發(fā)布時(shí)間：2019-05-31 17:51

【摘要】：目的：觀察體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行糖-氧剝奪處理和L-NAME干預(yù)后培養(yǎng)基中一氧化氮（NO）含量的變化，以及對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞caspase-3的影響。 方法：取新生大鼠（24h）大腦皮層組織，消化后種植在有多聚-L-賴(lài)氨酸包被的六孔培養(yǎng)皿中，以含10%胎牛血清DEME-HG液種植，4-8小時(shí)后換用含B27的Neurobasal培養(yǎng)基維持飼養(yǎng)。于不同時(shí)間在倒置相差顯微鏡下觀察形態(tài)變化，分別采用免疫組化對(duì)神經(jīng)元特異性標(biāo)記物NSE進(jìn)行鑒定。培養(yǎng)至第7天時(shí)，選取生長(zhǎng)良好、均一的神經(jīng)元細(xì)胞隨機(jī)分為3組。分別為：正常對(duì)照組，氧-糖剝奪建立細(xì)胞損傷模型組，細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂。采用硝酸還原法檢測(cè)各組培養(yǎng)基中NO的含量，Western-blot檢測(cè)caspase-3、NSE蛋白表達(dá)，半定量RT-PCR檢測(cè)caspase-3mRNA表達(dá)。 結(jié)果：1.成功原代培養(yǎng)新生大鼠皮層神經(jīng)元，經(jīng)NSE免疫組化鑒定神經(jīng)元純度達(dá)90%以上。 2.氧-糖剝奪致神經(jīng)元損傷組培養(yǎng)基中NO含量(1.77±0.17)umoL/L，與正常對(duì)照組培養(yǎng)基中NO的含量(0.93±0．15)umoL/L和細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組培養(yǎng)基中含量(0.99±0.10)umol／L比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；正常對(duì)照組培養(yǎng)基中NO的含量與細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組培養(yǎng)基中含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3.氧-糖剝奪致神經(jīng)元損傷組中神經(jīng)元的caspase-3蛋白表達(dá)和mRNA明顯高于正常對(duì)照組和細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組中的神經(jīng)元的caspase-3蛋白表達(dá)和mRNA(p0.05)；正常對(duì)照組中caspase-3蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)與細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組中caspase-3蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 4.氧-糖剝奪致神經(jīng)元損傷組中神經(jīng)元的NSE蛋白表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組和細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組中的神經(jīng)元的NSE表達(dá)(p0.05)。正常對(duì)照組中NSE蛋白表達(dá)與細(xì)胞損傷模型+L-N-硝基精氨酸甲脂組中NSE蛋白表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論：1.采用無(wú)血清原代培養(yǎng)新生SD大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞，差速貼壁進(jìn)行純化，本方法簡(jiǎn)單易行神經(jīng)元純度較高，可作為神經(jīng)元體外培養(yǎng)的良好模型用于以后的研究。 2.氧-糖剝奪可導(dǎo)致體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元細(xì)胞一氧化氮（NO）產(chǎn)生過(guò)量，并造成神經(jīng)元的損傷。 3.合成NO的關(guān)鍵酶NOS的抑制劑L-N-硝基精氨酸甲脂（L-NAME）能抑制NOS活性，，減少NO的產(chǎn)生，降低caspase-3表達(dá)，從而減弱氧-糖剝奪致皮層神經(jīng)元的損傷作用，起到神經(jīng)保護(hù)作用。
[Abstract]:Aim: to observe the changes of nitric oxide (no) (NO) content in culture medium after glucose-oxygen deprivation and L-NAME intervention in vitro and its effect on caspase-3 of neuron cells. Methods: the cerebral cortex of neonatal rats (24 h) was digested and planted in a six-hole petri dish coated with polyL-lysine and planted with 10% fetal bovine serum DEME-HG solution. After 8 hours, Neurobasal medium containing B27 was used to maintain feeding. The morphological changes were observed under inverted phase contrast microscope at different time, and the neuron specific marker NSE was identified by immunohistochemistry. On the 7th day, the well-growing and homogeneous neurons were randomly divided into three groups. In the normal control group, the cell injury model group was established by oxygen-glucose deprivation, and the cell injury model L 鈮

本文編號(hào)：2489906