【摘要】：第一部分HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤基因環(huán)境的關(guān)系研究背景:腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,目前的治療理念是以手術(shù)治療為主、放射治療及化療作為輔助治療手段的綜合治療。但是,由于人腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)部位的特殊性以及其侵潤(rùn)性生長(zhǎng)的臨床特點(diǎn),治療效果并不理想,膠質(zhì)瘤的高復(fù)發(fā)率及高死亡率使其成為預(yù)后最差的腫瘤。毫無(wú)疑問(wèn),對(duì)于膠質(zhì)瘤發(fā)病因素及發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)有助于膠質(zhì)瘤的有效預(yù)防以及尋找最新的腫瘤靶向治療措施,從而改善患者的預(yù)后。已經(jīng)證實(shí)某些基因突變與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的增高具有顯著相關(guān)性。HLA-DMA與人免疫系統(tǒng)聯(lián)系密切,很多惡性腫瘤都是由免疫監(jiān)視障礙所引起,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HLA-DMA基因與很多惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān),這些研究結(jié)果提示我們,HLA-DMA的基因突變及其多態(tài)性可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)系,但是,這方面的研究目前未見(jiàn)報(bào)道。多種高劑量的電離輻射是目前唯一被證實(shí)的膠質(zhì)瘤的環(huán)境危險(xiǎn)因素,但是電離輻射暴露的人群中僅僅有很少數(shù)者最終發(fā)生了膠質(zhì)瘤。環(huán)境因素和膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系以及環(huán)境因素是通過(guò)什么途徑誘發(fā)了膠質(zhì)瘤的發(fā)生?其機(jī)制仍然有待于進(jìn)一步探討。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為,基因-環(huán)境交互作用促成了基因突變的獲得,從而推進(jìn)了多階段致癌。研究表明,基因—環(huán)境交互作用可能和膠質(zhì)瘤相關(guān),但是迄今為止還沒(méi)有關(guān)于HLA-DMA基因多態(tài)性-環(huán)境因素交互作用與膠質(zhì)瘤易感性關(guān)系方面的研究。為了發(fā)現(xiàn)中國(guó)漢族人群HLA-DMA基因多態(tài)性及其與環(huán)境的交互作用對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響,我們應(yīng)用單純病例研究方法,探索了HLA-DMA rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性及其與環(huán)境因素交互作用對(duì)膠質(zhì)瘤易感性的影響,力求從一個(gè)側(cè)面探究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)理。研究目的：1.歸納分析與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的環(huán)境因素。2.檢測(cè)兩組受試者HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布。3.研究HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。4.探討HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境因素交互作用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系研究方法：1.收集兩組受試者的基本信息,應(yīng)用卡方檢驗(yàn)探討與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的環(huán)境暴露因素。2.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布。3.檢測(cè)兩組病人基因型的分布與HWE(哈迪-溫伯格平衡定律)的一致性。4.應(yīng)用Logistic回歸分析評(píng)估HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。5.通過(guò)多因素回歸分析研究HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境因素交互作用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。研究結(jié)果：1.與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的基本因素分析我們統(tǒng)計(jì)了90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人受試者在年齡、性別、是否具有吸煙史、是否具有飲酒史、是否具有膠質(zhì)瘤家族史、是否具有化學(xué)毒素接觸史以及是否具有電離輻射暴露史方面的信息,并對(duì)相關(guān)信息進(jìn)行χ2檢驗(yàn),發(fā)現(xiàn)兩組病人在年齡、性別、吸煙及飲酒史方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)；在膠質(zhì)瘤家族史方面,病例組(10例,11.1%)明顯高于對(duì)照組(1例,0.9%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.002)；關(guān)于環(huán)境因素,與對(duì)照組相比(0.9%),病例組有10%的病人具有化學(xué)毒素接觸史,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.003),由于放療(4例)和職業(yè)暴露(9例),病例組共13例病人接觸了電離輻射,兩組病人遭受電離輻射的比例具有顯著性差異(病例組14.4%,對(duì)照組1.8%,p=0.001)。表明膠質(zhì)瘤家族史、化學(xué)毒素及電離輻射與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)性。2. HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布我們應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)了90例膠質(zhì)瘤病人及110例健康人HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)的多態(tài)基因型分布,共檢測(cè)出三種C/T多態(tài)基因型,分別為CC、CT及TT基因型,其中病例組CC基因型40例,CT基因型38例,TT基因型12例,CT+TT基因型共50例；對(duì)照組CC基因型68例,CT基因型36例,TT基因型6例,CT+TT基因型共42例。3.兩組病人的基因型分布與HWE的一致性應(yīng)用卡方檢驗(yàn)計(jì)算兩組病人的CC、CT以及TT等基因型分布頻率情況,發(fā)現(xiàn)對(duì)照組基因型頻率分布符合HWE平衡定律(χ2=0.1822,p=0.6695)病例組基因型分布也與HWE平衡相一致(χ2=0.3809,p=0.5371),提示兩組病人的HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)基因型分布具有很好的群體代表性。4. HLA-DMArs 1063478位點(diǎn)多態(tài)性與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系通過(guò)單變量回歸分析發(fā)現(xiàn),TT突變純合子基因型的頻率,病例組高于對(duì)照組,膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加了3.40倍(OR=3.400,95% CI=1.184-9.764)。雜合子基因型CT可能是膠質(zhì)瘤發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素,但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著關(guān)聯(lián)(OR=1.794,95% CI=0.985-3.271)。CT+TT基因型比CC基因型更有膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.204,95% CI=1.149-3.566)。通過(guò)多元回歸分析可以發(fā)現(xiàn),在校正了年齡、性別、有無(wú)吸煙史、有無(wú)膠質(zhì)瘤家族史、有無(wú)化學(xué)毒素及電離輻射接觸史后,得出校正的OR,CT+TT基因型仍然增加了膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(校正OR=1.984,95％CI=1.084-3.630).5.HLA-DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性-環(huán)境因素交互作用與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系9例有化學(xué)毒素接觸史的膠質(zhì)瘤病人中,有2例表現(xiàn)為純合子CC基因型,有7例表現(xiàn)為CT+TT突變基因型,通過(guò)多因素回歸分析,發(fā)現(xiàn)化學(xué)毒素雖是膠質(zhì)瘤發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素,但是HLA.DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與化學(xué)毒素沒(méi)有交互作用(p=0.289,OR=3.093,95%CI=0.065.15.801)；13例有電離輻射暴露史的病人中,有2例表現(xiàn)為純合子CC基因型,有11例表現(xiàn)為CT+TT突變基因型,通過(guò)多因素回歸分析,發(fā)現(xiàn)HLA.DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與電離輻射暴露具有交互作用,而且這種交互作用顯著增加了膠質(zhì)瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(p=0.033,OR=5.359,95％CI=1.13.25.797).結(jié)論：1.膠質(zhì)瘤家族史、化學(xué)毒素及電離輻射與膠質(zhì)瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)性。2.HLA.DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性和膠質(zhì)瘤的易感性具有顯著相關(guān)性。3.HLA.DMA基因rs1063478位點(diǎn)多態(tài)性與電離輻射具有交互作用,這種交互作用使膠質(zhì)瘤易感性顯著增加。第二部分mTOR信號(hào)通路與高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者預(yù)后和增殖指數(shù)的相關(guān)性研究研究背景神經(jīng)膠質(zhì)瘤是成人中最常見(jiàn)的原發(fā)性腦內(nèi)腫瘤,根據(jù)腫瘤的組織形態(tài)學(xué)特征膠質(zhì)瘤分為四個(gè)等級(jí),其中Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤屬于高級(jí)別膠質(zhì)瘤,其治療原則為：以顯微鏡下最大程度的腫瘤手術(shù)切除為主,放射治療以及化療作為術(shù)后的輔助治療措施。雖然經(jīng)歷了規(guī)范化的綜合治療,高級(jí)別膠質(zhì)瘤的預(yù)后仍差,文獻(xiàn)報(bào)道其生存期14周～2年,平均生存時(shí)間1年。按照高級(jí)別膠質(zhì)瘤的WHO組織病理學(xué)分級(jí)判斷患者預(yù)后,是目前最重要的、為廣大神經(jīng)外科醫(yī)生廣泛接受的手段,然而臨床中也發(fā)現(xiàn),病理學(xué)分級(jí)相同的個(gè)體間預(yù)后有較大差異,這與WHO膠質(zhì)瘤分級(jí)的主觀性有關(guān)系,同一病理標(biāo)本不同的病理學(xué)專家很可能得出不同的診斷,而且膠質(zhì)瘤存在異質(zhì)性,神經(jīng)外科醫(yī)生留取的標(biāo)本不一定能反映腫瘤的真實(shí)情況,綜合上面兩個(gè)因素,病理學(xué)專家根據(jù)組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)得出的診斷有時(shí)會(huì)出現(xiàn)偏差,根據(jù)病理診斷得出的膠質(zhì)瘤分級(jí)也相應(yīng)可能出現(xiàn)一些偏差,從而影響了病人預(yù)后的判斷。Roversi G等認(rèn)為高級(jí)別膠質(zhì)瘤的預(yù)后常常是由其重要的生物標(biāo)記決定的,探討應(yīng)用基于分子生物學(xué)的客觀性指標(biāo)推斷腫瘤的臨床分級(jí)及預(yù)后是非常有必要的。近年來(lái),mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等的聯(lián)系受到廣泛的重視。有證據(jù)顯示mTOR信號(hào)通路與膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)密切相關(guān),既然mTOR信號(hào)通路與膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)密切相關(guān),而膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)又與病人的預(yù)后有密切相關(guān)性,那么我們有理由相信mTOR信號(hào)通路相關(guān)靶蛋白的表達(dá)水平與高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后應(yīng)該是相關(guān)的,目前這方面的研究很少,這正是本課題重點(diǎn)研究的內(nèi)容之一。Ki-67基因是一種與增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原,因此,Ki-67可作為反映細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞周期狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。Ki-67已經(jīng)被證明是多種惡性腫瘤預(yù)后評(píng)估的免疫組化生物標(biāo)記,比如乳腺癌、胃癌等。研究表明,Ki-67的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖活性及腫瘤惡性程度相關(guān),那么Ki-67是否是高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的獨(dú)立因素哪?本課題將就此給予研究。目前,聯(lián)合Ki-67與mTOR信號(hào)通路相關(guān)靶蛋白對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的研究鮮有報(bào)道,本研究通過(guò)對(duì)60例高級(jí)別膠質(zhì)瘤的組織標(biāo)本進(jìn)行p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K、Ki-67的免疫組化分析,并結(jié)合多種臨床因素探討了其與患者預(yù)后的關(guān)系。研究目的：1.檢測(cè)p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K及Ki-67在不同級(jí)別高級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平。2.探討mTOR信號(hào)通路相關(guān)靶蛋白對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。3.探討Ki-67對(duì)不同級(jí)別高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。研究方法：1.根據(jù)病歷資料及隨訪記錄,記錄所有研究對(duì)象的年齡、性別、術(shù)前Karnofsky評(píng)分、無(wú)進(jìn)展生存期和生存期。2.取所有患者的腫瘤組織蠟塊,切片行p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K、Ki-67免疫組化染色,根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行綜合分析,判定p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K及Ki-67的表達(dá)情況。3.應(yīng)用Kaplan-Meier單因素分析法對(duì)包括p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K、 Ki-67及病理級(jí)別等在內(nèi)的12個(gè)預(yù)后影響因素進(jìn)行生存分析,研究各預(yù)后影響因素對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。4.對(duì)單因素分析中p0.05者進(jìn)行COX回歸多因素分析,進(jìn)一步探討相關(guān)因素對(duì)高級(jí)別膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響。研究結(jié)果：1.在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和Ki-67的免疫組化染色呈中度陽(yáng)性,在膠質(zhì)瘤Ⅳ級(jí)中,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和Ki-67的免疫組化染色呈強(qiáng)陽(yáng)性。p-AKT在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性率為79.2%(19/24),Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性率為75.0%(27/36)；p-mTOR在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性率為75.0%(18/24),Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性率為72.2%(26/36)；p-p70S6K在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性率為70.8%(17/24),Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性率為80.5%(29/36)；Ki-67在膠質(zhì)瘤Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性率為70.8%(17/24),Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性率為69.4%(25/36)。2.應(yīng)用Kaplan-Meier單因素分析法對(duì)包括p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K、 Ki-67及病理級(jí)別等在內(nèi)的12個(gè)預(yù)后影響因素進(jìn)行生存分析,發(fā)現(xiàn)p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K, Ki-67的表達(dá)情況與總生存率的關(guān)系具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.對(duì)單因素分析中p0.05者進(jìn)行COX回歸多因素分析,患者p-AKT (low, high)及Ki-67 (low, high)與生存期均無(wú)相關(guān)性(P0.05);p-mTOR (low, high)及p-p70S6K (low, high)與生存期有相關(guān)性(p0.05)。4. p-mTOR陽(yáng)性率與無(wú)進(jìn)展生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.838,p0.001),與生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.777, P0.001). p-p70S6K陽(yáng)性率與無(wú)進(jìn)展生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.509,p0.001),與生存期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.531,p0.001)。5.2組p-mTOR、p-p70S6K的表達(dá)情況與無(wú)進(jìn)展生存期和生存期的關(guān)系分別制作成Kaplan-Meier生存曲線,兩者之間無(wú)進(jìn)展生存期對(duì)比有顯著性差異(p0.05),生存期對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1.mTOR信號(hào)通路中p-mTOR及p-p70S6K的表達(dá)水平與高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者預(yù)后密切相關(guān),p-mTOF及p-p70S6K可作為對(duì)膠質(zhì)瘤預(yù)后判斷的客觀性指標(biāo)。2.Ki-67表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2451820