平;游潮;;突變P53對人腦膠質(zhì)母細胞瘤化療敏感性和耐藥性的影響及作用機制[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

3 路俊鋒;吳勁松;周良輔;;聯(lián)合基因表達譜和拷貝數(shù)變異區(qū)分膠質(zhì)母細胞瘤與瘤周組織的初步研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

4 王翔;劉艷輝;毛慶;劉進平;游潮;;突變P53對人腦膠質(zhì)母細胞瘤化療敏感性和耐藥性的影響及作用機制[A];中國抗癌協(xié)會神經(jīng)腫瘤專業(yè)委員會第八屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

5 呂彥恩;曹雪濤;于益芝;雷虹;弭靜;趙春平;;G422小鼠膠質(zhì)母細胞瘤免疫基因治療的實驗研究[A];第七屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2001年

6 易林華;李安民;傅相平;查椺光;;額葉復(fù)發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤的VM-26頸內(nèi)動脈灌注化療的評價[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第二屆全國代表大會論文匯編[C];2007年

7 顧金海;李剛;蘇雨行;申杰;李蓉暉;賀峭偉;鄧林;;STAT3 Decoy ODN抑制膠質(zhì)母細胞瘤增殖實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

8 桂秋萍;王魯寧;朱明偉;;剛果紅血管病、老年性癡呆合并膠質(zhì)母細胞瘤、瘤卒中一例報道[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

9 郭泳鈿;任光陽;王培;謝明祥;代垠;張學(xué)軍;肖順武;王玉玉;李毅;李剛;陳加煜;猶春躍;;mTOR/P70S6K信號通路與膠質(zhì)母細胞瘤細胞系A(chǔ)172增殖及凋亡的實驗研究[A];第二屆西部神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2010年

10 金曙光;石清泉;王良;洪雷;;原位明膠酶譜法評估膠質(zhì)瘤基質(zhì)金屬蛋白酶活性[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 煒聞;Avastin獲準(zhǔn)用于治療膠質(zhì)母細胞瘤[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

2 谷文;FDA批準(zhǔn)Avastin 用于治療膠質(zhì)母細胞瘤[N];中國醫(yī)藥報;2009年

3 雷諾島;徹底擊斃毀滅性疾病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

4 王小龍;改良化合物可抑制腦腫瘤[N];科技日報;2009年

5 Bernhard Kirschbaum 博士;致力于推動個體化醫(yī)療[N];中國醫(yī)藥報;2010年

6 熊明山;為使癌癥不再逞兇[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

7 匡遠深;我國神外專家獨創(chuàng)開顱新術(shù)式[N];健康報;2003年

8 匡遠深;兒童松果體區(qū)腫瘤切除不再難[N];中國醫(yī)藥報;2003年

9 本報記者 大衛(wèi);Guilford公司申請批準(zhǔn)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤新藥[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

10 記者 班威;韓國研究發(fā)現(xiàn)咖啡因可抑制腦癌生長[N];經(jīng)濟參考報;2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊曉亮;實驗性分子靶向治療膠質(zhì)母細胞瘤[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 孫種夷;膠質(zhì)母細胞瘤預(yù)后評價的數(shù)學(xué)模型[D];中南大學(xué);2013年

3 肖群根;LRIG2基因全長及胞外段對膠質(zhì)母細胞瘤細胞系生物學(xué)特性的影響及其機制[D];華中科技大學(xué);2013年

4 吳炳山;Curcumin治療膠質(zhì)母細胞瘤分子機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

5 賀峭偉;SIM2-s基因在人腦膠質(zhì)母細胞瘤中特異性表達及在膠質(zhì)母細胞瘤侵襲中的作用[D];山東大學(xué);2010年

6 張道福;激活素A/卵泡抑素在膠質(zhì)母細胞瘤中的表達及其對U87MG作用的研究[D];山東大學(xué);2010年

7 王春琳;MDM4在人腦膠質(zhì)母細胞瘤中的表達與功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 劉青林;IL-6及低氧對人腦膠質(zhì)母細胞瘤侵襲遷移的影響及機制研究[D];山東大學(xué);2011年

9 張博;石膽酸對膠質(zhì)母細胞瘤線粒體脂質(zhì)過氧化調(diào)控機制的研究[D];吉林大學(xué);2014年

10 丁麗娟;膠質(zhì)母細胞瘤干細胞的培養(yǎng)及其對TRAIL耐藥機制的研究[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬揚;膠質(zhì)母細胞瘤患者術(shù)前預(yù)后評分的研究[D];山東大學(xué);2012年

2 尹俊毅;普萘洛爾對膠質(zhì)母細胞瘤侵襲遷移的作用及調(diào)控機制[D];山東大學(xué);2012年

3 王華民;膠質(zhì)母細胞瘤中CD133陽性細胞的分布與組織微血管增殖的相關(guān)性[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

4 劉建熙;雄黃對Bcl-2和Bax在原代培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞中表達的影響[D];鄭州大學(xué);2011年

5 郭泳鈿;mTOR/P70S6K信號通路與膠質(zhì)母細胞瘤細胞系A(chǔ)172增殖及凋亡的實驗研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2010年

6 徐洋洋;照射后正常腦組織通過VEGF/VEGFR-SDF-1α/CXCR4信號通路促進膠質(zhì)母細胞瘤的侵襲[D];山東大學(xué);2013年

7 陳聰;膠質(zhì)母細胞瘤微環(huán)境中CXCL12/CXCR4蛋白的表達分布及其在惡性膠質(zhì)瘤侵襲遷移中作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

8 王計偉;替莫唑胺治療膠質(zhì)母細胞瘤的長期療效評價[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

9 趙昀;Mir-29a對膠質(zhì)母細胞瘤LN229及u251細胞株生長及侵襲性的影響研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

10 李偉光;三氧化二砷誘導(dǎo)膠質(zhì)母細胞瘤細胞分化作用的研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

本文編號：2563872