【摘要】：腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的顱內(nèi)原發(fā)性惡性腫瘤,占成人所有惡性腫瘤的2%,具有發(fā)病率高、預(yù)后差和復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)。盡管目前臨床上聯(lián)合手術(shù)切除病灶、術(shù)后放化療,甚至免疫治療和血管靶向治療等手段,在惡性腦膠質(zhì)瘤的治療方面已取得較大的進(jìn)展,但現(xiàn)有治療措施尚不能很好地控制惡性腫瘤的發(fā)展,亟需對(duì)其進(jìn)行深入研究,尋找新的治療靶點(diǎn),從而延長(zhǎng)患者生命直至完全治愈。因此,尋找腦膠質(zhì)瘤診斷和治療的新靶點(diǎn),可為其臨床診治提供理論基礎(chǔ),具有非常重要的意義。 惡性腫瘤的存活和生長(zhǎng)離不開(kāi)充足有效血液供應(yīng)。長(zhǎng)期以來(lái),人們一直認(rèn)為腫瘤血管重要來(lái)源于兩種途徑：血管發(fā)生(angiogenesis)和血管生成(vasculogenesis)。直到血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)概念的提出,人們才逐漸意識(shí)到腫瘤細(xì)胞尚有其他血供形式,這種血供不需要內(nèi)皮細(xì)胞的參與,但其內(nèi)可含有紅細(xì)胞和血漿,并且還可以與常規(guī)的內(nèi)皮血管相溝通,構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)狀的血液輸送循環(huán)。已經(jīng)有越來(lái)越多的的研究表明,不同來(lái)源的惡性腫瘤組織中均有血管生成擬態(tài)的存在,包括腦膠質(zhì)瘤中的髓母細(xì)胞瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。Maniotis等在首次定義血管生成擬態(tài)的同時(shí),探討了血管生成擬態(tài)與惡性黑色素瘤患者預(yù)后之間的關(guān)系,結(jié)果表明血管生成擬態(tài)與腫瘤轉(zhuǎn)移及患者死亡存在很強(qiáng)的關(guān)聯(lián),Kaplan-Meier生存分析顯示腫瘤中存在和缺乏血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu)的患者之間的曲線(xiàn)明顯分離。之后越來(lái)越多的研究證實(shí),血管生成擬態(tài)的存在標(biāo)志著患者預(yù)后不良。所以,對(duì)腦膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的深入研究和有針對(duì)性的治療具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 傳統(tǒng)的血管靶向治療惡性腫瘤旨在抑制內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而阻止腫瘤細(xì)胞的血液供應(yīng),達(dá)到遏制腫瘤生長(zhǎng)的目的。近年來(lái),血管靶向治療已逐漸被人們所接受。抗血管生成藥物阿瓦斯汀(貝伐單抗)曾經(jīng)成為一些腫瘤最流行的血管靶向治療藥物,其中就包括腦膠質(zhì)瘤。然而進(jìn)一步的研究表明該治療方案未能很有效的治愈腫瘤,甚至?xí)铀倌[瘤轉(zhuǎn)移并伴有明顯的缺氧形成和血管生成擬態(tài)的生成。和常規(guī)內(nèi)皮血管相比,血管生成擬態(tài)作為腫瘤的另一供血途徑,為腫瘤提供有效的營(yíng)養(yǎng)和代謝,甚至形成了抗化療作用并促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移。為了防止內(nèi)皮血管靶向治療后導(dǎo)致缺血缺氧,更容易形成血管生成擬態(tài)并加速轉(zhuǎn)移,有學(xué)者建議抗血管生成藥物(如貝伐單抗)小劑量、多次給藥效果更好。血管生成擬態(tài)的發(fā)現(xiàn)加深了人們對(duì)腫瘤微循環(huán)和轉(zhuǎn)移機(jī)制的認(rèn)識(shí),所以有學(xué)者提出,正是因?yàn)閮?nèi)皮血管靶向治療誘發(fā)了腫瘤內(nèi)部的逃逸機(jī)制,即無(wú)需內(nèi)皮細(xì)胞參與進(jìn)而形成的血管生成擬態(tài),這種情況下單純抗內(nèi)皮血管治療可能無(wú)意義,應(yīng)考慮聯(lián)合抗血管生成擬態(tài)治療。因此,血管靶向治療腫瘤不僅僅針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞,同時(shí)針對(duì)血管生成擬態(tài)可能效果更好,抑制血管生成擬態(tài)形成可能成為腫瘤血管靶向治療的新方向。 很多實(shí)驗(yàn)室均對(duì)血管生成擬態(tài)形成的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行了探討。到目前為止,已經(jīng)在不同的腫瘤中證實(shí)了一些分子參與了血管生成擬態(tài)的形成,包括HIF-1α, VE-cadherin, EphA2, MMP-14, MMP-2和層黏連蛋白等。隨著上述涉及血管生成擬態(tài)的相關(guān)分子被發(fā)現(xiàn),經(jīng)典的血管生成擬態(tài)信號(hào)傳導(dǎo)通路模型逐漸形成。在這個(gè)模型中,缺氧被認(rèn)為是血管生成擬態(tài)形成的“啟動(dòng)開(kāi)關(guān)(switch)",能夠直接調(diào)控EphA2的基因表達(dá)(通過(guò)HIF-1α)或間接調(diào)節(jié)VE-cadherin的表達(dá)(通過(guò)激活中介蛋白),然后推動(dòng)了其余的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。在血管生成擬態(tài)信號(hào)通路的最后階段,MMP-14的表達(dá)和活化能夠激活MMP-2, MMP-2再與活化的MMP-14結(jié)合,促進(jìn)層黏連蛋白分解,層黏連蛋白分解的片段釋放進(jìn)入細(xì)胞外微環(huán)境中收縮基質(zhì)形成所謂的管道,即導(dǎo)致血管生成擬態(tài)的形成,同時(shí)也增加腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。該經(jīng)典通路雖然能夠較好的闡釋血管生成擬態(tài)的形成過(guò)程,但是仍有部分機(jī)制還不清楚,尤其是腫瘤細(xì)胞是如何感受細(xì)胞外微環(huán)境的缺血缺氧進(jìn)而向細(xì)胞內(nèi)傳遞,以及通路中尚有一些分子如何向下傳導(dǎo)信號(hào)等一直未能明確。 腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是腫瘤最主要的特征,不斷增多的腫瘤細(xì)胞導(dǎo)致局部耗氧量增加,易造成腫瘤內(nèi)部缺氧微環(huán)境的形成。這在惡性程度高的實(shí)體腫瘤中表現(xiàn)的尤為突出。已證實(shí)缺氧能夠誘導(dǎo)肝癌、Ewing肉瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及惡性黑色素瘤中血管生成擬態(tài)的形成。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1, HIF-1)是存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)一種轉(zhuǎn)錄因子,其表達(dá)和穩(wěn)定受氧分壓調(diào)節(jié)。它以異二聚體形式存在,由一個(gè)a和β亞單位組成。其中,HIF-lα蛋白常氧狀態(tài)下極不穩(wěn)定,在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量維持在較低水平,易被蛋白酶水解,但能在缺氧條件下保持穩(wěn)定,是組織缺氧的內(nèi)在標(biāo)志。具體到血管生成擬態(tài),當(dāng)氧分壓較低時(shí),HIF-1α進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),在效應(yīng)基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子部位與缺氧反應(yīng)元件(hypoxia response elements, HRE)結(jié)合,進(jìn)而直接調(diào)節(jié)VEGF-A、 VEGFR、EphA2等基因的表達(dá)或者間接調(diào)控VE-cadherin和TF表達(dá)(通過(guò)激活中介蛋白)。由此可見(jiàn),缺氧能夠誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)形成和/或血管生成擬態(tài)相關(guān)基因的表達(dá),那么就不難想象為什么使用抗血管生成藥物治療可能促進(jìn)腫瘤的可塑性和轉(zhuǎn)移進(jìn)展。 除了上述機(jī)制以外,近年來(lái)還發(fā)現(xiàn)了多種與血管生成擬態(tài)形成有關(guān)的調(diào)控因子。研究發(fā)現(xiàn),組織因子途徑抑制因子-2(tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)的相關(guān)基因表達(dá)水平在高侵襲性黑色素瘤細(xì)胞中可明顯增高,同時(shí),將低度侵襲性黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)在含有重組TFPI-2的三維基質(zhì)中,低侵襲性腫瘤細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)換為高度侵襲性細(xì)胞并呈現(xiàn)出內(nèi)皮細(xì)胞的表型,產(chǎn)生一些血管樣通道；另外,環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)參與調(diào)節(jié)了乳腺癌血管生成擬態(tài)的形成。這些研究證實(shí),腫瘤血管生成擬態(tài)形成的分子機(jī)制十分復(fù)雜,是一個(gè)多因子參與調(diào)控、多路徑發(fā)展的過(guò)程。 對(duì)血管生成擬態(tài)形成機(jī)制進(jìn)行探討的同時(shí),有研究者也探索了一些有針對(duì)性的治療措施。目前針對(duì)血管生成擬態(tài)的抗腫瘤治療方案主要是通過(guò)抑制相關(guān)分子,然而,僅僅阻斷下游因子(如VE-cadherin, EphA2等)會(huì)造成腫瘤細(xì)胞內(nèi)部進(jìn)一步的缺氧,從而更有利于血管生成擬態(tài)的形成。所以對(duì)于血管生成擬態(tài)形成的起始因素HIF-1α的阻斷就顯得尤為重要。 TOR基因于1991年在酵母菌中作為雷帕霉素(rapamycin)的靶蛋白基因被發(fā)現(xiàn),之后人們?cè)诓溉閯?dòng)物細(xì)胞內(nèi)同樣發(fā)現(xiàn)了類(lèi)似結(jié)構(gòu)的哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)。mTOR是一種分子量為289kDa的絲氨酸-蘇氨酸激酶,是調(diào)控蛋白翻譯起始的一個(gè)中心分子,在包括細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和凋亡等許多生理過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用,并可能成為腦膠質(zhì)瘤治療的一個(gè)靶點(diǎn)。 研究表明,mTOR；號(hào)的過(guò)度激活在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起了非常重要的作用。mTOR信號(hào)途徑是最近新出現(xiàn)的細(xì)胞內(nèi)重要信號(hào)途徑,這一途徑在進(jìn)化上高度保守,主要通過(guò)控制蛋白合成來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)。在mTOR信號(hào)通路中,各種細(xì)胞信號(hào)包括促有絲分裂原、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞能量水平甚至缺氧均能對(duì)mTOR信號(hào)通路產(chǎn)生影響。已經(jīng)有研究證實(shí),mTOR與腫瘤血管生成密切相關(guān)。同時(shí),mTOR與血管生成擬態(tài)形成信號(hào)通路中多種分子之間的關(guān)系也很密切,尤其是參與缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factor, HIF)信號(hào)通路,在缺氧的作用下可促進(jìn)HIF-1α基因表達(dá)VEGF-A、VEGFR-1、EphA2等；最為重要的是,有學(xué)者使用mTOR抑制劑rapamycin抑制HIF信號(hào)時(shí)發(fā)現(xiàn)血管生成擬態(tài)形成同時(shí)受到抑制。由此可見(jiàn),mTOR與血管生成擬態(tài)形成的信號(hào)通路中多種分子之間存在交叉(crosstalk),然而其與血管生成擬態(tài)之間的確切關(guān)系尚不明確。如果能進(jìn)一步明確mTOR在腦膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)形成中所起作用、確定mTOR與血管生成擬態(tài)形成信號(hào)通路之間的相關(guān)性,既有利于確定血管生成擬態(tài)形成的新機(jī)制,又有望獲得新的治療靶點(diǎn)和方法,對(duì)于改善腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后具有非常重要的意義。 第一章腦膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的臨床意義及其與mTOR表達(dá)的相關(guān)性分析 目的驗(yàn)證腦膠質(zhì)瘤中血管生成擬態(tài)的存在,并初步探討mTOR與腦膠質(zhì)瘤中血管生成擬態(tài)的相關(guān)性。 方法收集南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院病理科127例腦膠質(zhì)瘤臨床病理組織,均來(lái)自2009至2012年在神經(jīng)外科行手術(shù)治療,術(shù)后病理診斷為膠質(zhì)瘤的病例標(biāo)本。手術(shù)后所有標(biāo)本都按標(biāo)準(zhǔn)程序包埋于石蠟中保存。所有病理標(biāo)本需進(jìn)行再次切片行免疫組織化學(xué)染色,然后由兩位對(duì)患者的臨床資料不知情的病理學(xué)專(zhuān)家根據(jù)2007年世界衛(wèi)生組織關(guān)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)方法,再次驗(yàn)證腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的診斷。病例具體的納入標(biāo)準(zhǔn)為：1、患者行手術(shù)治療,在手術(shù)前未經(jīng)放療和化療；2、術(shù)后病理確診為腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤；3、可以獲得完整的病人信息。整理病人的臨床資料包括性別、年齡、KPS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)、腫瘤大小和腫瘤分級(jí)等。將所有的病理切片進(jìn)行CD34-PAS染色,根據(jù)結(jié)果將患者分為兩組,分別是血管生成擬態(tài)陽(yáng)性組和血管生成擬態(tài)陰性組,利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,采用χ2檢驗(yàn)比較血管生成擬態(tài)陽(yáng)性和陰性?xún)山M患者的臨床病理特點(diǎn)包括性別、年齡、KPS評(píng)分、腫瘤大小、病理分級(jí)和mTOR表達(dá)水平等的差異,進(jìn)一步分析血管生成擬態(tài)形成與mTOR是否有關(guān)聯(lián)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析過(guò)程中,P0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 結(jié)果127例腦膠質(zhì)瘤中,共有34例發(fā)現(xiàn)有血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu),占全部的26.8%。和低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤相比,血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu)在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中較為常見(jiàn)(Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)分別為41.2%和38.2%,而Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)分別為0.0%和20.6%),經(jīng)Mann-Whitney非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果證實(shí),血管生成擬態(tài)陽(yáng)性和陰性?xún)山M中腫瘤分級(jí)有顯著差異(Z=2.902, P=0.004),且血管生成擬態(tài)陽(yáng)性組的病理級(jí)別較高。血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu)較多的腦膠質(zhì)瘤組織切片中mTOR表達(dá)明顯高于血管生成擬態(tài)陰性組(-/+為3.0%,++為52.9%,而+++為44.1%)。經(jīng)Mann-Whitney非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果表明血管生成擬態(tài)陽(yáng)性和陰性?xún)山M中mTOI表達(dá)水平有顯著差異(Z=7.748,P=0.006),且血管生成擬態(tài)陽(yáng)性組的mTOR表達(dá)水平較高。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明血管生成擬態(tài)與腦膠質(zhì)瘤中mTOR表達(dá)水平有關(guān)(P0.05)。 結(jié)論本研究驗(yàn)證了血管生成擬態(tài)存在于腦膠質(zhì)瘤中；提示血管生成擬態(tài)不僅與腫瘤分級(jí)呈正相關(guān),也與腦膠質(zhì)瘤中mTOI表達(dá)水平有關(guān),而與患者的一般臨床病理特征,如性別、年齡、KPS評(píng)分、腫瘤大小等無(wú)關(guān)。 第二章缺氧及mTOR特異性阻斷劑rapamycin對(duì)惡性膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)形成的影響 目的建立腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87-MG的三維培養(yǎng)模型,觀(guān)察缺氧及mTOR特異性阻斷劑rapamycin對(duì)其血管生成擬態(tài)的體外形成的影響。 方法用三維培養(yǎng)及管道計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)常氧及缺氧條件下U87-MG細(xì)胞體外血管生成擬態(tài)形成能力的差別；用不同濃度的mTOR特異性阻斷劑rapamycin處理U87-MG細(xì)胞,觀(guān)察其對(duì)血管生成擬態(tài)的體外形成的影響,利用Western Blotting檢測(cè)常氧及缺氧條件下mTOR被抑制后HIF-1α的表達(dá)差異。 結(jié)果惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成類(lèi)似于內(nèi)皮細(xì)胞的管狀結(jié)構(gòu),但該結(jié)構(gòu)在常氧條件下欠完整,部分管腔沒(méi)有閉合。而在缺氧條件下能夠形成更為完整的管腔結(jié)構(gòu)。常氧條件下,mTOR特異性阻斷劑rapamycin均能夠抑制U87-MG在體外形成的血管生成擬態(tài),并且隨著rapamycin濃度的逐漸增加,惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG的血管生成擬態(tài)形成能力也逐漸減弱,且相互之間具有顯著性差異(F=222.341,P=0.000)；同時(shí),缺氧條件下也能夠得到類(lèi)似的結(jié)果(F=393.436,P=0.000)。Western Blotting結(jié)果顯示,rapamycin既能夠抑制常氧條件下也能夠抑制缺氧條件下mTOR及HIF-1α的表達(dá),通過(guò)對(duì)目的蛋白條帶的灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,可以發(fā)現(xiàn)常氧條件下mTOR(F=198.179,P=0.000)和HIF-1α(F=60.991, P=0.000)以及缺氧條件下mTOR(F=365.728,P=0.000)和HIF-1α(F=60.478, P=0.000)相互之間均具有顯著性差異。 結(jié)論通過(guò)體外三維培養(yǎng),腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87-MG能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成類(lèi)似于HUVEC的圓孔狀管腔結(jié)構(gòu),從而從體外實(shí)驗(yàn)的角度證實(shí)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有形成血管生成擬態(tài)的能力；缺氧能夠促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87-MG形成血管生成擬態(tài),mTOR能夠通過(guò)HIF-1α信號(hào)通路影響血管生成擬態(tài)的形成。 第三章mTOR參與惡性膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的分子生物學(xué)機(jī)制研究 目的利用mTOR基因干擾技術(shù)研究mTOR siRNA對(duì)U87-MG血管生成擬態(tài)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。 方法設(shè)計(jì)并合成4條mTOR siRNA,從中篩選出一條干擾效率最高的mTOR siRNA;利用Western Blotting技術(shù)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組血管生成擬態(tài)相關(guān)基因的表達(dá)差異。 結(jié)果成功設(shè)計(jì)、合成并篩選出一條干擾效率最高的mTOR siRNA；利用mTOR siRNA同樣能夠抑制常氧和缺氧條件下的mTOR及HIF-1α的表達(dá)(P0.01),通過(guò)對(duì)目的蛋白條帶的灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,空白組及陰性對(duì)照組相關(guān)蛋白的表達(dá)之間無(wú)明顯差異(P0.05)。血管生成擬態(tài)相關(guān)信號(hào)通路中的分子(如MMP-14、MMP-2)的表達(dá)也同樣能被干擾。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在缺氧條件相對(duì)于常氧條件下,腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87-MG細(xì)胞遷移能力增強(qiáng),而經(jīng)mTOR siRNA干擾后在常氧和缺氧條件下腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87-MG細(xì)胞遷移能力均明顯減弱。 結(jié)論利用基因干擾技術(shù)沉默mTOR表達(dá)之后,無(wú)論是常氧還是缺氧條件下,HIF-1α及血管生成擬態(tài)相關(guān)基因(如MMP-14和MMP-2)的表達(dá)均被抑制；mTOR是血管生成擬態(tài)信號(hào)通路中的一個(gè)很重要的分子,其通過(guò)調(diào)控HIF-1α參與了膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的形成過(guò)程。
【圖文】：
我們選取惡性膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞株（U87-MG)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)研究。常規(guī)培養(yǎng)時(shí)，，如圖2-1所示，HUVEC為貼壁生長(zhǎng)，呈鋪路石狀鑲嵌排列。細(xì)胞為扁平多角形，邊界清楚，胞i}豐富。細(xì)胞核為圓形或橢圓形，核內(nèi)染色質(zhì)稀疏空亮，可見(jiàn)一兩個(gè)核仁。而U87-MG也是貼壁生長(zhǎng)，但不規(guī)則排列。細(xì)胞多為長(zhǎng)梭形，邊界清晰。三維培養(yǎng)下，HUVEC能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成大小不等的圓孔狀管腔結(jié)構(gòu)，而U87-MG同樣能夠在Matrigel基質(zhì)膠上形成相似的管狀結(jié)構(gòu)，從而證實(shí)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有類(lèi)似于內(nèi)皮細(xì)胞形成供血管道的能力。常規(guī)培養(yǎng) 三維培養(yǎng)圖2-1腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG經(jīng)3D培養(yǎng)后形成的VM結(jié)構(gòu)（40X)Fig.2-1 U87-MG can form VM structures similar to human umbilical vein endothelial cells by3D culture (40x).3.2缺氧對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG血管生成擬態(tài)的影響為了確定mTOR信號(hào)是否通過(guò)激活缺氧信號(hào)通路參與血管生成擬態(tài)的形成，我們利用CoCh模擬缺氧條件
但是，當(dāng)加入CoCl2之后，U87-MG在Matrigel基質(zhì)膠上能夠形成更為完整的三維管道結(jié)構(gòu)（圖2-2)。對(duì)照組 CoCh組__圖2-2腦膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞株分別在缺氧條件下（CoCl2組）比常氧條件下（對(duì)照組）VM的形成情況（100X)Fig.2-2 U87-MG formed more complete tube-like structures under hypoxic conditions (C0CI2group) compared to the control group (under normoxic conditions) (100 X),3.3各組U87-MG常氧條件下的三維培養(yǎng)及管道計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為了進(jìn)一步證實(shí)mTOR與血管生成擬態(tài)的關(guān)系，我們檢測(cè)了mTOR特異性阻斷劑rapamycin能否抑制U87-MG在體外形成的血管生成擬態(tài)管狀結(jié)構(gòu)。將細(xì)胞分為三組，分別是：U87-MG陰性對(duì)照組，加入50nM Rapamycin組和加入lOOnMRapamycin組。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著rapamycin濃度的逐漸增加，惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87-MG的血管生成擬態(tài)形成能力也明顯減弱，可見(jiàn)mTOR可能參與了血管生成擬態(tài)的形成。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果也能夠說(shuō)明，加入rapamycin的U87-1VIG在Matrigel基質(zhì)膠上形成的總節(jié)點(diǎn)數(shù)明顯減少
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【共引文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 王修軍;莢衛(wèi)東;許戈良;劉文斌;任維華;李建生;張傳海;馬金良;余繼海;葛勇勝;;Nodal在肝細(xì)胞癌組織的表達(dá)與意義[J];實(shí)用肝臟病雜志;2012年01期
2 謝婧雯;劉曉燕;;Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在心血管系統(tǒng)中作用的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2013年30期
3 Shi-Yong Sun;;Impact of genetic alterations on mTOR-targeted cancer therapy[J];Chinese Journal of Cancer;2013年05期
4 Xiao-Yu Yang;Feng Xie;Ran Tao;Ai-Jun Li;Meng-Chao Wu;;Treatment of liver metastases from uveal melanoma: a retrospective single-center analysis[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2013年06期
5 崔永峰;史杪;張強(qiáng);潘桂蘭;王強(qiáng);;腫瘤血管生成擬態(tài)機(jī)制研究進(jìn)展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期
6 劉見(jiàn)榮;管宇;可飛;李文;羅梅宏;侯風(fēng)剛;;人結(jié)腸癌細(xì)胞中血管生成擬態(tài)與腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的關(guān)系[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年06期
7 陳家璧;莊偉;李毅寧;;乏氧狀態(tài)對(duì)膀胱癌全膀胱切除術(shù)后患者預(yù)后的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年10期
8 Yin-Sheng Chen;Zhong-Ping Chen;;Vasculogenic mimicry:a novel target for glioma therapy[J];Chinese Journal of Cancer;2014年02期
9 王德勇;徐慧高;;Akt/mTOR信號(hào)通路與口腔鱗狀細(xì)胞癌的研究進(jìn)展[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年11期
10 艾婷;周軍;;乳腺癌血管生成擬態(tài)與超聲分子影像學(xué)相關(guān)性的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年24期
相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條
1 朱玉德;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其與膠質(zhì)瘤血管發(fā)生的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2013年
2 趙翠榮;吉西他濱衍生物SL-01和吲唑雙芳基脲類(lèi)化合物抗癌活性研究[D];山東大學(xué);2013年
3 蔡林鴻;PTEN抑制劑對(duì)脊髓損傷神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2013年
4 羅慧;AKT/β-catenin/FoxO3a信號(hào)通路在亞硒酸鈉誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡中機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年
5 薄海;前列消ve湯治療激素難治性前列腺癌及調(diào)控PI3K/Akt傳導(dǎo)通路的分子機(jī)制[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2013年
6 張浩然;抑制自噬對(duì)骨髓瘤細(xì)胞藥物干預(yù)敏感性及DEPTOR在調(diào)節(jié)自噬和凋亡中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年
7 孫丹;Slug對(duì)肝癌細(xì)胞干細(xì)胞特性及VM形成影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年
8 張飛;mTORC2/Rictor調(diào)控非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年
9 徐健;胃癌血管生成分子探針的構(gòu)建及活體MR成像研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年
10 劉亮;PREX2a在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對(duì)其生物學(xué)行為影響[D];中南大學(xué);2013年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 陳啟斌;Nodal基因干擾對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為及血管生成擬態(tài)的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年
2 王修軍;肝細(xì)胞癌中Nodal的表達(dá)及意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年
3 周騰;肝細(xì)胞癌血管生成擬態(tài)形成機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年
4 孫巖;沖魚(yú)軟骨多糖對(duì)小鼠黑色素瘤血管生成擬態(tài)的研究[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2012年
5 楊斌;mTOR信號(hào)通路和survivin在人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[D];鄭州大學(xué);2013年
6 吳丹;人源性乳腺微環(huán)境小鼠模型的移植物功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年
7 蘇會(huì)玲;c-Met和p-Akt在胃癌中的表達(dá)及其與胃癌血管生成擬態(tài)的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年
8 徐小燕;葡萄胎組織中ING4蛋白表達(dá)及與微血管密度的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年
9 鮑美美;非洲防己堿抗人轉(zhuǎn)移性骨肉瘤U-2OS細(xì)胞增殖和新生血管形成的作用及其機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2013年
10 李夢(mèng)婷;鞘氨醇激酶1對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞血管生成擬態(tài)的影響及其機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年
本文編號(hào)：
2535520
