【摘要】：目的研究阿曼托雙黃酮對匹羅卡品點燃小鼠癲癇發(fā)作及海馬神經(jīng)元的影響，并探討其機制。 方法雄性KM小鼠，隨機分為5組：阿曼托雙黃酮預處理組（AP組）、阿曼托雙黃酮治療組（AT組）、丙戊酸鈉治療組（VPA組）、癲癇組（EP組）、空白對照組（Blank組）。給予阿曼托雙黃酮干預，并建立匹羅卡品癲癇小鼠模型，應用行為學觀測和腦電信號監(jiān)測、Nissel染色、TUNEL染色、免疫組化、Western-Blot等技術，了解AF對點燃小鼠癲癇發(fā)作以及海馬神經(jīng)元的影響。實驗數(shù)據(jù)均用x±s表示，采用完全隨機設計的方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗或Dunnett-t檢驗，以P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結果 1.動物行為學表現(xiàn)與腦電信號：Blank組小鼠無癲癇發(fā)作。注射匹羅卡品后，AT組、EP組與Blank組相比，腦電信號表現(xiàn)不穩(wěn)定，可見持續(xù)的癲癇樣放電，動物伴隨Ⅲ~Ⅴ級癲癇發(fā)作；AP組和VPA組小鼠均無癲癇大發(fā)作出現(xiàn)，偶見I~Ⅱ級發(fā)作，且發(fā)作時間明顯縮短，腦電信號表現(xiàn)與Blank組相似。 2. Nissl染色：AP組（121.40±8.72）和Blank組（125.20±9.96）小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)目無明顯減少，神經(jīng)元邊緣清晰，排列整齊，胞漿中可見尼氏小體。而AT組（84.60±6.19）、VPA組（70.25±4.34）和EP組（65.30±7.53）海馬CA1區(qū)則有明顯的神經(jīng)元丟失，神經(jīng)元排列松散、缺失嚴重，胞漿染色深淺不一，核仁消失或不明顯。 3.免疫組織化學：應用平均光密度值法檢測NF-κB p65表達量： AP組、AT組、VPA組、EP組和Blank組NF-κB p65的表達量分別為4204.26±116.30，15291.21±501.56，35599.58±2742.78，35710.87±2570.31，3185.12±251.35。AP組和Blank組與EP組、AT組、VPA組相比，NF-κB p65表達量的差異有統(tǒng)計學意義（P㩳0.01）。 4. TUNEL染色：SE后72小時，在AT組（7.40±1.57）、VPA組（12.75±2.61）和EP組（12.55±3.25）小鼠海馬的CA1區(qū)可見較多的TUNEL陽性細胞。而AP組（1.70±0.98）和Blank組（0.55±0.51）小鼠海馬CA1區(qū)幾乎看不到TUNEL陽性細胞，與EP組相比有統(tǒng)計學差異（P㩳0.01）。 5. Western Blot： AP組（0.49±0.13）與Blank組（0.33±0.12） NF-κB p65蛋白表達量無顯著差異，而AT組（0.71±0.09）、VPA組（1.18±0.19）、EP組（1.10±0.17）較Blank組均顯著升高（P㩳0.01），而AP組與Blank組統(tǒng)計學無顯著性差異（P0.05）。 結論阿曼托雙黃酮對癲癇模型具有顯著的預防驚厥發(fā)生和神經(jīng)保護作用，其作用機制與阿曼托雙黃酮抑制癲癇發(fā)生時的腦內(nèi)炎癥反應有關。
【圖文】：

LFP 信號分析。A：雙黃酮預處理組； B：雙黃酮預治療組； C：丙戊酸D：癲癇組；E：空白對照組。3. 免疫組織化學：NF-κB p65 免疫組化染色陽性結果為海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元胞核呈棕均光密度值法檢測各組 NF-κB p65 的表達量（圖 3）。阿曼托雙、阿曼托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組、癲癇組和空白對照組 N 達 量 分 別 為 4204.26±116.30 ， 15291.21±501.56 ， 35599.58±20.87±2570.31，3185.12±251.35。阿曼托雙黃酮預處理組與癲癇組酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組與空白對照組之間 NF-κB p6異有統(tǒng)計學意義（P㩳0.01），而阿曼托雙黃酮預處理組與空白對量統(tǒng)計學無顯著性差異（P㧐0.05）。提示阿曼托雙黃酮預處理能

小鼠海馬 CA1 區(qū) NF-κB p65 表達情況（免疫組化，×400）。A1：阿曼托雙黃組（AP），偶見散在 NF-κB p65 陽性細胞，且著色淺；A2：阿曼托雙黃酮治療組（較多量染色陽性細胞，著色較深，，呈棕褐色；A3：丙戊酸鈉治療組（VPA），量染色陽性細胞，著色較深，呈棕褐色；A4：癲癇組（EP），可見大量 NF-κB細胞，著色深，呈棕褐色；A5：空白對照組（Blank），未見陽性細胞。4. Nissl 染色：4.1 小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)改變：阿曼托雙黃酮預處理組和空白對照組 CA1 區(qū)神經(jīng)元邊緣清晰，排列整齊，胞漿中可見尼氏小體。與此相托雙黃酮治療組、丙戊酸鈉治療組和癲癇組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元、缺失嚴重，胞漿染色深淺不一，核仁消失或不明顯。阿曼托雙黃酮癲癇小鼠海馬神經(jīng)元的損傷有保護作用。
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742.1

【共引文獻】

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1 文帥;梁日生;楊衛(wèi)忠;;姜黃素神經(jīng)保護作用與癲癇[J];國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志;2010年01期

2 李艷菊;譚淑慧;夏春鳳;張鏞;杜怡峰;馬國詔;;NF-κB對Aβ_(1-42)誘導神經(jīng)元K_(ATP)亞基Kir6.2/SUR1表達的影響[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2013年10期

3 王U喅

本文編號：2540692